2019胸腺细胞渐进性凋亡对大鼠脾脏淋巴细胞增殖功能的影响.doc
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1、DOC格式论文,方便您的复制修改删减胸腺细胞渐进性凋亡对大鼠脾脏淋巴细胞增殖功能的影响(作者:_单位: _邮编: _) 作者:陈海英 陈建明 郑建盛【摘要】 目的:研究胸腺内胸腺细胞电镜结构的渐进性、增龄性凋亡等形态学改变,探讨引起脾脏淋巴细胞增殖功能变化的可能机制。方法:光镜、电镜下观察胸腺主要结构的增龄性变化,测试凋亡细胞数。脾脏淋巴细胞增殖实验,脾脏组织流式细胞仪检测细胞凋亡率。并统计学分析。结果:在光镜下观察显示随着年龄增长,胸腺皮、髓质分界不清,胸腺细胞稀疏。电镜下胸腺细胞退化萎缩,出现大量凋亡小体。胸腺细胞凋亡百分率与成年年龄正相关(P0.05),脾脏内淋巴细胞在进入老年后才出现凋
2、亡。成年组脾脏淋巴细胞增殖活性就开始出现明显增强(P0.05)。结论:随着鼠龄增大,而胸腺比脾脏内淋巴细胞更易于凋亡,胸腺细胞凋亡直接或间接促进脾脏淋巴细胞增殖功能。 【关键词】 胸腺细胞;凋亡;脾脏;淋巴细胞转化;退化萎缩 Abstract Objective:To study the electron microscopic gradually morphologic change and apoptosis of the structual with age of thymocytes in rat; and to explore its possible mechanism of pr
3、oliferation of lymphocytes of rats spleens. Methods: The structure changes of the thymus were observed by light and electron microscopic methods, testing apoptosis counts of the cells, the detection of spleens lymphocyte proliferation.Flow Cytometry Detection of Apotosis rate in Spleens was used to
4、study the quantitatively and make statistics analysis. Results: With age increasing, the line between cortex and medulla cant be distinguished in the high power microscope. And thymocytes was few. Thymocyte was degenerative and involute. A great numer of apoptotic bodies were found. The thymocytes d
5、ensity ratio of cortex to medulla decreased is positive correlation with aging(P0.05).The apoptotic lymphocyte of Spleens old age take place. Effective activation of in adult group spleens are much increased(P0.05).Conclusion: With age increased,apoptosis is more easy with thymocytes than that in sp
6、leens. Thymocytes apoptosis can directly or indirectly promote the proliferation power of spleens lymphocytes. Key words Thymocytes ;Apoptosis; Spleens; lymphocyte transformation; Invotion 在衰老过程,机体的代谢和生理功能都有不同程度的改变,近年研究发现,免疫器官是机体对内外环境的适应和反应体系,从根本上参与了机体衰老的全过程。研究免疫系统在衰老过程中的变化具有重要的理论和临床意义。因此衰老对人体免疫影响的机
7、制和防暑措施是当前国内外医学研究的重点内容。观察动物免疫器官的变化常选胸腺、脾脏,一般观察胸腺皮质厚度,胸腺皮质增厚、皮质 淋巴细胞增多,提示机体免疫功能的提高。诸多学者用物理及化学等方法对胸腺结构及胸腺免疫功能的影响等不同领域做了相关研究。但任何研究都不能排除胸腺增龄变化对各项研究有广泛的影响,本课题主要从形态学角度观察胸腺光镜、电镜结构的增龄变化,探讨免疫功能低下的形态学基础。用免疫指标的对比来探讨大鼠衰老胸腺衰老凋亡对脾脏免疫功能的影响及可能机制。 材料和方法 1.1 实验动物及分组 SD大鼠30只,由福建医科大学实验动物研究室提供,动物合格证号:闽实动质准第002-05号。植物血球凝集
8、素(PHA)、四甲基戊唑蓝(MTT):由南京建成生物工程公司提供。动物分三组。幼年组:出生1周内;成年组:8周10周龄;老年组:18月龄。每组10只,雌雄不分。正常饮水及饲料,适应性喂养。 1.2 脾脏淋巴细胞增殖实验 处死大鼠,无菌操作取少量脾脏组织,用生理盐水漂洗其表面血污,用眼科剪剪成肉糜状,加有1 mL PBS的小平皿内轻轻研磨分别制成脾脏单细胞悬液。将细胞液加入24孔培养板,细胞数5106个/孔,培养板置于37 ,应用PHA诱导,以MTT比色分析法620 nm酶标仪测定吸收度的大小。 1.3 流式细胞仪检测 无菌操作研磨胸腺、脾脏组织,300目尼龙网过滤,离心,冷乙醇固定。制备脾细胞
9、悬液,计数细胞终浓度1106个/mL,流式细胞仪检测,计数10 000个细胞,测定细胞凋亡率。 1.4 光镜标本的制备 各组大鼠用戊巴比妥腹腔内注射麻醉后开胸,摘取部分胸腺组织,入10%甲醛溶液固定,按常规制成石蜡包埋块,切片机(德国Leica RM2015)以5 m连续切片,常规苏木精-伊红(HE)染色。 1.5 组织学观察图像分析 光学显微镜(日本Olympus BX51T-PHD-J11)观察。进行200和400的显微照相,编号、采集、分析存盘。 1.6 凋亡细胞数计算 每张玻片随机观察200个细胞,计数凋亡细胞数。每组观察4张玻片。计算凋亡率: 凋亡率(%)=凋亡细胞数/观察细胞数(2
10、00个)100 1.7 电镜标本的制备 紧贴胸腺表面取材,取胸腺皮质切成1 mm 3小块迅速固定于2.5%戊二醛磷酸缓冲溶液,反复洗涤后用1%锇酸溶液作后固定,乙醇系列脱水,环氧树脂包埋,超薄切片。醋酸铀与柠檬酸铅染色,H-600型电子显微镜观察与摄片。 1.8 统计学处理 所有实验数据用SPSS10.0软件处理,采用单因数方差分析,两两比较用S-N-K法。以xs进行t检验,以P0.05为差异有显著性。 2 结果 2.1 胸腺组织结构 幼年组胸腺小叶结构明显,皮质较厚,被膜下胸腺细胞密集,大小一致。位于中央的髓质呈散在的斑点状,含少量的胸腺细胞,较多的上皮性网状细胞,着色浅;胸腺小体个体小且少
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