培养基的制备及霉菌的观察.ppt
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1、 常用培养基的制备、灭菌与消毒 实验目的:1.了解培养基的配制原理 2.掌握配制培养基的一般方法和步骤 培养基是人工配制的,适合微生物生长繁殖或产生代谢产 物的营养基质 原则:目的明确 ;营养协调;控制PH、渗透压等条件;经济 节约 方法:查阅文献;精心设计;试验比较 步骤:称量、熔化、调PH、过滤、分装、 加塞、包扎、灭菌、冷却、无菌检查 培养基种类: 碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐、水 一、按成份的不同划分 天然培养基、合成培养基、半合成培养基 二、按培养基的物理状态划分 固体培养基、液体培养基、半固体培养基 三、按培养基用途划分 基础培养基、加富培养基、鉴别培养基、 选择培养基 消毒
2、与灭菌 消毒:消灭病原菌和有害微生物的营养体 灭菌:杀灭一切微生物的营养体,芽胞和孢子。 方法: 物理的方法:加热、过滤、辐射 化学的方法:用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要 破坏细菌代谢机能。如重金属离子,磺胺类药物及 抗生素等。 加热法: 干热法:火焰灼烧灭菌和热空气灭菌 1、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等 ,试管口和瓶口,涂布用玻璃棒。 2、热空气灭菌利用高温干燥空气(160170C)加热灭菌 12h,适用于玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白质 变性,与水的含量有关,当环境和细胞含水量越大,凝固 越快。 3、注意事项: 1)培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法; 2)温度控
3、制在180; 3)物品不能太挤; 4)温度降至70时才开箱门。 湿热法 : 原理:因为湿热中菌体吸水,蛋白质容易凝固 ,因蛋白质含水量增加,所需凝固温度降低; 湿热的蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下 干热好。 高压蒸汽灭菌法: 1、设备:高压灭菌锅 2、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同 有所变化。 3、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭 菌,也可用于玻璃器皿的灭菌。 4、注意事项: 1)冷空气彻底排除;2)加水;3)压力降 为“0”时方可打开。 在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时,灭菌锅内 冷空气的排除是否完全极为重要,因为空 气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压,所以, 当水蒸气中含有空气时,在同一
4、压力下, 含空气蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。 灭菌锅内留有不同分量空气时,压力与温 度的关系见表2 常压蒸汽灭菌: 对于不宜用高压蒸汽灭菌的培养基如明胶培养基、 牛乳培养基,含糖培养基等可采用此法。彻底灭菌则采 用间歇灭菌方法。 煮沸灭菌法: 适用注射器和解剖器皿,时间1015min, 超高温杀菌 135-150C和2-8s对牛乳和其它液态食品灭菌。 优点 :保持食品价值和营养成分。 过滤除菌: 原理:介质在有压力时阻隔微生物。 适用范围:许多材料如血清、抗生素及糖溶液采用此 法。 设备:蔡氏过滤器,滤膜过滤器。 优缺点:不破坏培养基成分,只适用少量滤液。 注意事项:1、压力适当; 2、无菌
5、条件下进行; 3、防止渗透现象。 辐射灭菌: 原理:紫外线波长在200300nm,具有杀菌作用,以 265-266杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收;可产 生臭氧和过氧化氢。杀菌效力与强度和时间的乘积成正 比。 缺点:穿透力不大。距照射物1.2m为宜。 应用:无菌室,医院。 注意事项:对眼睛和皮肤有刺激作用。 化学药品灭菌: 原理:应用化学制剂破坏细菌代谢机能。 杀菌剂如重金属离子; 抑菌剂如磺胺类及多数抗生素。 注意:与药品的浓度高低,时间长短,微生物种 类以及微 生物所处的环境有关。 常用化学杀菌剂有:乙醇、醋酸、石碳酸 福尔马林、升汞、高锰酸钾、新洁尔灭等 分离与纯化:从混杂的微生物群
6、体中获得只含 某一种或某一株微生物的过程。 为什么要进行纯培养:平板上的单一菌落并不 一定保证是一种菌。 常用的分离、纯化方法: 单细胞挑取法、稀释涂布平板法 稀释混合平板法、平板划线法 微生物的分离、纯化及培养技术 稀释涂布平板法 : 步骤: 1、倒平板:牛肉膏蛋白胨培养基,高氏I号培养基, 查氏培养基冷却至55-60时,混匀后倒平板,牛肉膏蛋白胨 培养基倒4皿,高氏I号培养基和查氏培养基各倒3皿。 2、制备污水稀释液:10g土样,加入90ml无菌水中, 在三角瓶中振摇20min。取0.5ml 加入盛有4.5ml无菌水的试管 中,以此类推,制成不同稀释度。 3、涂布:将上述每种培养基平板底面
7、标记稀释度,然 后用无菌吸管从最后三种稀释度,即10-4、10-5和10-6的试管中 吸取0.1ml对号放入平板上,用玻棒涂布。 4、培养:高氏I号和查氏倒置培养于28培养箱中培 养3-5days,牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在37培养1-2days。 5、挑菌落:转至斜面,检查是否一致,保存。 平板划线法: 1、倒平板,标记培养基名称,编号和实验 日期。 2、划线方法 稀释混合平板法 : 1、先加菌 2、倒平板时注意培养基温度 3、混合均匀 微生物培养技术 1、斜面接种 2、液体培养基接种 3、穿刺接种 将已接种的斜面、半固体和液体培养 基放置培养箱 中培养将生长好的菌种用牛皮纸包好 ,置4冰箱中
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