高中生物课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与记数养课件新人教版选修1.ppt
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1、课题2 微生物的分离与计数,专题2 :微生物的培养与应用,(一)筛选菌株 自然界筛选:根据它对生存环境的要求,到相应的环境中去寻找。(如耐高温的TaqDNA聚合酶) 实验室筛选:人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等),同时抑制或阻止其他微生物生长。 选择培养基:在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。目的是从众多微生物中分离所需要的微生物。,一、研究思路,1.在培养基的配方中,为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是是什么物质?,碳源是葡萄糖,氮源是尿素。,2.分析该配方的培养基对微生物是否具有筛选作用?如果有,又是如何进行筛选的?,
2、能分解尿素的细菌的筛选 阅读教材22页第一大段相关内容,并思考回答下列问题:,有筛选作用,它的氮源只含有尿素,只有能合成分解尿素的脲酶的细菌才能生长。,测定微生物数量的方法: 1、直接计数法:最常用的显微镜直接计数。 先将待测样品制成悬液,然后取 一定量的悬液放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数。 优点:设备简单、能观察微生物的形态特征。 缺点:不能区分死菌和活菌; 难以计数微小的细菌。 一般用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。,(二)统计菌落数目,2、间接计数法:最常用稀释涂布平板计数法 应用:统计样品中活菌的数目,原理:当样品的稀释度足够
3、高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的 一个活菌,通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。 (注意):一般选择菌落数在30-300的平板 进行记数。,操作:a、设置重复组:增强实验的说服力和准确性。将待测样品经过一系列的稀释,选择三个稀释度的菌液均匀涂布在平板上,然后培养。 (注意):为了结果接近真实值,可将同一稀释度菌液涂布到3个或3个以上的平板上,经培养,计算出菌落的平均数。 教材中用楷体字编排的实例是为了说明设置重复组的重要性。第一位同学只涂布了一个平板,没有设置重复组,因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题,涂布了3个平板,但是,其中1个
4、平板的计数结果与另2个相差太远,说明在操作过程中可能出现了错误,因此,不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。这个实例启示学生,在设计实验时,一定要涂布至少3个平板,作为重复组,才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时,一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致,结果不一致,意味着操作有误,需要重新实验。,b、对照原则:判断培养基中是否有杂菌污染,将未接种的培养基同时进行培养。 判断选择培养基是否具有筛选作用,对照培养基接种后培养观察菌落数目。 计算公式:每克样品中的菌株数=(C/V)M A同学的结果与其他同学不同,可能的解释有两种:一是由于土样不同,二是由于培养基污染或操作失误。究竟是哪
5、个原因,可以通过实验来证明。 实验方案有两种:一种方案是可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验,如果结果与A同学一致,则证明A无误;如果结果不同,则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。另一种方案是将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养,作为空白对照,以证明培养基是否受到污染。通过这个事例可以看出,实验结果要有说服力,对照的设置是必不可少的。,1.原理:尿素是一种重要的农业氮肥,只有当土壤中 的 细菌将尿素分解成氨之后,才能 被植物利用。尿素细菌能合成脲酶,在脲酶的作用下尿素被分解成氨。 CO(NH2)2+H2O CO2+2NH3,二、实验设计,脲酶,(2)实验设计的内容包括
6、实验方案、材料用具、实施步骤和时间安排等。 (3)实验流程: 土壤取样 样品系列稀释 涂布平板与培养 观察并记录结果,菌落计数,阅读思考,1、土壤微生物主要分布在距地表38cm的近中性土壤中,约7080为细菌。 2、分离不同的微生物采用不同的稀释度,其原因是不同微生物在土壤中含量不同,其目的是保证获得菌落数在30300之间、适于计数的平板。 细菌稀释度为104、105、106, 放线菌稀释度为103、104、105, 真菌稀释度为102、103、104。,3、 培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌一般在3037培养12d, 放线菌一般在2528培养57d, 霉菌一般在2528的温度下培养
7、34d。 4、 在菌落计数时,每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果,以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 点评:菌种中有些菌体增殖快,有些菌体增值慢,所以培养时间要充足,使得每个菌体都能形成肉眼可观察到的菌落。 5、菌落的特征包括 形状、大小、隆起程度、颜色 等方面。,实验设计,1.实验名称,土壤中某样品细菌的分离与计数,2.实验目的(略),3.材料用具(略),4.操作步骤,从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去(铲已经过消毒处理)表层土3cm左右,再取样,将样品装入事先消毒过的信封中。,(1)土壤取样,准备牛肉膏蛋白胨培养基(作为对照组)和选择培养基。将菌液稀释相同的
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