黄曲霉素测定方法.doc
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1、黄曲霉毒素测定法1 简述 黄曲霉毒素可以有曲霉菌黄曲霉、寄生曲霉、集封曲霉和伪溜曲霉4种真菌产生,是一组化学结构类素的二呋喃香豆素的衍生化合物,中药在贮藏、制备、运输过程中如保存不当有受潮霉变而污染黄曲霉毒素的可能。黄曲霉毒素是目前世界上已知的毒性最强的化合物之一,其致癌性肯定。对中药中黄曲霉毒素残留量进行严格控制对保证药用安全具有重要意义。 本法的基本原理为样品经有机溶剂提取、免疫亲和柱净化后,利用高效液相色谱分离,柱后碘衍生-荧光检测器检测进行分析测定。2 仪器与用具2.1 高速匀浆机、振荡器2.2 高效液相色谱单元,配荧光检测其(具360nm激发波长和大于420nm发射波长)2.3 柱后
2、衍生系统2.4 离心机2.5 超纯水处理系统2.6 黄曲霉总量(B1、B2、G1、G2)免疫亲和柱2.7 固相萃取装置2.8 离心管,具塞锥形瓶,刻度浓缩瓶,移液管,容量瓶等。3 试药与试液3.1 甲醇、乙腈均为色谱纯。3.2 水位高纯水。3.3 黄曲霉毒素混合对照品。3.4 0.05%的碘溶液:取碘0.5g,加入甲醇100ml使溶解,用水稀释至1000ml即得。4.色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-乙腈-水(40:18:42)为流动相,流速每分钟0.8m;采用柱后衍生法检测,(1)碘衍生法:衍生溶液为0.05%的碘溶液(取碘0.5g,加入甲醇100ml使溶解,
3、用水稀释至1000ml制成),衍生化泵流速每分钟0.3ml,衍生化温度70;以荧光检测器检测,激发波长ex =360nm,发射波长em =450nm。进样量:2050l(视灵敏度进行调整)。按上述条件操作,理论板数以B1计应不低于5000,两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。 5.操作方法5.1 混合对照品溶液的制备 精密量取黄曲霉毒素混合标准品(黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标示浓度分别为1. 0g/ml、0.3g/ml、1.0g/ml、 0.3g/ml、)0.5ml,置10ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,作为储备液。精密量取储备液1ml,置25ml量瓶中,用70%甲醇稀释至刻度,即得。 5
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