鉴定类实验xinkejian.ppt
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1、鉴定类实验,还原性糖、脂肪、蛋白质、淀粉的鉴定,一、实验目的: 尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质,思考1阅读课本P18,完成下列表格:,思考2试以葡萄糖为例写出相应方程式: 葡萄糖+ Cu ( OH ) 2 葡萄糖酸 + Cu 2O(砖红色)+ H 2O 思考3蛋白质检测的反应机制是什么? 蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+结合成紫色的化合物。颜色深浅与蛋白质白质浓度成正比。,斐林试剂,砖红色沉淀,碘,蓝色,双缩脲试剂,紫色,苏丹染液/苏丹染液,橘黄色/红色,二、实验原理,三实验材料 思考4做可溶性还原性糖鉴定实验应选择什么样的实验材料?为什么? 思考5做脂肪的鉴定实验应选择什
2、么样的实验材料? 思考6做蛋白质的鉴定实验应选择什么样的实验材料?,选用含糖较高,而且组织的颜色较浅,或近于白色的,如苹果、梨。避免干扰或影响实验结果的正常颜色。,应选富含脂肪的种子,以花生种子为最好,实验前一般要浸泡34小时(也可用蓖麻种子)。,可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。,四、实验试剂 斐林试剂(包括甲液:质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和乙液:质量浓度为0.05g/ mL CuSO4溶液)、苏丹或苏丹染液、双缩脲试剂(包括A液:质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和B液:质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液)、体积分数为50%的酒精液,碘液、蒸馏水。,思考7斐林试剂
3、与双缩脲试剂相同吗?为什么?,不同;虽然它们的成份都是NaOH溶液和CuSO4溶液配制而成,但它们的溶液浓度不同,使用的原理不同(斐林试剂实质是新配制的Cu ( OH ) 2与还原性糖发生反应,而双缩脲试剂实质是在碱性环境下的Cu2+与肽键发生反应),使用的方法也不同。,思考8上述的酒精溶液起作用?,洗去浮色,五、方法步骤: 1、还原糖检测和观察的操作方法: 制备组织样液(去皮、切块、研磨、过滤)取1支试管,向试管内注入2mL组织样液向试管内注入1mL新制的斐林试剂,振荡试管放在盛有50-650C温水的大烧杯中,加热约2分钟,观察到溶液颜色。,思考9为什么苹果或梨组织液必须临时制备? 思考10
4、实验中应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存,使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂,为什么?,因苹果多酚氧化酶含量高,组织液很易被氧化成褐色,将产生的颜色掩盖。,斐林试剂很不稳定,甲、乙液混合保存时,生成的Cu ( OH ) 2在70900C下分解成黑色CuO和水;,思考11实验中能否将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测?为什么? 思考12还原糖溶液检测过程中出现的颜色变化过程是怎样的?,不能;因为甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应,无Cu ( OH ) 2生成,影响实验结果。,浅蓝色 棕色 砖红色(沉淀),2、脂肪检测和观察的操作方法: 方法一:向待测组织液中滴加3滴苏丹染
5、液,观察样液被染色的情况; 方法二:取材切片制片观察 思考13为什么切片要尽可能薄些? 思考14制片过程中为什么要洗去浮色? 思考15制片过程中为什么要用吸水纸吸去花生子叶周围的酒精? 思考16制片过程中为什么在盖上盖玻片前要滴加蒸馏水?,切片要尽可能薄些,便于观察。,不洗去浮色,会影响对橘黄色脂肪滴的观察。,酒精是脂溶性溶剂,可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。,滴上蒸馏水可防止盖盖玻片时产生气泡。,3、蛋白质检测和观察的操作方法: 制备组织样液(浸泡、去皮研磨、过滤)加样液约2ml于试管中加入双缩脲试剂A,摇匀再加入双缩脲试剂B液34滴,摇匀观察颜色变化。,思考17检测时为什么要先加双缩脲
6、试剂A液后加B液,而不能同时加入?,先加NaOH溶液,为Cu2+与蛋白质反应提供一个碱性的环境。A、B液同时加入,会导致Cu2+变成Cu ( OH ) 2沉淀,而失效。,思考18检测时向试管内加双缩脲试剂B液4滴,为什么CuSO4溶液不能多加?,因为多加CuSO4溶液,Cu ( OH ) 2的蓝色会遮盖反应的真实颜色。,4、淀粉检测和观察的操作方法: 用试管取2ml待测组织样液 向试管内滴加2滴碘液 观察颜色变化。 注意:碘液不要滴太多,以免影响颜色观察。,六、应用: 例题1:安徽阜阳劣质奶粉事件曝光后,有关部门对收缴的劣质奶粉进行了化验,发现不法商人为了降低成本,在其中添加了大量糖类物质,让
7、婴儿喜欢吃却无法得到足够的蛋白质营养。请回答: (1) 长期以劣质奶粉为主食的婴儿会成为“大头娃娃”,这是由于缺乏蛋白质导致血浆渗透压下降,血浆中的大量水分进入 造成的。 (2) 有些劣质奶粉中含有大量还原糖,如果用斐林试剂鉴定,则该试剂与待测样液在试管中混合均匀后,还必须经过 处理;预计试管内混合液的颜色变化是 。 (3) 如果用双缩脲试剂鉴定劣质奶粉是否含有蛋白质,那么,将待测样液注入试管之后,注入试剂的顺序应该是 。 (4) 如果劣质奶粉含有大量脂肪,则用苏丹染液鉴定时,预计染液与待测样液混合后的颜色是 。,织液(或组织间组隙),将试管放进盛有热水的烧杯中加热煮沸(12min); 由蓝色
8、变为砖红色,由蓝色变为砖红色,先注入双缩脲试剂A(或01gmLNaOH溶液),再注入双缩脲试剂B(或001gmLCuS04溶液),例题2:胰高血糖素对小白鼠和人具有相同的生理作用。为了验证“胰高血糖素具有升高血糖的生理作用”,请以小鼠为实验对象设计实验步骤,预测和解释实验应出现的结果,并写出实验结论。 (一)实验材料和用具: 正常实验小白鼠只,生理盐水,用生理盐水配制的适宜浓度的胰高血糖素溶液,斐林试剂,注射器,试管等。 (二)实验步骤: (实验提示:采用腹腔注射给药,给药剂量不作实验设计要求;给药小时后,用注射器在小鼠膀胱处穿刺取尿液。),(1)确定一只鼠为实验鼠,腹腔注射胰高血糖素溶液;另
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