全血胆碱脂酶测定.ppt
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1、全血胆碱酯酶活性的测定,三氯化铁比色法,有机磷农药的简单回顾,全血胆碱酯酶活性测定概述,三氯化铁比色法,有机磷农药 organophosphorous pesticide,接触机会,生 产,施 用,食 物,误 服、自 杀,毒作用机制,抑制体内胆碱酯酶(ChE)活性,使体内乙酰胆碱大量积聚,引发神经系统功能紊乱,诊 断,职业急性有机磷杀虫剂中毒诊断标准(GBZ-2002) 职业史 现场职业卫生调查 临床症状体征 实验室检查全血胆碱酯酶(ChE)活性,诊断分级标准,全血ChE活性范围 急性轻度中毒-50%-70% 急性中度中毒-30%-50% 急性重度中毒-30%以下,实验目的,加深对有机磷农药中
2、毒机制的认识 掌握全血ChE活性测定的意义 掌握全血ChE活性测定原理、方法,意 义,有机磷农药中毒的重要诊断指标 中毒者治疗后的效果观察指标 接触有机磷农药人员健康状况的动态观察指标,方 法,Asch-DTNB比色法(GBZ52) 三氯化铁比色法 溴麝香草酚蓝(BTB)比色法 纸片法 Biocheck法(便携式分析仪),三氯化铁比色法,原理,器材 刺针 一次性自控式微量吸管(20l) 分光光度计 恒温水浴箱(370.5 ),试剂 磷酸盐缓冲液(PH=7.20) 碱性羟胺溶液 12盐酸溶液 10%三氯化铁溶液 乙酰胆碱标准应用液(1ml含4mol),分析步骤 1. 乙酰胆碱标准曲线的绘制 2.
3、 样品测定,1.乙酰胆碱标准曲线的绘制 (1)取六只具塞试管,配制乙酰胆碱标准色列,(2)各管加碱性羟胺4ml,立即振摇3min (3)各管加12盐酸溶液2ml,振摇1min (4)各管加10%三氯化铁溶液2ml,摇匀,过滤 (5)测吸光度:520nm,参比管第1管 (6)绘制标准曲线,2.样品测定,计 算,1.被水解 的乙酰胆碱吸光度= 对照管吸光度(B管)样品管吸光度(A管) 2.查标准曲线,得出被水解乙酰胆碱( mol ) -即0.02ml血经37 ,30min反应条件下的 胆碱酯酶活性绝对值C,3.胆碱酯酶活性相对值(%),浙江地区健康人胆碱酯酶活性绝对值 男:3.22 0.336 mol 女:3.19 0.398 mol,注意事项,采血前先准备好试管,加入磷缓 采血时严格消毒,用过的棉球、刺针集中放置 准确控制水浴温度和放置时间 加三氯化铁显色后,在20min内比色 参比管的溶液留用到最后,实验报告要求,实验目的 实验原理 实验步骤 实验结果 分析与讨论,
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