2019细菌金属β内酰胺酶检测方法的评价.doc
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1、DOC格式论文,方便您的复制修改删减细菌金属内酰胺酶检测方法的评价(作者:_单位: _邮编: _) 作者:孟素慧,刘丽文,翁亚贤 【摘要】 目的 比较用EDTA.Na2和2巯基乙醇为酶抑制剂的协同过筛法来检测细菌金属酶的敏感性,为临床筛选金属酶,探究细菌的耐药机制提供依据。方法 以EDTA.Na2和2巯基乙醇为酶抑制剂,头孢他啶(CAZ)头孢噻肟(CTX) 和亚胺培南(IPM)为底物在MH平板上用纸片扩散法进行抗生素协同敏感性检测。结果 对28株对IPM或三代头孢耐药的已知产金属酶的菌株进行以上两种方法的检测,应用2巯基乙醇筛选法检出的金属酶阳性率78.6%(22/28);应用EDTA筛选法检
2、出金属酶阳性率57.1%(16/28);两种方法共同使用检出阳性率92.9%(26/28)。 结论 两种方法无显著性差异(2=1.75 20.05(1)=3.84,P0.05),且两种酶抑制剂共同应用对金属酶的检出率更高。 【关键词】 金属内酰胺酶;协同过筛法;酶抑制剂Evaluation to the Methods of Detecting Bacterium MetallobetalactamaseAbstract: Objective To compare the sensitivity of two methods, in which EDTA and 2mercaptoethano
3、l were used as enzyme inhibitors for detecting metallobetalactamase, and to screen metallobetalactamase so as to study the drug resistant mechanism. Methods The enzyme inhibitors were EDTA and 2mercaptoethanol and the substrates were ceftazidime, cefotaxime and imipenem. The microbiological sensitiv
4、ity synergic tests were processed by KB method in the MH agar.Results Among the 28 strains of metallobetalactamase producing bacteria, the positive srains accounted for 57.1% (16/28) by EDTA method, 78.6% (22/28) by 2mercaptoethanol method, and 92.9% (26/28) synchronously by the two methods.Conclusi
5、on It is concluded that there is no significant difference between these two methods, and that these two enzyme inhibitors are used at the same time can increase the positive rate of metallo-beta-lactamase detection.Key words: metallobetalactamase; sensitivity synergic method; enzyme inhibito亚胺培南(im
6、ipenem,IPM)为碳青霉烯类抗生素,有极强的抗菌活性,8 mg/L 的IPM可抑制98%以上的临床主要致病菌,特别适用于治疗严重的医院感染和免疫缺陷患者,但随着IPM的广泛使用,抗药株在逐年增加。细菌产生的内酰胺酶大部分系活性部位带丝氨酸残基的酶类,也有一小部分是活性部位为金属离子的酶类,称为金属内酰胺酶(metallolactamase),简称为金属酶。金属酶是一类对内酰胺类抗生素有着广泛水解作用的酶类,对所有抗生素,包括青霉素类、头孢菌素类(一、二、三代)和碳青霉烯类等均产生耐药,给临床治疗带来很大困难。因此金属酶的研究越来越受到重视,对该酶的检测可以进一步探究细菌对多种抗生素耐药的
7、机制。国内外已有较多关于金属酶检测方法的报道57,我们选用了两种简便易行、可在临床细菌室广泛使用的方法。基于金属酶的活性基团依赖于金属离子的特性3,选用两种金属离子的螯合剂EDTA.Na2和2巯基乙醇破坏其活性基团,并结合三种抗生素(CAZ,CTX,IPM)观察协同抑菌现象,对两法的结果进行分析,现将结果报告如下。1 材料与方法11 材料1.11 试剂与材料直径6 mm 厚1 mm 的空白纸片(自制)、MH营养琼脂干粉(生物梅里埃公司)、分析纯EDTA.Na2(沈阳试剂厂)、2巯基乙醇、亚胺培南(IPM 10 g/片, 英国oxoid公司)、 头孢噻肟(CTX 30 g/片)、 头孢他啶(CA
8、Z 30 g/片,北京天坛制药厂)。112 菌株来源辽宁省人民医院细菌室提供IPM耐药的产金属酶的菌株28株,其中铜绿假单胞菌10株(110号)、芳香黄杆菌1株(11号)、嗜麦芽窄食单胞菌17株(1228号)。12 方法121 EDTA.Na2纸片的制备精确称量0.840 6 g,分子量为336.24的EDTA.Na2溶解于25 ml 双蒸水中,配制成0.1 mol/L 的EDTA.Na2溶液,取5 l 于空白纸片上制成EDTA.Na2含量为1.68 mg/片,无菌环境下室温放置30 min,使其自然干燥。 122 菌株传代将在冰柜内冻存的28株菌株取出,在血平板上进行传代(1820 h)。1
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