4.3《酵母细胞的固定化》课件古振宣.ppt
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1、实验一 酵母细胞的固定化 及其酒精发酵试验,食品专业综合实验,2,(一)酵母菌酒精发酵 在无氧条件下,酵母菌利用葡萄糖或淀粉水解糖发酵产生乙醇和CO2的作用,称为酒精发酵,总反应式为: C6H12O62C2H5OH+2CO2 酒精发酵是生产酒精及各种酒类的基础。本实验采用固定化酵母发酵,通过测定发酵过程中的酵母细胞数、生成的CO2量以及最终产物酒精的量,可以判断固定化酵母的发酵能力。,二、实验原理,3,微生物细胞的固定化方法有: (1)吸附法, (2)包埋法, (3)化学结合法。,包埋法,4,(二)细胞固定化技术 固定化细胞就是被限制自由的细胞。即采用物理或化学的方法将细胞固定在载体上或限度在
2、一定的空间界限内,但细胞仍保留催化活性并能反复或连续使用。,二、实验原理,游离细胞 固定化细胞,5,本实验采用凝胶包埋的固定化方法,把酵母细胞悬浮在海藻酸钠溶液中,再滴加入CaCl2溶液,形成海藻酸钙凝胶小球,细胞包埋在凝胶的小孔中,制成固定化细胞。,注意:已通过审查的学生设计方案, 可以按照自己设计的方法进行; 未通过的按实验讲义操作。,6,三、实验器材,1. 酵母菌细胞:酒精活性干酵母。 2. 2.5%海藻酸钠溶液40mL,2 % CaCl2溶液100mL。 3.培养基: 增殖培养基:浓度为130BX麦芽汁,以6N硫酸调节pH值至4.14.5。(每组100mL装于250mL三角瓶, 1kg
3、/cm2,灭菌30min后备用) 发酵培养基:淀粉水解液,具体制备见实验步骤。 4. 培养箱、显微镜、蒸馏装置及其他常规实验仪器,7,(二)干酵母活化 称取2g活性酒精干酵母; 加入到2%、 50mL蔗糖溶液中; 在培养箱中32活化1h左右; 离心(3000r/min、10min),弃去上清液; 湿酵母备用。,四、实验方法,8,(三)固定化操作 将酵母湿细胞与40mL海藻酸钠溶液混合均匀; 用注射器 (不用针头)将海藻酸钠酵母菌混合 液点滴滴入CaCl2溶液中,形成球状颗粒; 常温下静置2h,使其充分固化; 滤出凝胶颗粒;用无菌水洗涤23遍,即得固定化 酵母细胞。,四、实验方法,9,(四)固定
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