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1、浅谈,高效液相色谱法,高效液相色谱法,HPLC鉴于HPLC应用在药品分析中越来越多,因此每一个药品分析人员应该掌握并应用HPLC。,液相色谱法开始阶段是用大直径的 玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相,称为经典液相色谱法,此方法柱效低、时间长(常有几个小时)。高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography,HPLC)是在经典液相色谱法的基础上,于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀,小颗粒具有高柱效,但会引起高阻力,需用高压输送流动相,故又称高压液相色谱法(High Pressure Liq
2、uid Chromatography,HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography,HSLP)。也称现代液相色谱。,二、色谱分离原理,三、HPLC的特点和优点,一、液相色谱理论发展简况,四、实例应用:高效液相色谱法测定面粉 中荧光增白剂,色谱法最早是由俄国植 物学家茨维特(Tswett) 在1906年研究用碳酸钙 分离植物色素时发现的, 色谱法(Chromatography) 因之得名。FLASH后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。幻灯片 3,HPLC有以下特点: 高压压力可达150300 Kg/
3、cm2。色谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上。 高速流速为0.110.0 ml/min。 高效可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种 高灵敏度紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。,HPLC与经典液相色谱相比有以下优点: 速度快通常分析一个样品在1530 min,有些样品甚至在5 min内即可完成分辨率高,选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。 灵敏度高紫外检测器可达0.01ng,荧光和电化学检测器可达0.1pg 柱子可反复使用用一根色谱柱可分离不同的化合物。 样品量少,容易回收样品经过色谱柱后不被破坏,可以收集单一组分或做制备。幻灯片 3,色谱法的分离原理是:
4、溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时,由于与固定相(stationary phase)发生作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和)的大小、强弱不同,在固定相中滞留时间不同,从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法 http:/202.112.154.83/zskj/2006/movings/50503.swf,高效液相色谱法按分离机制的不同分为: 液固吸附色谱法 液液分配色谱法(正相与反相) 离子交换色谱法 离子对色谱法 分子排阻色谱法,1液固色谱法 使用固体吸附剂,被分离组分在色谱柱上分离原理是根据固定相对组分吸附力大小不同而分离。分离过程是一个吸附解吸附的平衡过
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