岛津液相维修培训.ppt
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1、欢迎参加岛津液相维修培训班,采用 “HPLC” 级溶剂 避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂 对试样有适宜的溶解度 溶剂粘度要小 与检测器相匹配,流动相的选择,其他问题,其他问题,水的等级 纯化水 蒸馏水 去离子水,波长 (nm),纯化水,去离子水,因为不纯物的存在,去离子的吸光率较高,纯化水中去除了无机和有机的污染物,吸光率,其他问题,水 / MeOH梯度 ODS 柱,鬼峰,Gradient Curve,1 ml/min, 0-100% MeOH over 10 mins and hold for 15 mins.,鬼峰的出现,其他问题,溶剂的等级 HPLC级 优级纯 分析纯,都经过蒸
2、馏和0.45u的过滤(除纤维毛,未溶解的机械颗粒,优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂,HPLC级经过0.2u的过滤,且除去有紫外吸收的杂质,微量分析、梯度洗脱,其他问题,甲醇 乙睛 正己烷,分析纯级和 HPLC 级溶剂的吸光度比较图,其他问题,溶剂的过滤 滤膜类型: 聚四氟乙烯滤膜:适用于所有溶剂,酸和盐。 醋酸纤维滤膜:不适用于有机溶剂,特别适用于水基溶剂。 尼龙66滤膜:适用于绝大多数有机溶剂和水溶液,可以用于强酸,不适用于二甲基甲酰胺。 再生纤维素滤膜:蛋白吸收低,同样适用于水溶性样品和有机溶剂,脱气: 除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 气泡对测定的影响: 1)泵中气
3、泡使液流波动,改变保留时间和峰面积 2)柱中气泡使流动相绕流,峰变形 3)检测器中的气泡产生基线波动,其他问题,脱气的目的,1. 防止由气泡的产生引起的故障 2. 防止由溶解(在液体中的)气体量 的变动引起的检测不稳定程度 1)示差折射率检测器 *使折射率变化 2)UV检测器(200nm以下) *溶解氧气有吸收 3)荧光检测器 *溶解氧气有消光作用,其他问题,其他问题,脱气的方法,1. 超声波脱气法 2. He清除法 3. 使用氟树脂膜的减压脱气法,其他问题,He清除法,调压阀,排气阀,往送液泵,流动相,过滤器,其他问题,氟树脂膜,真空室,往送液泵,真空泵,控制器,流动相,使用氟树脂膜的减压脱
4、气法,梯度洗脱法,梯度洗脱装置: 高压梯度:用两台高压输液泵将两种溶剂输入 低压梯度:在常压下将两种溶剂(或多元溶剂)混合,然后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱中。 梯度洗脱: 优点: 可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测量和提高分离精度,梯度洗脱法的注意点,溶剂的纯度要高,否则梯度洗脱的重现性差 梯度混合的溶剂互溶性要好 梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器(如紫外吸收检测器或荧光检测器),而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器(如示差折光检测器) 查看空白实验的数据。 遵守分析周期。(最初的分析数据不采用),样 品 处 理,1. 使用流动相溶解样品 - 减少溶剂峰,
5、尤其是组分峰靠近溶剂峰时由为重要 - 保证样品在流动相中的溶解度,避免样品在系统中尤其在柱中产生沉淀,其他问题,缓冲液,选择缓冲液的步骤 1 .确定最佳分离状态时的流动相pH 2 .选择具有与流动相的pH相近的pKa 的缓冲液 (即使浓度稀也具有较强能力的缓冲液) 3 .确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收 (在波长210nm附近进行检测时,不能用醋酸和 柠檬酸的缓冲液),一些代表性弱酸的pKa,pK1 pK2 pK3 醋酸 4.87 柠檬酸 3.13 4.76 6.40 磷酸 2.16 7.2 1 12.32,其他问题,缓冲液的使用,使用前必须过滤 使用后一定要进行清洗 ,以免造成腐蚀、磨损、
6、阻塞: 用纯水冲洗30-60min(1ml/min),再用甲醇冲洗30min 易受到细菌和霉菌的影响,不能直接用有机溶剂冲洗,液相色谱容易出问题的部件,维护流程图,吸滤头,单向阀,柱塞密封圈,线路过滤器,手动进样器,检测器,管线选择,材料 不锈钢 Teflon PEEK (聚醚酮) 尺寸 0.1 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.3 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.5 mmI.D. x 1.6 mmO.D. 0.8 mmI.D. x 1.6 mmO.D.,管线材料,不锈钢 (可用于所有连接) 能承受几千 kg/cm2 压力 酸性或高浓度盐环境中易腐蚀 (尤其在pH小于2时
7、) PEEK (可用于所有连接) 能承受高达 250 kg/cm2压力 可在整个PH范围(pH 1-14)内使用 不适用于高溶解性溶剂如氯仿等 Teflon (用于柱后阻尼管、反应管和排液管) 化学惰性大 能承受 5 kgf/cm2 压力,材料:不锈钢烧结,孔径10um 故障:堵塞 表现:管路中不断有气泡生成 措施:用520的稀硝酸,超声波清洗, 再用蒸馏水清洗 注意点:吸滤头拆下时不必将塑料管剪断,吸滤头,液相色谱容易出问题的部件,LC-10ATvp泵:串联 式往复泵,LC-10ADvp泵:并联式 往复泵,液相色谱容易出问题的部件,液相色谱容易出问题的部件,单向阀结构,流动相,单向阀原理,液
8、相色谱容易出问题的部件,故障1:宝石球粘附于垫片 表现:泵无法吸液或排液,流路不通 措施:1)用针筒抽出口单向阀以产生负压, 使宝石球与垫片分开 2)拆下单向阀,放入异丙醇或水中, 用超声波清洗,单向阀,液相色谱容易出问题的部件,故障2:宝石球或塑料垫片受污导致密封不好 表现:系统压力波动大 措施:拆下单向阀,放入异丙醇或水中,用超 声波清洗,单向阀,故障:密封圈磨损而导致 密封不良 现象:系统压力波动大或 漏夜措施:更换密封圈 注意点: 更换密封圈 拆卸泵头前,柱塞杆 复位 (PSET),柱塞密封圈,液相色谱容易出问题的部件,故障:堵塞 现象:系统压力波动大或压 力偏高 措施:5稀硝酸,超声
9、波清 洗 判断依据:关闭排液阀,断开出口管路,设定流速1mL/min,如压力3kgf/cm2,则可能堵塞。,线路过滤器,排液阀,压力传感器,线路过滤器,流动相,液相色谱容易出问题的部件,液相色谱容易出问题的部件,进样器,自动进样器 手动进样器 原理:(六通阀) 注入方式: 1)全量注入 2)部分注入,液相色谱容易出问题的部件,进样量和检测器响应的关系示意图,进样体积,检测器响应值,定量环体积的一半,3倍定量环体积,全量注入,部分注入,手动进样器的原理图,装填状态,进样状态,交叉污染的原因,便捷的方法(不需清洗) 1.进样状态下插入微量注射器 2.切到装填状态 3.注入样品 4.切回到进样状态,
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