光谱法在DNA与金属配合物相互作用研究方面应用.ppt
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1、光谱法在DNA与金属配合物 相互作用的研究方面的应用,报告人:周智,一 选题的由来与意义,20世纪80年代中期,研究发现金属配合物与的作用时,发现2+、3+的八面手性金属配合物具有识别二级结构的能力, 从而发展了一种能识别型的手性配合物探针.,杨频等人用作探针研究了()3262等手性金属配合物与的作用机理。,近年发现,一些金属络合物如金属席夫碱,在氧化剂存在的条件下, 能够断裂或者键合。,席夫碱及金属席夫碱化合物是一类抗癌药物,研究抗癌药物与的相互作用机理, 对选择核酸酶及抗癌药物的合成具有重要意义。,1.紫外光谱法,双链DNA分子由于含有芳香性碱基和磷酸根,其紫外光谱在260nm附近有1强吸
2、收峰。DNA的碱基是很多药物与DNA结合的位点。结合药物后,DNA的上述特征吸收峰会发生位移。,二 主要研究手段,金属席夫碱的结构图,对于Mn席夫碱,随着DNA的加入,其吸收光谱发生明显的减色效应,同时其234nm处的吸收峰有2nm的微小紫移。,2. 荧光光谱法,(1) 用溴化乙啶作荧光试剂的原理,溴化乙啶(EthBr)能插入双链DNA的碱基之间与DNA发生专一作用,因此其本身荧光强度被大大增强,达100倍,成为测定DNA及各种性质的灵敏试剂。,如果某种化合物能与DNA发生类似溴化乙啶与DNA这种作用方式的反应,就会竞争溴化乙啶与DNA体系的荧光,跟踪这一体系的荧光变化,可以判断化合物是否与D
3、NA发生作用。,(2)EB和化合物的竞争实验,EB与DNA发生嵌入作用使其荧光强度大增,而Mn席夫碱与DNA发生类似作用,两者竞争结合位点,减弱EB-DNA体系的荧光。通常以c(compl)/c(DNA)100为限,荧光值减弱50%作为化合物是否与DNA作用的判据。,由左图可知随Mn席夫碱浓度增加,EB-DNA体系荧光强度减弱,当增至c(compl)/c(DNA)=31.84时,体系的荧光强度已降至48.5%,表明Mn席夫碱嵌入到了DNA双链之间。,右图比较了几种席夫碱与DNA相互作用的强弱,其中作用最强的为Co(II)席夫碱,最弱为Zn席夫碱.,(3)KI的猝灭实验,一些物质(如卤素离子、硝
4、基化合物、重金属离子等等)可使荧光猝灭,称为荧光猝灭作用。KI为常用的荧光猝灭剂。,通过在有CTDNA(小牛胸腺的DNA)和无CTDNA存在的情况下,KI对Mn席夫碱猝灭情况的不同,可进一步论证Mn席夫碱与DNA的嵌入作用。,由左图知Mn席夫碱的荧光程度随KI的增加快速降低,没有DNA存在时比有DNA存在时降得更快,表明Mn席夫碱嵌入DNA双链中,因受到磷酸基团保护从而使荧光猝灭变慢。,(4)温度的影响,温度对物质的荧光度有一定影响,一般来说温度越高,荧光强度越低,对Mn席夫碱而言随温度升高荧光强度降低,但在Mn席夫碱-DNA体系中,随温度上升,体系的荧光强度先升后降。在较低温度下,DNA双链
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