黄曲霉素M1试剂盒说明书1.doc
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1、 黄曲霉素M1 ELISA检测试剂盒 1、 概述黄曲霉素是霉菌的产物,高毒性并致癌。黄曲霉素M1不是微生物而是在动物体中由黄曲霉素B1转化形成的。当奶牛食用有黄曲霉素B1污染的饲料后,通过消化和分泌,黄曲霉素就会转化为羟基化的黄曲霉素M1,绝大部分分泌到乳汁中。因此,黄曲霉素M1浓度反映了饲料中黄曲霉素B1的含量。欧盟对奶中的黄曲霉素M1限量是0.05ppb(50ppt)。用竞争酶联免疫分析法检测生物样本中的黄曲霉素M1。所有酶联免疫分析的试剂包括标准品都由试剂盒提供。检测数量:96孔(含标准品孔)检测时间:20分钟2、 原理分析在包被有黄曲霉素M1抗体的聚苯乙烯微孔中进行。黄曲霉素M1标准溶
2、液和样品加入微孔,在温浴过程中,游离的黄曲霉素M1分子与抗体结合,没有结合的物质在清洗步骤中被清洗,第二次温浴时已经加入HRP-黄曲霉素M1酶标物,它将没有结合的抗体位点全部覆盖。通过加入基底物质可以确定酶活性,第三次温浴时酶将无色的显色剂转变成一种蓝色,加入终止液使蓝色变成黄色,用酶标仪在450nm测定吸光度,通过颜色深浅不同换算成黄曲霉素M1的浓度值。3、 应用范围黄曲霉素M1ELISA试剂盒用于定量检测牛奶和奶酪中的黄曲霉素M1。4、 提供的试剂 1、微孔板:96孔(128,可拆卸) 2、酶标物:冻干粉一瓶3、酶标物稀释液:13ml一瓶4、样品稀释液:一瓶(使用时加入40mL双蒸水充分溶
3、解后使用)5、清洗液(10):50ml一瓶6、显色剂:13ml一瓶7、终止液:13ml一瓶8、黄曲霉素M1标准品溶液:61ml/瓶(0ng/mL,0.005ng/mL,0.03ng/mL,0.15ng/mL,0.5ng/mL, 2ng/mL)5、 试剂盒未提供的材料1、10-1000 ul不同规格的微量移液器2、50-300ul多道移液器3、酶标仪(有450nm滤光片)4、离心机(如果离心速度低最好使用低温离心机)5、带盖试管6、涡旋振荡器7、正己烷8、二氯甲烷9、离心管10、去离子蒸馏水6、 试剂贮存1、试剂盒贮存在28,切勿冰冻2、未用完的微孔板反应该密封干燥28保存7、 注意事项 1、终
4、止液具有刺激性,显色剂具有毒性,切勿接触皮肤2、试剂盒过期后不得使用3、请勿混用不同批号的试剂8、 工作溶液准备1、酶标物工作液:使用时精确加入12mL酶标物溶解液充分溶解,使用前恢复至室温,并且摇匀,切勿涡旋振荡。2、样品稀释液工作液:使用时加入40ml双蒸水充分溶解后使用。3、清洗液:用蒸馏水1:10稀释(19)。注意:如有结晶请在室温下摇动彻底溶解4、显色剂:已备用,请避免光线直照5、终止液:已备用6、黄曲霉毒素M1标准品:已备用9、 样品处理一、牛奶1、样品冷藏,28下3000g离心10分钟2、分离奶脂和奶清3、奶清直接检测(稀释倍数:1倍)二、奶粉1、称取奶粉1g加10ml蒸馏水2、
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