生化基础实验.doc
《生化基础实验.doc》由会员分享,可在线阅读,更多相关《生化基础实验.doc(17页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、生 化 实 验 讲 义基础实验 生物科学与工程学院实验一 实验基本操作技能培训一、 仪器的洗涤与干燥1. 仪器的洗涤化学实验中经常使用的玻璃仪器和瓷器,常常由于污物和杂质的存在而得不出正确的结果。因此,在进行化学实验时,必须把仪器洗涤干净。玻璃仪器的洗涤方法很多,应根据实验的要求、污物的性质、沾污程度来选择。常用的洗涤方法如下:(1)用水刷洗用水和毛刷刷洗,再用自来水冲洗几次,可除去附在仪器上的尘土、可溶性和不溶性杂质。注意洗刷时不能用秃顶的毛刷,也不能用力过猛,否则会戳破仪器。(2)用去污粉、肥皂洗、洗衣粉、洗涤剂洗去污粉由碳酸钠、白土、细砂等组成,它与肥皂、合成洗涤剂一样,能去除油污和一些
2、有机物。由于去污粉中细砂的摩擦和白土的吸附作用,使得洗涤的效果更好。洗涤时,可用少量水将要洗的仪器润湿,用毛刷蘸取少量去污粉刷洗仪器的内外壁,最后用自来水冲洗。用去污粉、洗衣粉、洗涤剂洗这些洗涤剂可以洗去油污和有机物质。若油污和有机物质仍然洗不干净,可用热的碱液洗。 (3)用铬酸洗液洗铬酸洗液是由浓硫酸和重铬酸钾配制而成的,具有很强的氧化性,对有机物和油污的去污能力特别强。使用铬酸洗液时要注意被洗涤的仪器内不宜有水,以免洗液被冲淡或变绿而失效。能用一般洗涤剂洗净的器皿,尽量不要选用洗液洗涤。(4)用特殊的试剂洗应根据沾在器壁上污物的性质,采用合适的方法或药品来处理。例如,沾在器壁上的二氧化锰用
3、浓盐酸处理;AgCl沉淀可以用氨水洗涤;硫化物沉淀可选用硝酸加盐酸洗涤等等。洗涤时应遵循“少量多次”的原则,一般以洗三次为宜。2玻璃仪器的干燥可根据不同的情况,采用下列方法将洗净的仪器干燥:(1)晾干不急用的仪器在洗净后,可倒置在干净的实验柜内或仪器架上任其自然干燥。(2)烘干将洗净的仪器尽量倒干水后放入烘箱内烘干。放入烘箱前要先把水沥干,放置仪器时,仪器的口应朝下。(3)吹干用吹风机或气流烘干器把仪器吹干。3. 基本度量仪器的使用和滴定分析的基本操作1)量筒量筒是实验中经常使用的度量液体的仪器之一,常见量筒的容量有10 mL、20 mL、50 mL、100 mL 、500 mL等,可根据需要
4、来选用。量取液体时,应用左手持量筒,并以大拇指指示所需体积的刻度处,右手持试剂瓶,将液体小心倒入量筒。读取刻度时,应让量筒垂直,使视线与量筒内液面的弯月形最低点处于同一水平面上,偏高或偏低都会产生误差。量筒不能作反应器用,也不能装热的液体。2)滴定管滴定管是用来进行滴定的器皿,用于测量在滴定中所用溶液的体积。酸碱滴定管滴定管一般分为两种,一种是酸式滴定管,另一种是碱式滴定管。各有白色、棕色之分。酸式滴定管的下端有玻璃活塞,可盛放酸液或氧化性溶液,不能盛放碱液,因为碱液会腐蚀玻璃,使活塞不能转动。盛放碱液时要用碱式滴定管,它的下端连接一橡皮管,内放一个比橡皮管管径稍大的玻璃珠作为开关以控制溶液的
5、流出,橡皮管下端再连一尖嘴玻璃管,这种滴定管不能盛放会腐蚀橡皮的溶液,例如酸或氧化性溶液等。滴定管洗涤:在洗涤前,应检查酸式滴定管的玻璃活塞与塞槽是否符合,活塞转动是否灵活。碱式滴定管下端连接一段橡皮管的粗细、长度是否适当,橡皮管的内管径应稍小于玻璃珠的直径,玻璃珠应圆滑,橡皮管应有弹性,否则难于紧固玻璃珠,操作时易上下移动而影响滴定。滴定管在用前必须仔细洗涤,当没有明显污物时,可以直接用自来水冲洗,或用滴定管刷蘸肥皂水刷洗(注意滴定管刷的刷毛必须相当软,刷头的铁丝不能露出,也不能向旁边弯曲,以免刷伤内壁),然后再用自来水洗去肥皂水。洗刷后的滴定管,应将其直立,使水流尽,若滴定管的内壁透明并不
6、附着液滴,表示已洗净。洗净后,滴定管用蒸馏水淌洗三次,第一次用蒸馏水10 mL,第二次及第三次各用蒸馏水5 mL。每次加入蒸馏水后,边转边向管口倾斜使蒸馏水布满全管,并稍振荡,将管直立,使水流尽。在用自来水洗涤后,应检查滴定管是否漏水。检查酸式滴定管时,把玻璃活塞关闭,用水充满至“0”刻度线以上,直立约2分钟,仔细观察有无水滴滴下,有无水由活塞隙缝渗出。然后将活塞转180,再如此直立12 分钟后观察有无水滴滴下或从活塞隙缝渗出。如果检查碱式滴定管,只需装水直立2分钟即可。如果发现漏水或酸式滴定管活塞转动不灵时,把酸式滴定管取下将活塞涂油,碱式滴定管则需换玻璃珠或橡皮管。活塞涂油时,把滴定管平放
7、在桌面上,先取下活塞上的橡皮圈,再取下活塞(拿在手上、放在干净的表面皿或滤纸上均可),用滤纸把活塞、活塞套、活塞槽内的水吸干,用手指粘少量凡士林擦在活塞两头,沿玻璃塞两端圆周各涂一薄层(如图3-6所示),但要避免涂得太多,尤其是在孔的近旁,油层要均匀涂满全圈,要尽可能薄些。涂完以后将活塞一直插入塞套中(不要转着插),插活塞时孔应与滴定管孔平行。然后向一个方向转动活塞,直到内外面观察时全部都透明为止。如果发现旋转不灵活,或出现纹路,表示涂油太多。遇到这些情况,都必须重新涂油。注意在套橡皮圈时,应该将滴定管放在桌上,一手顶住活塞大头,一手套橡皮圈或系橡皮圈,以免将活塞顶出。然后再用前面所介绍的方法
8、检查是否漏水。 按前述方法用自来水冲洗干净以后,分别用蒸馏水和标准溶液各洗涤两到三次。用标准溶液淌洗时,第一次用10 mL,第二次及第三次各用5 mL。每次加入溶液后,也是边转边向管口倾斜使溶液布满全管,直立以后,打开活塞使溶液从管尖口放出。在放出时一定尽可能完全放尽,然后再洗第二次。但要特别注意,在装入标准溶液之前应先将试剂瓶中的标准溶液摇匀,使凝结在试剂瓶内壁的水混入溶液中(这在天气比较热或室温变化较大时更有必要),混匀后,溶液应从试剂瓶中直接倒进滴定管,而不要经过其他器皿(如烧杯、漏斗、滴管等)。一定要注意,不要使溶液从试剂瓶移到滴定管的时候,改变它的浓度。 滴定管读数:读取滴定管容积刻
9、度的数值,称为读数。正确地读数是减少容量分析实验误差的重要措施。读数时应遵守下列规则:(1)读数前应观察,管壁是否挂有水珠,管内的出口尖嘴处有无悬挂液滴,管嘴是否有气泡。(2)读数时应把滴定管从滴定管架上取下,用右手大拇指和食指捏住管上部无刻度部位,使滴定管自然垂直,然后读数。每次装入溶液或放出溶液后,应等12分钟,待附着在管内壁的溶液流下后再读数。(3)对于无色和浅色溶液,应读取弯月面下缘实线的最低点,视线应与弯月面下缘实线的最低点相切。对于有色溶液,如KMnO4、I2溶液等,视线应与液面两侧的最高点相切。若滴定管的背后有一条蓝线或带,无色溶液就形成了两个弯月面,并且相交于蓝线的中线上,读数
10、时读此交点的刻度。(4)滴定时,最好每次从0.00 mL开始,或从“05 mL”的范围内的任一刻度开始,这样可以减少体积误差。滴定管读数必须准确至0.01 mL。(5)读取的读数立即记录在实验记录本上。滴定操作:使用酸式滴定管时,用左手控制活塞,大拇指在管前,食指和中指在管后,三指轻轻捏住塞柄,无名指和小指向手心弯曲,手心内凹,以防活塞被顶出造成漏液(如图3-9所示)。滴定时,右手握锥形瓶上部,将滴定管下端伸入锥形瓶口约l cm,然后边滴加溶液边向同一方向摇动锥形瓶。滴定的速度开始时可稍快,一般为34/秒滴左右,但不能滴成水线,应呈“见滴成串”。接近终点时,应逐滴加入,即加一滴摇动后再加,马上
11、到达终点时,应控制半滴加入,即将活塞稍稍转动,使半滴悬于管口,用锥形瓶内壁将其沾下,再用洗瓶吹洗内壁,使附着的溶液全部流下,然后摇动锥形瓶。如此继续滴定至滴定终点为止。 酸式滴定管的操作 碱式滴定管的操作使用碱式滴定管时(如图3-10所示),左手捏住乳胶管,拇指在前,食指在后,其余三指辅助夹住出口管,用拇指和食指捏住玻璃珠中上部,向一边挤压玻璃珠外面的乳胶管,使玻璃珠和乳胶管之间形成一个狭缝,溶液即可流出。注意不要用力捏玻璃珠,也不要使玻璃珠上下移动,更不要捏玻璃珠下部的乳胶管,以免进入空气形成气泡,影响读数。在烧杯中滴定滴定通常在锥形瓶中进行,必要时也可以在烧杯中进行(如图3-11所示)。把
12、烧杯放在实验台上,滴定管的高度应以其下端伸入烧杯内约1 cm为宜。滴定管的下端应在烧杯的左后方处,如放在中央,会影响搅拌;如离杯壁过近,滴下的溶液不易搅拌均匀。左手控制滴定管滴加溶液,右手持玻璃棒搅拌溶液。玻璃棒应作圆周搅动,不要碰到杯壁和底部。接近终点加半滴时,可用玻璃棒下端轻轻沾下,再浸入烧杯中搅匀。3)容量瓶容量瓶是一个细颈梨形的平底瓶。瓶塞是带有磨口的玻璃塞,细颈上刻有环形标线,瓶上标有容积(mL)和标定时的温度(一般为20)。在指定的温度下(一般为20),当液体充满到标线时,液体体积恰好与瓶上所标的体积相等。容量瓶有10mL、25mL、50mL、100mL、250mL、1000mL、
13、2000 mL几种规格,并有白、棕两色,棕色的用来配制见光易分解的试剂溶液。容量瓶不能加热,磨口瓶塞是配套的,不能互相调换。容量瓶用于配制准确的一定体积的溶液。也用于标准的浓溶液稀释。在使用容量瓶之前,要选择好容量瓶:(1)要选择与所要求配制的溶液体积相一致的容量瓶。 (2)要选择瓶塞与瓶口相符合、不漏水的容量瓶。选好容量瓶后,首先仔细检查有无裂痕破损,然后进一步检查瓶口与瓶塞间是否漏水。检查瓶口与瓶塞间是否漏水,可在瓶中放入自来水到标线附近,将瓶塞塞好,左手拿住容量瓶瓶口并用食指按住塞子,右手指尖顶住瓶底边缘,倒立2分钟左右,观察瓶塞周围是否有水渗出,如果没有,把瓶直立,转动瓶塞180后,再
14、倒立过来试一次。这样做两次检查是必要的,因为有时瓶塞与瓶口不是在任何位置都是密合的。容量瓶在使用前要充分洗涤干净,无论用什么方法洗,绝对不能用毛刷刷洗内壁。洗涤时,盖好瓶塞,充分振荡,洗完后立即将瓶塞塞好,以免灰尘落入或瓶塞被污染。 用容量瓶配制溶液时,如果是用固体配制准确浓度的溶液(或称标准溶液),一般是将固体物质称在大小适当的干净烧杯中,往其中加入少量的蒸馏水或适当溶剂使之完全溶解。溶解过程不论放热或吸热,都需待溶液至室温时,才能定量地将溶液转入容量瓶中。转移时,要把溶液顺玻璃棒加入,玻璃棒下端要靠住瓶颈内壁,使溶液顺内壁流入瓶中。注意玻璃棒下端的位置最好在标线稍低一点的地方,不要高到接近
15、瓶口,玻璃棒稍向瓶中心倾斜,烧杯嘴应靠近瓶口并紧靠玻璃棒,使溶液完全顺玻璃棒流入瓶内,待溶液全部流尽后,将烧杯轻轻向上提(烧杯嘴口仍应紧靠玻璃棒),同时直立,使附着在玻璃棒与烧杯嘴之间的溶液流入烧杯中或容量瓶内,然后先把玻璃棒放入烧杯中,才能把烧杯拿开放在桌上,用洗瓶吹水洗涤烧杯内壁和玻璃棒接触到溶液的部分3次,每次用水应尽量少些为宜,每次洗涤的水溶液应无损地转入容量瓶中。然后慢慢加蒸馏水至接近标线稍低1 cm左右,等12分钟,使黏附在瓶颈内壁的水流下后,再用细而长的滴管加蒸馏水恰至标线,这一过程称为定容。用滴管加水时,视线要平视标线,然后将滴管伸入瓶颈使管口尽量接近液面,稍向旁倾斜,使水顺壁
16、流下,注意液面上升,滴管应随时提起,勿使溶液接触滴管,直到弯月面下缘最低点与标线相切为止。定容以后,塞好瓶塞。左手拇指在前,中指、无名指及小指在后拿住瓶颈标线以上部分,右手托住瓶底。如果容积小于100mL的容量瓶,就不必用右手托住容量瓶瓶底,以免由此造成的温度变化对小体积产生较大的影响。将容量瓶倒转,使气泡上升到顶,再充分振荡,如此反复35次,即可摇匀。容量瓶不能久贮溶液,尤其是碱性溶液会侵蚀瓶塞,使瓶塞无法打开,配制好溶液后,应将溶液倒入清洁干燥的试剂瓶中贮存。容量瓶不能用火直接加热及烘烤。4) 移液管、吸量管用于准确移取一定体积的溶液的移液管,通常有两种形状,一种移液管中间有膨大部分,称为
17、胖肚移液管(胖肚吸管),常用的有5mL、10mL、25mL、50mL等几种;另一种是直形的,管上有刻度,称为吸量管(刻度吸管),常用的有1mL、2 mL、5 mL、10 mL 等多种(如图3-15所示)。 移液管和吸量管 洗涤移液管 移液管的使用用移液管或吸量管移取溶液前,先将用蒸馏水洗净过的移液管或吸量管用少量被移取的溶液淌洗23次,以免被移取溶液的浓度发生改变。为此,可倒少许溶液于一洁净而干燥的小烧杯中,用移液管吸取少量溶液,将管横向转动,使溶液流过管内标线下所有的内壁,然后使管直立将溶液由尖嘴口放出。吸取溶液时,一般可以用左手拿洗耳球,右手把移液管插入溶液中吸取。当溶液吸至标线以上时,马
18、上用右手食指按住管口,取出并用滤纸擦干下端,并把管尖接触于干净小烧杯壁上。然后转动移液管,稍松食指,使液体平稳下降,直至溶液的弯月面与标线相切,立即按紧食指,将移液管垂直放入接受溶液的容器中,管尖与容器壁接触(如图3-17所示),放松食指,使溶液自由流出,流完后再等15秒左右,残留于管尖的液体不必吹出(刻“吹”字的移液管例外),因为在校正移液管时,也未把这部分液体体积计算在内。移液管使用后,应立即洗净并放在移液管架上。4. 药品的取用方法1) 液体试剂的取用从滴瓶或者试管、锥形瓶等中取液体,使试剂滴入试管中(如图3-30所示),试管应垂直不要倾斜。滴管或移液管尖决不能伸入所用容器中,以免触及器
19、壁而沾污药品;装有试剂的滴管或移液枪不能平放或管口向上斜放,以免试剂倒流腐蚀。倒入试管里液体的量一般不超过其容积的1/3。 正确 不正确2) 固体试剂的取用(1)取用试剂前应看清标签。取用时,先打开瓶塞,将瓶塞倒放在实验台上。如果瓶塞一端不是平顶而是扁平的,可用食指和中指将瓶塞夹住(或放在清洁的表面皿上),决不可将它横置桌面上以免污染。不能用手接触化学试剂,应根据用量取用试剂。取用完毕,一定要把瓶塞盖严,绝不允许将瓶塞张冠李戴。然后把试剂瓶放回原处,以保持实验台整齐干净。 (2)要用清洁、干燥的药匙取试剂。用过的药匙必须洗净擦干后才能再使用。(3)注意取药不要超过指定用量,多取的不能倒回原瓶,
20、可放在指定的容器中供他人使用。(4)一般固体试剂可以放在干净的纸或表面皿上称量。具有腐蚀性、强氧化性或易潮解的固体试剂应放在表面皿或玻璃容器内称量。(5)往试管(特别是湿的试管)中加入固体试剂时,可用药匙或将取出的药品放在对折的纸槽上,伸进试管约2/3处,小心地将药品倒入试管内。加入块状固体试剂时,应将试管倾斜,使其沿着试管壁慢慢滑下,以免碰破试管二、常用仪器及设备的使用:1. 移液枪(微量移液器)使用方法:1)选择适当的微量移液器:不同型号的微量移液器,各有其吸取体积范围,请依取用溶液体积取用适当的微量移液器。QY100 20ul 100ulQY200 50ul 200ulQY1000 10
21、0ul 1000ul2)设定体积:设定体积时,请勿将体积调整圈转到超过最低或最高的使用范围,以免损坏移液枪。3)套上微量移液器头,吸取溶液: 吸取溶液时,尖端请先套上微量移液器头 (枪头),QY1000 使用藍色微量移液器头,QY200 及QY100 使用黄色微量移液器头。标准操作: 适用的液体:水、缓冲液、稀释的盐溶液和酸碱溶液。 1)按到第一档,垂直进入液面几毫米。 2)缓慢松开控制按钮,否则液体进入吸头过速会导致液体倒吸人移液器内部吸人体积减少。 3)打出液体时贴壁并有一定角度,先按到第一档,稍微停顿1s后,待剩余液体聚集后,再按到第二档将剩余液体全部压出。适用的液体:黏稠或易挥发液体
22、在移取黏稠或易挥发的液体时,很容易导致体积误差较大。为了提高移液准确性,可以采取以下方法: 1)移液前先用液体预湿吸头内部,即反复吸打液体几次使吸头预湿,吸液或排出液体时最好多停留几秒。尤其对于移取体积大的液体,建议将吸头预湿后再移取。 2)采用反相移液法:吸液时按到第二档,慢慢松开控制按钮,打液时按到第二档,部分液体残留在吸头内。 3)适当加热液体,使其易于吸取。使用注意事项:1) 勿将微量移液器本体浸入溶液中。2) 吸液时,移液器本身倾斜,导致移液不准确(应该垂直吸液,慢吸慢放)。3)吸取黏度高之试液,请先将微量移液器头尖端以刀片或剪刀将出口切大,并先行预润后再吸取。4) 用大量程的移液器
23、移取小体积样品(应该选择合适量程范围的移液器)。直接按到第二档吸液5)吸取酸液或具腐蚀性溶液后,请将微量移液器拆解开,各部位零件以蒸馏水冲洗干净,擦干后再正确组合回復原狀。6) 微量移液器的任何部份切勿用火烧烤,亦不可吸取温度高于70的溶液,避免蒸气侵入腐蚀活塞。7) 套有微量移液器头的微量移液器,无論微量移液器头中是否有溶液,均不可平放,需直立架好。2. 分析天平及电子天平的使用方法:1) 事先检查电源电压是否匹配(必要时配置稳压器),接通电源并预热使天平处于备用状态。并检查并调整天平至水平位置。2) 预热足够时间后打开天平开关,天平则自动进行灵敏度及零点调节,使天平处于零位,否则按去皮键。
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 生化 基础 实验
链接地址:https://www.31doc.com/p-2531821.html