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1、临床标本的细菌学检验,基本要求,认真核对: 了解诊断: 联系临床:,正确采集和处理标本,无菌操作:对无菌或有菌标本不同处理 盛放容器:无菌容器 采集时间、部位: 送检时间、方法:及时送检、低温或保温保存 安全防护: 及时检验和报告:,选择合适的培基养和培养方法,血液和骨髓,采血时间与次数:采集血培养都应该在使用在使用抗生素之前进行;对间歇性寒战,应该估计寒战或体温高峰时间。 采血部位:肘静脉或肘动脉 骨髓采集: 增菌培养:培养基中加入SPS,检测方法和报告,普通培养:分别做厌氧和需氧培养 阳性表现: 均匀浑浊,革兰阴性菌 浑浊有绿色,肺炎链球菌 表面有菌膜有绿色荧光,铜绿假单胞菌 下面沉淀,链
2、球菌 溶血,溶血性链球菌 浑浊有胶胨,葡萄球菌 灰白色菌膜,枯草芽孢杆菌 涂片革兰染色镜检,直接药敏、分离培养 报告临床 阴性结果7天报告,检测方法和报告,特殊培养 脑膜炎奈瑟菌培养:37加5-10%CO2 伤寒或其它沙门菌:接种葡萄糖胆汁肉汤或胆盐肉汤 草绿色链球菌:胰酶酪蛋白大豆肉汤,同时做需要、CO2和厌氧培养 L型细菌:高渗液体培养基,“油煎蛋”菌落 厌氧培养: 真菌培养:,临床意义,确诊菌血症和败血症 金黄色葡萄球菌见疖、痈、脓肿引起的败血症 革兰阴性菌见尿路、胆道、胃肠道引起的败血症 草绿色链球菌引起亚急性心内膜炎 铜绿、金葡引起烧伤后败血症,尿液的处理,标本采集: 一般培养采用清
3、洁中段尿。采样前,用肥皂水或清水清洗外阴,排出尿液前段需丢弃,中段和后段尿液10-20ml盛装于无菌的容器。 肾盂尿采集法 膀胱穿刺尿采集法 结核菌涂片或培养用24小时尿取沉淀。,检测方法和报告,直接镜检 -离心沉淀涂片革兰染色 -淋球菌镜检 假丝酵母镜检 结核分枝杆菌镜检,检测方法和报告,分离培养 -普通培养: -淋球菌培养: -厌氧菌培养: -真菌培养:,检测方法和报告,菌落计数 倾注平皿法: 尿液稀释成1:10、1:100、1:1000,取此液1ml放入直径9cm灭菌平皿内,同时加入已熔化并冷至50的培养基与尿混合,待凝固后置35 培养。 定量接种环涂抹法:使用 1ul的定量接种环沾满尿
4、液,在分离培养基分离培养。生长的菌落数乘以 1000,等于每毫升尿中的菌数。 报告: 革兰阴性菌105cfu/ml, 革兰阳性菌104cfu/ml有临床意义 阴性报告为“48h培养无菌生长”,患者徐某,男,26岁,因烧伤入住某院烧伤病房等待植皮手术。期间,患者烧伤创面有蓝绿色有甜腥气味的粘稠分泌物渗出,随后患者出现41高热、呼吸急促、血压下降、昏迷。临床诊断为败血症休克,立即给予广谱抗生素抗菌治疗与对症支持治疗,同时采集血标本送检验科微生物室检验并要求做药敏试验。请问,该患者可能为哪种细菌感染?血培养将会出现什么现象?该如何进一步鉴定?,患者周某,男,65岁,结肠癌术后化疗三日后出现高热,常规
5、应用抗生素治疗无效,遂临床采集血标本送检验科微生物室,要求血培养鉴定病原菌及药敏试验。微生物室工作人员血标本经18h培养后,出现均匀混浊,酚红指示剂变色。请问该病人可能是什么细菌感染?如何进一步鉴定?,患者李某,女,57岁,术后留置导尿3d后出现发热(38以上)、尿痛、排尿困难,查体有下腹触痛与肾区叩痛,临床初步判断为肾盂肾炎,病房要求检验科派人协助采集尿液标本送检。请问如何正确采集标本,并如何进行检验?,粪便标本,自然排便法:挑取脓血、黏液的粪便2-3g于无菌的纸盒中,或放置于增菌液中送检 直肠肛拭子法:直接送检或放入运送培养基中送检,检测方法,直接镜检:针对特殊细菌,如霍乱弧菌、结核、真菌
6、等 -霍乱弧菌:鱼群样排列的革兰阴性菌,动力阳性 -葡萄球菌:金葡菌引起的假膜性肠炎 -结核分枝杆菌: -艰难梭菌:革兰阳性粗大杆菌,无荚膜、有芽孢 -空肠弯曲杆菌:细小、弧形、S形或螺旋形革兰阴性,检测方法,分离培养 -沙门菌及志贺菌:增菌培养或直接接种于SS和MAC、CB,3718-24h培养,挑取可疑菌落接种KIA/MIU,进一步做生化和血清凝集试验 -霍乱弧菌:碱性蛋白胨水37增菌6h,挑取菌膜接种TCBS平板, 37培养16-20h,挑选可疑菌落氧化酶阳性,多价“O”诊断血清凝集试验 -大肠杆菌培养:挑取脓血、黏液的粪便接种于MAC或EMB, 37培养18-24h,挑取可疑菌落接种K
7、IA/MIU,进一步做生化和血清凝集试验 -金黄色葡萄球菌培养:接种于高盐甘露醇琼脂, 37培养18-24小时 -副溶血弧菌培养:增菌后接种与弧菌选择性培养基与SS培养基。,检测方法,分离培养 -小肠耶尔森培养:接种NYE、MAC及SS,22-25及37培养,挑取可疑菌落接种KIA/MIU,进一步做生化鉴定。 -空肠弯曲杆菌:接种弯曲菌培养基,43微需氧培养24-72h -艰难梭菌培养:取黄色伪膜状粪便,接种于CCFA平板,37厌氧培养48h,挑取可疑菌落检测毒素,临床意义,检测引起腹泻、食物中毒的肠道菌致病菌 检测肠道正常菌群,预防菌群失调,患者杨某,女,24岁,2日前到某海滨城市旅游,并在
8、街边小店食入大量海鲜。回家后出现腹痛、腹泻、呕吐、低热到医院就诊。临床采集粪便标本送检验科微生物室。标本性状为糊状,常规接种SS平板与CB平板,培养18h后发现SS平板上除乳糖阳性菌落外有扁平、无色透明、蜡滴状小菌落生长,CB平板上未见乳糖阴性菌落生长。请问患者可能是何种细菌感染?如何进一步鉴定?,患者张某,男,24岁,因餐后2h出现恶性、呕吐、发热伴腹泻入院治疗,临床初步判断为食物中毒。采集粪便标本后送检验科微生物室检查。粪便性状为糊状。微生物室工作人员收到标本后直接接种于SS与MAC培养基分离培养,24小时后仅见乳糖阳性菌落生长,请问是何原因?该如何进一步进行检验?,某位病人因肺炎住院,经
9、抗生素治疗7天后出现腹痛、腹泻、发热等症状。病房留粪便标本送检验科微生物室检查。观察粪便性状呈粘液血便,带有条状伪膜。微生物室工作人员收到标本后直接接种于SS与MAC培养基分离培养,24小时后仅见乳糖阳性菌落生长,请问是何原因?该如何进一步进行检验?,呼吸道标本,标本采集: 咽拭子采集法: 自然咯痰法: 小儿取痰法: 气管镜采集法: 胃内采痰法: 气管穿刺法:,检测方法,显微镜检查 直接镜检:观察痰液质量 染色镜检:观察细菌或分枝杆菌,分离培养,培养前处理: 均质化: 净化: 普通培养:接种于BA,10%CO237培养18-24小时,挑取可疑菌落涂片、染色,进一步做生化鉴定。 结核杆菌培养:,
10、分离培养,厌氧菌培养:接种两个BA,同时做厌氧与需氧培养 真菌培养:接种SA,37或22培养48小时 白喉棒状杆菌:接种亚碲酸盐培养基上, 37培养48小时,典型菌落做生化、毒力试验 百日咳鲍特菌:接种BG培养基,37培养2-5天,挑取可疑菌落涂片、血清学试验,临床意义,呼吸道标本有正常菌群 用于检测呼吸系统,鼻咽部的感染。 与临床联系,找到病原菌。,患者王某,男,63岁,入院后经气管插管手术48h后出现发热、咳嗽、咯痰,X线检查显示有较新炎症病灶,初步判断为肺部感染。取病人痰液标本送检验科微生物室检验。病人痰液呈砖红色似果酱样,粘稠。请问该病人可能是何种病原菌感染?将如何鉴定?,某医院检验科
11、微生物室收到一痰液标本,色黄、粘稠。该检验科工作人员收到标本登记后,将其用40g/L NaOH消化处理后,进行抗酸染色,镜检未见抗酸阳性杆菌,遂发出初步报告:“标本经抗酸后未见结核分枝杆菌”。请问该工作人员的做法是否存在问题?如果是你将如何进行检验?,脑脊液,标本采集 医师以最严格的无菌技术做腰椎穿刺。气温较低时,应保温送检或床边接种后,立即孵育,检验方法,显微镜检查: -脑脊液外观:结核性膜炎常为毛玻璃样。 其它细菌引起化脓性脑膜炎,脑脊液都明显浑浊。 -涂片镜检:混浊或脓样脑脊液可直接涂片,革兰染色,镜检。无色透明的脑脊液,应以3000r/min离心10-15分钟,取沉淀物涂片,革兰染色镜
12、检,根据染色反应及形态特征,可初步提出感染细菌的种类。,检测方法,显微镜检查: 革兰阴性双球菌 革兰阳性双球菌 革兰阴性小杆菌 革兰阳性小杆菌,分离培养,用接种环挑取混浊脑脊液或离心沉淀物,分别接种于BA或CA平皿上,置355%CO2环境中培养18-24小时,检视有无细菌生长。根据菌落特点及染色后镜检的特征,初步判断细菌种类,并进一步做生化鉴定及血清学检查加以鉴定,并作出报告。,临床意义,细菌性脑膜炎的病原学诊断 鉴别诊断病毒性脑膜炎 治疗疗效评估,脓液及创伤分泌物,标本采集 封闭性脓肿:注射器抽取 开放性脓肿: 烧伤创面:,检验方法,涂片: 革兰染色镜检 放线菌挑取硫磺颗粒镜检,检验方法,分
13、离培养 -普通细菌培养:分别接种于BA或EMB平皿上,置37培养18-24小时,检视有无细菌生长。根据菌落特点及染色镜检特征,初步判断细菌种类,并进一步做生化鉴定 -厌氧培养:接种BA,或增菌后8020分钟加热后移种BA, 37培养18-24小时,挑取可疑菌落染色镜检,并进一步做生化试验、动物试验。,临床意义,检测细菌性创伤感染 检测气性坏疽 检测烧伤的创面感染,患者黄某,男,48岁,为北方某林区管理员,在一次例行林区巡视时发现有大量老鼠死亡,回家2日后出现发热、头痛、淋巴结肿大伴疼痛,立即到当地县城医院就诊,后转送市中心医院ICU隔离病房。对患者淋巴结穿刺液涂片染色镜检,查见革兰阴性两端浓染
14、的短小杆菌。请问该患者可能为何种细菌感染?如何进一步进行检验?,患者赵某,女,63岁,患有糖尿病,晚期伴毛细血管病变。一日因足部不慎被玻璃划伤到社区医院进行了常规伤口处理,但伤口经久不愈,并出现化脓性感染。遂到社区医院复诊,医生进行了伤口清洗处理,并给予口服抗生素治疗。两周后伤口仍不愈合,并出现发黑、发臭,有黑色脓血渗出,又到某三级医院治疗。临床采集了伤口附近坏死组织,并送检验科微生物室检验,请判断可能是由何种细菌感染,并说明该如何进行检验。,生殖道标本,标本采集 医师采集,女性采集尿道口、阴道、子宫颈或直肠的(怀疑淋球菌感染)男性采集尿道口分泌物及前列腺等分泌物标本。用棉花拭子采集标本,收集
15、于无菌试管内送检。,检验方法,显微镜检查 一般细菌及淋病奈瑟氏菌涂片检查:制成涂片,干后进行革兰氏染色,镜检发现有革兰氏阳性或阴性细菌,即可根据形态做出报告。 梅毒螺旋体做暗视野或镀银染色检查 假丝酵母:,检验方法,分离培养 一般细菌及淋病奈瑟氏菌培养:一般情况下可用BA,35孵育。若培养淋病奈瑟氏菌则应增加1个CA,置510% CO2环境孵育。 厌氧培养 支原体培养:,临床意义,诊断泌尿生殖系统炎症 性病的诊断,眼、耳、口腔标本,标本采集 -采取标本时,耳,鼻,咽拭子会被皮肤或粘膜上正常菌群污染,采取和分离时应注意。 -采取眼分泌物时,应先用无菌生理盐水冲洗眼部,然后用棉拭子拭干,再以无菌棉拭子采集。 -沙眼衣原体用无菌小刀刮取穹隆部或眼结膜上皮细胞。,检验方法,显微镜检查 一般细菌及淋病奈瑟氏菌涂片检查:制成涂片,干后进行革兰氏染色,镜检发现有革兰氏阴性双球菌。 沙眼衣原体: 真菌,检验方法,普通培养 真菌培养 其它,临床意义,诊断细菌性眼炎、结膜炎、泪囊炎、角膜炎 新生儿眼炎,谢谢,
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