第1节DNA重组技术的基本工具.ppt
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1、专题1:基因工程,基因工程的概念,基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,并通过体外DNA重组和转基因技术,赋予生物以新的遗传特性,从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的,故又叫做DNA重组技术或基因拼接技术。,生物体外,基因,DNA分子水平,剪切拼接导入表达,符合人类需要的基因产物,基因拼接技术或DNA重组技术,基因工程的产物,基因工程产品,抗虫害的玉米,转基因鲑鱼,分子手术刀:核酸限制性内切酶(限制酶),分子缝合针 :DNA连接酶,分子运输车:载体,1.1 DNA重组技术的基本工具,识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列,并且
2、使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。,1、主要来源: 2、作用: 作用特点: 作用位点: 3、结果:,一、 “分子手术刀” 限制性核酸内切酶 (限制酶),两种末端,原核生物,为什么限制酶主要来源于原核生物?其在原核生物中的作用是什么?,特点:反向、对称、重复排列,为什么原核生物中的限制酶不剪切自身的DNA分子?,专一性/特异性,磷酸二酯键,限制酶的识别序列:,EcoR,黏性末端,黏性末端,切割的位点:G、A之间 断裂的化学键是:磷酸二酯键,Sma,平末端 平末端,产生黏性末端或平末端。,限制酶的作用结果:,限制酶所识别的序列,无论是6个碱基还是4个碱基,都可以找到一条中心轴线
3、(如图),中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向、对称、重复排列的。,想一想限制酶所识别的序列有什么特点?,为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA?,通过长期的进化,细菌中含有某种限制酶的细胞,其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列,或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上,使限制酶不能将其切开。这样,尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断,并且可以防止外源DNA的入侵。,GAATTC,CTTAAG,GAATTC,CTTAAG,G,AATTC,CTTAA,G,G,AATTC,CTTAA,G,G,CTTAA,AATTC,G,双链断开,不同来源的DNA片段结合,1、种类: 2
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