拟南芥泛素化课件.ppt
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1、蛋白质修饰与基因表达 蛋白质泛素化,制作人:孟海涛 丁锦君,蛋白质的修饰包含甲基化,磷酸化,乙酰化,泛素化等,各种修饰在基因表达转录和翻译过程中发挥重要作用, 本次讲泛素化在拟南芥脱落酸调控中的作用。,首先了解和下面要讲到的几个名词,泛素化;泛素化是对特异的靶蛋白进行泛素修饰的过程。在蛋白质分子一个位点上结合单个或多个泛素残基的现象。 自泛素化:指本身含有结合泛素分子的能力,进行降解。这里特指KEG蛋白自降解过程 KEG基因:拟南芥的一段功能基因,翻译出KEG蛋白,此蛋白包含泛素化酶E3连接酶和激酶域。 KEG E3连接酶:协助泛素分子中间体结合到靶蛋白,降解靶蛋白作用。,ABI5:ABA的转
2、录因子,在体内高表达时,会抑制种子的萌发和集体的生长。 。 ABA;脱落酸, 指能引起芽休眠、叶子脱落和抑制生长等生理作用的植物激素。,一,KEG基因:,keg-1(KEG基因的双隐性突变体),不产生KEG蛋白。 keg-1/35S:HA-KEG;有HA标记基因的单显杂合体,能产生KEG蛋白。 keg-1/35S:HA-KEGAA:有HA标记基因的单显杂合体,但不能产生完整功能的KEG蛋白,KEG基因部分区域被改变(29-cys,31-his,变成了Ala)。,KEG基因与ABI5关系,ABI5抗体杂交实验,检测ABI5表达量高低, keg-1(KEG基因的双隐性突变体),不产生KEG蛋白,A
3、BI5含量+ keg-1/35S:HA-KEG;有HA标记基因的单显杂合体,能产生KEG蛋白, ABI5含量+ keg-1/35S:HA-KEGAA;产生无活性的KEG蛋白, ABI5含量+,通过许多其他实验证实: KEG蛋白中E3连接酶具有靶向连接ABI5泛素化作用,使之被26S蛋白酶体降解。使具有抑制植物生长发育的ABI5含量的降低,植物能生长。 即KEG正常表达,降解ABI5含量,解除生长抑制,能生长。,KEG基因与ABA,以及通过其他实验证实:1.KEG过量表达,对ABA作用就失敏 2.,KEG基因表达与泛素化作用,蛋白酶体抑制剂MG132.抑制26S蛋白酶体对KEG蛋白降解。STAU激酶抑制剂,抑制KEG蛋白自泛素化。(所用的类型都为keg-1/35:HA-KEG),总结KEG与ABI5,ABA关系,
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- 拟南芥 泛素化 课件
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