聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白.ppt
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1、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白,电泳是指带电粒子在电场的作用下,发生定向泳动的现象。 电泳技术指利用电泳现象对混合物进行分离分析的技术。,电泳基本原理:,COO- COO- COOH + H+ + H+ Pr Pr Pr + OH- + OH- NH2 NH3+ NH3+ PHPI PH=PI PHPI,蛋白质N端游离氨基,C端游离羧基以及侧链上一些基团在一定pH条件带电荷, 因此可以用电泳技术分离和鉴定。,电场力 F=XQ (X:电场强度, Q:电荷量),阻力 F=6 (:半径,:介质粘度),当电泳颗粒匀速运动:,F= F,QX=6,/X=Q/6,带电粒子的迁移率,/X 用U表示,称迁移率(
2、mobility),即单位电场强度时粒子运动的速度,取决于带电粒子的电荷量Q 、粒子大小和形状。 Q越多,V越大;r越小,V越大;球形分子纤维状,影响电泳速度的因素:,样品本身:带电量,分子大小,形状 电场强度:电压 电泳介质的pH和离子强度 电渗作用,按凝胶装置分为盘状电泳及板状电泳 盘状电泳通常是不连续系统,利用缓冲液离子成分、pH、凝胶孔径进行电泳,带电颗粒电泳时具有电荷效应、分子筛效应、 浓缩效应。,聚丙烯酰胺凝胶电泳分类,以聚丙烯酰胺作为支持介质的一种电泳技术。凝胶是单体聚丙烯酰胺(Acr)和交联剂甲叉双丙烯酰胺(Bis)交联而成的,催化剂为过硫酸铵(AP),加速剂为四甲基乙二胺TE
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