2014实验专题1(显微观察类140212).ppt
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1、2013-2014学年度实验专题复习,培养基的配制称量溶化调pH分装包扎,微生物培养的基本程序,一、光学显微镜操作技术(制片、染色、观察),1.实验目的:,观察细胞或细胞器的形态、显微结构 (如有丝分裂、线粒体、叶绿体) 观察细胞的活性或生理变化 (如细胞质流动、质壁分离及复原) 观察细胞内特定物质的分布 (如DNA、RNA的分布、脂肪的鉴定) 微生物的计数 (探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化),2.实验原理:,结构本身有颜色、易观察,不染色(+变化原理) (如观察叶绿体、细胞质流动、质壁分离及复原) 结构本身无颜色、不易观察,需染色 观察细胞的活性或生理变化活体染色 (如观察线粒体健那绿
2、B;观察液泡中性红) 观察静态结构或细胞内特定物质的分布染色 (如DNA、RNA的分布、脂肪的鉴定、有丝分裂),(3)在可计量空间内计数微生物的数量统计。,2.实验原理:,3.材料用具:,材料:易获得、易处理、易观察 用具和试剂(据此可以推测实验原理),4.方法步骤:取材制片观察,预处理,花生种子浸泡,切花生子叶薄片,撕取洋葱鳞片叶内表皮,刮取口腔上皮细胞,刮取口腔上皮细胞,黑藻光下、温暖条件下培养,剪取取黑藻叶片,剪取根尖,撕取洋葱鳞片叶外表皮,水培洋葱或大蒜等,组织中蛋白质检测,组织中还原糖检测,DNA粗提取和鉴定,亚硝酸盐的定量测定,苏丹或,甲基绿、派洛宁,龙胆紫或醋酸洋红,双缩脲试剂,
3、斐林或本尼迪特,二苯胺,对氨基苯磺酸、 N-1-萘基乙二胺溶液、 乙酸,玫瑰红色,蓝色,还原Cu(OH)2为砖红色Cu2O,碱性条件下,紫色,染色体被碱性染料着色,橘黄色或红色,亲脂,蓝绿色、红色,竞争结合,健那绿,专一性活细胞染料,蓝绿,5.临时装片制作,擦 滴 取 展 盖 染,2019/4/1,he9,临时装片的制作方法,以下制片方法分别用于什么实验? 切片法 整体装片法 涂片法 压片法 撕片法,2019/4/1,he10,6.显微观察的一般方法:, 显微镜结构:机械结构、光学结构 凹面、平面反光镜、遮光器、通光孔 物镜、目镜镜头长短与放大倍数,he12, 显微镜取放 显微观察:(低倍高倍
4、) 低倍显微镜观察: 调光调焦(粗、细)调物象位置,2019/4/1,he14,2019/4/1,he15,问题:,低倍镜和高倍镜光亮度差异及调节 无色透明结构的观察 手动装片的方向和视野中物象移动方向的关系 低倍物镜转换为高倍物镜的操作,(4)成像问题,倒像-移片 放大倍率-目物 视野直径与放大倍率成反比 放大倍数越大,视野亮度越小,2019/4/1,he17,苏丹染色结果,2019/4/1,18,1,猪脂肪细胞苏丹,染色10分钟,实验步骤,2019/4/1,he23,10%盐酸 1015min,解离,1011或 1516时,剪根,龙胆紫染液30秒,染色,盖片后缓挤压、轻扣击,压片,用显微镜
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