2019高糖刺激肾小球系膜细胞Bcl-2、Smac、Fas的表达研究.doc
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1、DOC格式论文,方便您的复制修改删减高糖刺激肾小球系膜细胞Bcl-2、Smac、Fas的表达研究(作者:_单位: _邮编: _) 【摘要】 目的:研究高糖刺激肾小球系膜细胞后,凋亡相关基因Bcl-2、Smac、Fas的表达情况。方法: 将体外培养的大鼠肾小球系膜细胞分为正常对照组(糖浓度为5.6 mmol/L)和高糖组(糖浓度为30 mmol/L),采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同作用时间(12 h、24 h、36 h、48 h)下,系膜细胞的增殖状况,且在各时间点,采用免疫荧光染色法观察Bcl-2、Smac、Fas的表达情况并测定其荧光强度。结果:MTT比色法检测结果显示高糖组较对
2、照组系膜细胞增殖明显,与作用时间呈正相关。同时,免疫荧光检测结果显示高糖组Bcl-2在以上不同时间作用下,与对照组相比,荧光强度增强(P0.05),且高糖组随作用时间的延长,强度也相应增强,24 h、36 h、48 h各时间点的荧光强度与12 h相比,差异有统计学意义(P0.05)。而Smac、Fas的荧光强度与对照组相比则减弱(P0.05),且随作用时间的延长,强度也逐渐减弱,24 h、36 h、48 h各时间点与12 h相比,差异有统计学意义(P0.05)。Bcl-2的荧光强度与Smac或Fas的荧光强度之间存在明显的负相关关系(P0.05)。Smac的荧光强度与Fas的荧光强度之间存在明
3、显的正相关关系(P0.05)。结论:高糖刺激系膜细胞后,细胞增殖明显, Bcl-2的表达增加,Smac、Fas的表达下降,呈时间依赖性。 【关键词】 肾小球系膜细胞 高糖 Bcl-2 Smac FasAbstract Objective: To investigate the expression of apoptosis gene associated with Bcl-2, Smac, Fas in glomeruli mesaginal (Mcs) cells under high concentration glucose. Methods: Mcs cells were divide
4、d into two groups: control group(with normal concentration glucose, 5.6 mmol/L), high glucose group(with high concentration glucose, 30 mmol/L). Using MTT assay, the proliferation of Mcs after 12 h、24 h、36 h、48 h was examined respectively. The expression of Bcl-2、Smac、Fas in Mcs cells was observed b
5、y fluorescence microscope at each time point mentioned above and the fluorescent intensity was calculated by image analysis system. Results: The proliferation of Mcs cells under high concentration glucose was more obvious, compared with controls(P0.05), and was found in a time-dependent manner. At t
6、hese time points, the fluorescent intensity of Bcl-2 in high concentration glucose was stronger than controls(P0.05). But the fluorescent intensity of Smac, Fas was weaker(P0.05). And the effects were in time-dependent manners. In Mcs cells under high concentration glucose, the effects of 24 h, 36 h
7、, 48 h were more obvious than that of 12 h. The correlation between the fluorescent intensity of Bcl-2 and the fluorescent intensity of Smac or Fas was negative(P0.05) The correlation between the fluorescent intensity of Smac and the fluorescent intensity of Fas was positive(P0.05). Conclusion: High
8、 concentration glucose can promote the proliferation of Mcs. In Mcs cells under high concentration glucose , the expression of Bcl-2 increases, while the expression of Smac and Fas decreases, compared with controls.Key words Glomeruli mesaginal cell; High concentration glucose; Bcl-2; Smac; Fas增生性肾小
9、球肾炎的早期病变表现为球内细胞数量和(或)细胞外基质的异常增多,随着病变发展呈球内硬化,甚至全球硬化,并引起严重的肾功能障碍。肾小球细胞的异常增殖尤其是系膜细胞的异常增殖是肾小球炎症的基本病变,是导致细胞外基质异常堆积和肾小球硬化的一个共同途径。因而遏制球内细胞和基质的异常增多,是有效防治肾小球硬化的关键。以往研究多集中在增殖方面,随着凋亡研究的不断深入,发现维持细胞数目稳定需要增殖与凋亡两者作用的平衡。细胞凋亡参与了肾脏正常发育和肾脏病发生等多个过程。细胞凋亡受多种因素调控,在自身免疫性疾病及其肾脏损害的发病过程中,凋亡相关基因Bcl-2、Fas备受关注,近年来对新发现的一种促凋亡基因Sma
10、c研究也逐渐升温。Smac通过诱导procaspase-3的活性及增加成熟Caspase-3的酶活性促进凋亡,这两种功能均依赖于IAPs与Smac的相互作用。目前国内对凋亡基因Bcl-2,Fas研究较多,Smac研究尚不多见,尤其是Smac与Fas及Bcl-2的关系国内外报道少见。我们通过高糖刺激肾小球系膜细胞增殖,同时观察凋亡基因Bcl-2、Smac、Fas表达的变化,以探讨高糖刺激对系膜细胞增殖和凋亡的影响及其机制,进一步了解糖尿病肾病的发病机制,从而为糖尿病肾病的防治提供理论依据,对预防其发生,延缓其进展,具有重要的理论和实践意义。1 材料与方法1.1 材料 (1)细胞:肾小球系膜细胞购
11、自上海第二军医大学附属长征医院肾内科肾脏病实验室,是大鼠系膜细胞系;(2)试剂:DMEM粉剂购于GIBCO公司,胎牛血清购于杭州四季青生物工程材料有限公司,胰蛋白酶和四甲基偶氮唑蓝(MTT)购于AMRESCO公司,二甲亚砜(DMSO)购于上海实生公司。抗体:兔抗大鼠Bcl-2、兔抗大鼠Fas和荧光素标记羊抗兔IgG购于北京博奥森,羊抗大鼠Smac(C-20) 和荧光素标记驴抗羊IgG购于美国Santa Cruz公司。1.2 方法1.2.1 MTT法测定系膜细胞增殖状况 将铺满培养瓶底的310代系膜细胞胰酶消化,用吸管充分吹打成单细胞悬液,进行细胞计数。用含10%FCS的DMEM培养液,调细胞密
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