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1、第四章 毒作用机制外源化学物对生物机体的毒作用主要取决于机体暴露的程度与途径。*毒物作用过程涉及多个步骤:接触吸收转运靶部位分子结构变化,功能紊乱修复修复失调毒性效应*多数毒物发挥毒性作用至少经历4个过程:1、经吸收进入机体的毒物通过多种屏障转运至一个或多个靶部位;2、进入靶部位的终毒物与内源靶分子发生交互作用;3、毒物引起机体分子、细胞、组织水平功能和结构的紊乱;4、机体启动不同水平的修复机制应对毒物对机体的作用,当机体修复功能低下或毒物引起的功能和结构紊乱超过机体的修复能力时,机体出现组织坏死、癌症和纤维化等毒性作用。*阐明毒作用机制具有重要意义:1、为更清楚地解释描述性毒理学资料、评估特
2、定外源化学物引起有害效应的概率、制定预防策略、设计危害程度较小的药物和工业化学物以及开发对靶生物具有良好选择毒性的杀虫剂等提供理论依据;2、有利于人们对机体基本生理和生化过程以及人类某些重要疾病病理过程的进一步认识。大多数毒物的毒作用机制尚未完全阐明。由于有毒化学物种类和数量较多,不同种类毒物作用机制不同。*研究毒性机制应明确以下几点 :1、毒性效应是由毒物引起正常细胞发生生理和生化改变的结果2、毒性效应的程度除毒物本身外,还与剂量及靶部位有关3、靶组织和靶器官具有代偿能力,可超常发挥解毒功能4、毒效应包括一般毒性效应和特殊毒性效应研究 *研究中毒机制步骤:1、整体动物有无毒性2、找出靶器官、
3、靶组织 3、进一步找出受损的细胞、亚细胞 4、分子水平:DNA、RNA或蛋白质复杂的毒性机制可涉及多个层次和步骤,毒物被转运到一个或多个靶部位,毒物或代谢产物与内源性靶分子相互作用。毒物引起的靶分子结构改变或功能紊乱超过修复能力或修复本身障碍时,即产生毒性效应机制毒理学(Mechanistic toxicology)第一节 毒物ADME过程和靶器官毒效应强度取决于:终毒物在其作用靶器官的浓度和持续时间。靶位点学说:毒物产生毒性作用的位点,称为靶位点。靶位点:接触污染物的部位;污染物转化、累积部位。终毒物:是指与内源靶分子(如受体 、酶、DNA、微丝蛋白、脂质)反应或严重地改变生物学(微)环境、
4、启动结构和(或)功能改变而表现出毒性的物质。可以是机体接触的化学物原型或其代谢产物,也可以是毒物在体内生物转化过程中生成的活性氧、活性氮或内源性分子。终毒物在靶分子上的浓度取决于:毒物在靶部位浓度的增减过程的相对有效性,图4-1。一、从接触部位进入血液循环(一)毒物的吸收毒物的吸收:毒物从接触部位进入血液循环的过程。多数毒物透过细胞扩散穿越上皮屏障到达毛细血管。影响毒物吸收率的因素:与在其吸收表面的浓度有关,主要取决于1)暴露速率2)化学物的溶解度3)暴露部位的面积4)发生吸收过程的上皮特征(如角质厚度)5)上皮下微循环6)毒物理化特性(脂溶性是最重要的理化特性,脂溶性化学物比水溶性的更容易吸
5、收)(二)毒物进入体循环前的消除毒物从暴露部位转运到体循环过程中可能被消除。如从胃肠道吸收的化学物进入体循环分布前,先通过胃肠道粘膜细胞、肝脏和肺。肠上皮、肝细胞含有丰富的药物代谢酶和药物转运蛋白。进入血液循环前,部分毒物在药物转运蛋白作用下从肠上皮细胞迅速泵回肠腔,部分毒物在肠和肝药物代谢酶作用下迅速代谢,最终只有一部分毒物穿过黏膜屏障进入体循环。例:乙醇、吗啡、锰二、从血液循环进入靶部位毒物从血液循环进入细胞间隙并进入细胞。血浆中溶解的外源化学物通过毛细血管内皮经水相细胞间隙、穿细胞孔道、穿越细胞膜进行扩散。影响毒物分布的因素:1)脂溶性,脂溶性化学物易于扩散并迅速进入细胞,高度离子化和亲
6、水性局限于细胞外空间。2)分子大小,3)分子形状,4)电离度(一)促进毒物分布的靶部位的机制促进因素有:1、毛细血管内皮的多孔性2、专一化的膜转运3、细胞器内的蓄积4、可逆性细胞内结合1、毛细血管内皮的多孔性肝窦、肾小管周围毛细血管具有较大孔道(直径50-150nm),甚至蛋白质结合的外源化学物可以通过,有利于化学物在肝脏和肾脏的蓄积。2、专一化的膜转运专一化离子通道,膜转运蛋白可转运毒物进入细胞内靶部位。例3、细胞器内的蓄积具有可质子化的胺基和亲执行的两性外源化学物蓄积在溶酶体和线粒体中,并引起不良效应。胺与溶酶体磷脂结合削弱溶酶体降解作用,引起磷脂沉着症。线粒体中的蓄积考离子渗透作用实现。
7、4、可逆性细胞内结合黑色素(细胞内多聚阴离子芳香族聚合物),可结合有机和无机阳离子及多环芳烃等。黑色素结合毒物释放导致氯丙嗪和氯喹视网膜毒性和锰引起的黑质神经元损害以及黑色素瘤。(二)妨碍毒物分布到靶部位的机制影响毒物向特定部位分布的因素:1、血浆蛋白结合2、专一化屏障3、贮存部位的分布4、与细胞内结合蛋白结合5、从细胞内排出1、血浆蛋白结合。与血浆蛋白的结合推迟并延长了毒物的效应和排出。外源化学物与血浆高分子量蛋白质或脂蛋白结合,无法扩散透过毛细血管,及时透过孔道离开血液,也难渗透通过细胞膜。要想通过血液进入细胞,必须与蛋白质解离。2、专一化屏障。1)脑组织毛细血管内皮细胞缺乏孔道,所以谁渗
8、透性极低。这种血脑屏障阻止亲水化学物进入脑组织。2)生殖细胞与毛细血管之间被多层细胞分隔开,精母细胞被其他细胞包裹,形成血睾屏障,水溶性毒物难以进入生殖细胞。3)亲水性毒物收到胎盘屏障限制,难以通过。4)所有屏障对脂溶性毒物均没有屏障作用。3、贮存部位的分布。外源化学物蓄积在某些组织不发生毒性效应。氯代烃杀虫剂蓄积在脂肪细胞中,减少在其靶部位的浓度,起到保护作用,但当饥饿时引起脂肪快速消耗,氯代烃杀虫剂重新进入人体循环并分布至靶部位神经组织。这可能是暴露于杀虫剂的鸟类迁徙期间和冬季食物受限时死亡的主要原因。氯代烃杀虫剂,卤代烃,烃分子中的氢原子被卤素原子取代后的化合物称为卤代烃(halohyr
9、ocarbon),简称卤烃。卤代烃的通式为:(Ar)R-X,X可看作是卤代烃的官能团,包括F、Cl、Br、I。许多卤代烃可用作灭火剂(如四氯化碳)、冷冻剂(如氟利昂)、麻醉剂(如氯仿,现已不使用)、杀虫剂(如六六六,现已禁用),以及高分子工业的原料(如氯乙烯、四氟乙烯)。4、与细胞内结合蛋白结合。与细胞内非靶部位的结合也能暂时减少毒物在靶部位的浓度。镉不是人体的必需元素。人体内的镉是出生后从外界环境中吸取的主要通过食物水和空气而进入体内蓄积下来。镉和镉化合物引起的中毒。有急性慢性中毒之分。吸入含镉气体可致呼吸道症状经口摄入镉可致肝肾症状。金属硫蛋白是一种富含半胱氨酸的胞浆蛋白,镉进入血液后迅速
10、与金属巯蛋白(metallothionein,MT)结合形成镉金属巯蛋白(MTCd),约70%在红细胞中,30%在血浆中。在急性镉中毒是金属硫蛋白与镉结合可以减轻镉对细胞的毒性作用。5、从细胞内排出。细胞内毒物可以转运会细胞外间隙。这种现象发生于脑毛细血管内皮细胞。这些细胞在毛细血管内皮腔膜上含有一种膜转运蛋白P蛋白,是多药耐药基因表达的。P蛋白可以将化学物从细胞内排出,对血-脑屏障有重要作用。卵母细胞、肠上皮细胞、肝细胞和肾小管上皮细胞均表达丰富的P蛋白。胎盘组织的P蛋白对组织环境致畸物通过胎盘屏障引起对胎儿的损害有重要的保护作用。多药耐药性(MDR)是指对一种药物具有耐药性的同时,对其他结
11、构不同,作用靶点不同的抗肿瘤药物也具有耐药性。多药耐药性是导致抗感染药物治疗和肿瘤化疗失败的重要原因之一,2010年出现的“超级细菌”也是多药耐药性的一种。多药耐药性的产生是由于细胞解除药物活性的分子发生变异或过度表达引起的。多药耐药基因:与发生多药耐药性有关的基因,它编码一种需能量的排出泵(P-糖蛋白质),对疏水性细胞毒性药物起作用,如:多柔比星(阿霉素)、长春新碱、依托泊苷及紫杉酚。在许多肿瘤细胞株和肿瘤标本中P-糖蛋白质表达升高。(三)排泄与重吸收1、排泄排泄,指外源化学物及其代谢产物从血液中消除并返回外界环境的过程。是消除毒物的物理机制,生物转化是化学机制。排泄途径与速度取决于毒物的理
12、化性质。*为什么主要排泄器官(肝、肾)只能有效清除亲水性和离子化的化学物(有机酸、有机碱)。1)只有溶于血浆的化学物可通过肾小球滤过2)肝细胞和肾近曲小管的转运蛋白专一性排泄高亲水性的有机酸和有机碱3)只有亲水性化学物无约束地溶于尿与胆汁4)脂溶性化学物易于通过细胞扩散而被重吸收*非挥发性高亲脂性化学物(多氯联苯、氯代烃杀虫剂)无有效排泄机制。原因:1)这些物质能抵抗生物转化,消除过程十分缓慢;2)机体重复暴露是,易于在体内蓄积。消除过程(效率不高):1)乳汁排泄,2)与胆汁胶团和磷脂囊泡结合从胆汁排泄,3)从肠道排泄.多氯联苯:联苯苯环上的氢被氯取代而形成的多氯化合物,对生物体有积蓄性毒害作
13、用。属于致癌物质,容易累积在脂肪组织,造成脑部、皮肤及内脏的疾病,并影响神经、生殖及免疫系统。2、重吸收转运至肾小管的毒物可穿过肾小管细胞扩散会小管外周毛细血管。小管液的重吸收促进这一过程。经重吸收的过程需要化学物具有脂溶性。有机酸和有机碱的扩散与离子化程度呈负相关。弱有机酸(水杨酸、苯巴比妥)和有机碱(苯丙胺、奎尼丁)的离子化过程与小官也pH有关。尿液的酸化有利于有机碱排泄,尿液碱化有利于有机酸的消除。铬酸盐和钼酸盐通过硫酸盐转运蛋白重吸收,砷酸盐通过磷酸盐转运蛋白重吸收。胆汁、胃肠排泄,唾液腺和外分泌腺分泌最后转运到胃肠道的毒物,可以通过小肠粘膜扩散而重吸收。因为分泌到胆汁的化学物常是有机
14、酸,只有那些在肠腔中能转变为脂溶性较强的化学物才可能在肠道重吸收。水杨酸是医药、香料、染料、橡胶助剂等精细化学品的重要原料。在医药工业中,水杨酸本身用作消毒防腐药,用于局部角质增生及皮肤霉菌感染。作为医药中间体,用于止痛灵、利尿素、乙酰水杨酸)、水杨酸钠、水杨酰胺、优降糖、氯硝柳胺、水杨酸苯酯、对羟基苯甲酸乙酯、次水杨酸铋、柳氮磺胺吡啶等药物的生产。苯巴比妥1.镇静:如焦虑不安、烦躁、甲状腺功能亢进、高血压、功能性恶心、小儿幽门痉挛等症。 2.安眠:偶用于顽固性失眠症,但醒后往往有疲倦、思睡等后遗效应。 3.抗惊厥:常用其对抗中枢兴奋药中毒或高热、破伤风、脑炎、脑出血等疾病引起的惊厥。 4.抗
15、癫痫:用于癫痫大发作的防治,作用出现快,也可用于癫痫持续状态。 5.麻醉前给药。 6.与解热镇痛药配伍应用,以增强其作用。 7.治疗新生儿核黄疸。苯丙胺(Amphetamine)是一种中枢兴奋药(苯乙胺类中枢兴奋药)及抗抑郁症药。因静脉注射具有成瘾性,而被列为毒品(苯丙胺类兴奋剂)。三、增毒与解毒(一)终毒物的形成终毒物:是指与内源靶分子(如受体、酶、 DNA等)反应或严重地改变生物学(微) 环境,启动结构和(或)功能改变而表现出毒性的物质。终毒物在其作用位点的浓度及持续时间决定了毒效应的强度。增毒(toxication)或代谢活化(metabolic activation):外源化学物经生物
16、转化使其毒性增强,甚至可产生致畸、致癌效应的过程。经税务转化成为终毒物的过程。增毒过程主要是使外源化学物转变为:亲电子剂/亲电物(electrophiles) 自由基(free radicals) 亲核物(nucleophiles)氧化还原性反应物(redox-active reductants)1、亲电子剂/亲电物的形成(formation of electraophiles)亲电物(electrophiles):是一类缺少电子而使整个分子部位或全部带正电的物质亲电物可与含电子的亲核物共享电子对而产生中毒反应,常常是外源化学物经Cyp450或其他酶氧化成酮、环氧化物、不饱和酮和醛、醌和酰卤化
17、物等物质阳性亲电物常由化学键断裂而形成2、自由基自由基(free radicals):是指独立游离存在的带有不成对电子的分子、原子或离子自由基通过接受或失去一下电子,或由化合物的共价键发生均裂而形成特点:1)具有顺磁性2)化学性质十分活泼3)反应性极高,半减期极短,作用半径短自由基在生物体内来源有:一是细胞正常生理过程产生;二是化学毒物在体内代谢过程产生。许多外来化合物可通过各种不同途径产生自由基,但其中最主要的途径是通过氧化还原反应(redox cycling)。它通过加入一个单电子使化学物还原为不稳定的中间产物,随后这个电子转移给分子氧而形成超氧阴离子自由基(O2-),而中间产物则再生为原
18、化学物。如:百草枯(PQ+)、阿霉素(DR)和硝化呋喃托英(NF)可从还原酶接受一个电子形成自由基。*自由基的类型 (types of free radicals)活性氧(reactive oxygen species, ROS):一类化学性质活泼的含氧功能基团的物质。 包括: 单线态氧 超氧阴离子自由基(O2) 羟基自由基(OH) 过氧化氢(H 2 O 2 ) 臭氧(O 3 ) 氮氧化物(NO X ) 次氯酸(HOCl)*自由基的来源 (sources of free radicals) 1)生物系统产生的自由基 胞浆中的小分子:自氧化促使氧还原,产生氧自由基 胞浆蛋白质:xanthine
19、oxidase、dopamine- -hydroxylase、D-amino acid oxidase、and fatty acyl CoA oxidase 均可产生ROS膜酶活性:lipoxygenase、cycloxygenase吞噬细胞的吞噬过程及呼吸爆发 (respiratory burst) 过氧化酶体线粒体电子传递过程能生成ROS 微粒体电子传递系统3、亲核物是毒物活化作用较少见的一种机制。硒化氢是由亚硒酸盐与谷胱甘肽或其他巯基反应形成的一种强亲核物。一氧化碳经由氧化取卤反应而形成的毒性代谢产物。4、活性氧化还原产物最活泼的代谢物是缺电子的分子或分子片 段,如亲电子物或中性物,或阳
20、性物 多数亲核物需转化成亲电子物后才能反应 带一个多余电子的自由基在HOOH的断 裂,形成中性 . OH而产生毒性作用(二)解毒作用解毒(detoxication):是指通过生物转化 而将终毒物排除,或者阻止毒性产物形成的过程 在某些情况下,解毒可能与中毒竞争同一化学物根据毒物化学性质,解毒途径可分为:1、无功能基团毒物的解毒无功能基团化学物(苯和甲苯)+功能基团(羟基和羧基)含功能基团产物+内源性酸如葡萄糖醛酸、硫酸或氨基酸不活泼的、高度亲水的有机酸排出体外2、亲核物的解毒一般通过在亲核功能基团上的结合反应来解毒如羟化的化合物通过硫酸化作用、葡萄糖醛酸化作用。3、亲电子剂的解毒一般亲电性毒物
21、的解毒是通过与巯基亲核物谷胱苷肽共轭结合而解毒,此类反应可自发产生或由谷胱甘肽-硫转移酶协同进行,金属离子如Ag2+、Cd2+、Hg2+和CH3Hg离子很容易与谷胱甘肽反应而解毒。4、自由基的解毒没有任何一种酶能排除HO唯一有效的抗HO的方法是防止其产生,可通过两个反应即将O2-先转化成HOOH,再将HOOH转化成水。酶性抗氧化系统 a SOD:是一类含有不同辅基的金属结合酶家族,如CuZn-SOD、Fe-SOD与Mn-SOD。它们在细胞内定位变化很大,CuZnSOD存在多种脏器内如肝脏、红细胞,而Mn-SOD主要在线粒体。它的唯一生理功能是歧化超氧阴离子(O2-),生成H2O2和O2。 b
22、过氧化氢酶(CAT):位于肝细胞和红细胞内过氧化小体中,其主要功能是将H2O2转化为水。 c GSH-Px(GPO):在机体内广泛存在,能特异地催化谷胱苷肽对过氧化物的还原反应,使过氧化物转化为水或相应的醇类。可阻断脂质过氧化的链锁反应。 d 谷胱苷肽还原酶(GR):其分布同GSH-Px,主要功能是产生还原型的谷胱苷肽(GSH),以保护机体解毒功能的执行。 e 心肌黄酶(DT diaphorase):葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。非酶性抗氧化系统 在生物体系中广泛分布着许多小分子,它们能通过非酶促反应而清除氧自由基。例如,维生素C、维生素E、GSH、尿酸、牛磺酸和次牛磺酸等。 谷胱苷肽(GSH)参与
23、GSHPx的作用,使过氧化物还原为H2O和氧化型谷胱苷肽(GSSG)。有些有毒化学物可耗竭肝脏GSH而继发脂质过氧化,如丙烯腈、苯乙烯等。 维生素E 它必须与膜结合才能发挥抗氧化作用。首先与氧自由基反应,生成生育酚自由基,再由抗坏血酸GSH氧化还原偶联反应而还原。它属于“链断裂”抗氧化剂,主要通过提供不稳定的氧给过氧自由基和烷基自由基,从而防止脂质过氧化。 5、蛋白质毒素的解毒细胞外和细胞内的蛋白酶参与有毒多肽的失活。胞内或胞外的蛋白酶可能在毒性多肽的解毒中起作用。在蛇毒中发现的几种毒素(如,-环蛇毒素,永良部海蛇毒素,磷酯酶)中含有分子内二硫键,这些二硫键是其保持活性必不可少的。硫氧化还原蛋
24、白可使上述几种蛋白失活。硫氧化还原蛋白是一种可还原必需二硫键的内源性二巯基蛋白。6、解毒过程失效(1)解毒能力耗竭毒物接触剂量超过机体,引起解毒酶耗竭、共底物消耗、胞内抗氧化剂耗竭,导致终毒物蓄积(2)解毒酶失活偶尔可见某种具有反应活性的毒物使解毒酶失活(3)某些结合反应可被逆转(4)有时解毒过程产生潜在有害副产物第二节 终毒物与靶分子的反应一、靶分子的属性(attributes of target olecules)理论上所有内源性化合物都是毒物潜在的靶标。从典型意义上讲,毒性是由终毒物与靶分子的反应所介导的一系列继发生化过程,导致在不同生物学组织结构水平(如靶分子本身、细胞器、细胞、组织和
25、器官,甚至整个机体)上的功能失常损伤。终毒物与靶分子的交互作用触发毒性效应需考虑以下几个方面:靶分子的属性;终毒物与靶分子之间反应的类型;毒物对靶分子的效应。最后还必须考虑到,一些并非直接由终毒物与靶分子反应所启动,而是由于生物学微环境(关键的内源分子、细胞器、细胞和器官在这样的微环境中运行)改变所引起的毒性。主要有:机体大分子:如核酸特别是DNA和蛋白质;膜脂质;其他成分。并不是所有的毒物与靶标的反应都是有害的。确定毒作用靶分子的标准:1. 终毒物与靶标反应,并对其功能产生不良影响 2. 终毒物在靶部位达到有效浓度 3. 终毒物在某种机制上,以所观察的毒性相关的方式改变靶标二、反应类型(ty
26、pes of reactions)(一)非共价结合非共价结合(nonconvalent binding)可能是通过非极性交互作用或氢键与离子键的形成,具有代表性的是毒物与膜受体、细胞内受体、离子通道以及某些酶等靶分子的交互作用。例如,番木鳖碱(strychnine)结合于脊髓运动神经元上甘氨酸受体,TCDD结合于芳 受体,哈蚌酶素(Saxitoxin)结合钠通道,佛波脂结合于蛋白激酶C以及杀鼠灵(warfarin)结合于维生素K2,3-环氧化物还原酶。这种作用力也促使吖啶黄(acridine yellow)和阿霉素(doxorubicin)插入双螺旋DNA。由于这些化学原子的空间排列使它们与内
27、源性分子的互补部位结合,或多或少有点像钥匙与锁的关系,因而这些化学物表现出毒性效应。非共价结合通常是可逆的,因为这种结合的键能相对较低。(二)共价结合共价结合(convalent binding)实际上是不可逆的,由于这种集合持久地改变内源分子,因此具有重要的毒理学意义。共价加合物的形成常见于亲电物,如非离子和阳离子亲电物以及自由基阳离子。这些毒物与生物大分子如蛋白质和核酸中的亲核酸中的亲核原子反映,亲电原子对亲核原子表现出某些选择性,取决于它们的电荷/半径比。一般而言,软亲电物较易与软亲核物(两者均具有较低的电荷/半径比)反应,而硬亲电子较易与硬亲核物(两者均具有较高的电荷/半径比)反应。表
28、4-4列出了一些实例。如银和汞这样的金属离子被归类为软亲电物,它们优先与软亲核物反应;而锂、钙和钡这样的硬亲电物优先与硬亲核物反应;在这两个极端之间的金属如烙、锌和铅显示出与亲核物的普遍反应性。亲电物的反应性决定了哪种内源性亲核物能与之反应并成为起靶分子。中性自由基如OH、NO2和Cl3C也能共价结合于生物分子。Cl3C加入到脂质的双键碳或脂质自由基产生含有氯甲基脂肪酸的脂质。羟基自由基加入到DNA碱基导致许多产物的形成,包括8-嘌呤、5-羟甲基嘧啶以及胸腺嘧啶和胞嘧啶的乙二醇。原则上亲核物倾向于亲电内源化合物反映,但这样的反应不常发生,因为在生物分子中亲电物十分罕见。其实例包括胺类和肼类与一
29、种脱!酶的共底物醛吡哆醛(pyridoxal)的共价反应;一氧化碳、氰化物、硫化氢和叠氮化物与各种血红素蛋白中的铁形成配位共价键。其他亲核物以电子转移反应的方式与血红蛋白反映。(三)去氢反应自由基可迅速从内源化合物去除氢原子,将这些化合物转变为自由基。从巯基化合物(R-SH)去除氢形成硫基自由基(R-S),这种自由基是其他巯基氧化产物如次磺酸(R-SOH)和二硫化物(R-S-S-R)的前身。自由基能从游离氨基酸或蛋白质氨基酸残基的CH2基除去氢,转变为!基化合物与胺类反映,形成与DNA或其他蛋白质的交联。从DNA分子中的脱氧核糖去除氢产生C-4-自由基。这是DNA断裂的最初步骤。从脂肪酸去除氢
30、产生脂质自由基并启动脂质过氧化。蛋白质中酪胺酸残基的硝基化可能涉及去氢反应,随后发生形成的酪氨酰(tyrosyl)自由基与NO2之间的共价结合。(四)电子转移化学物能将血红蛋白中的Fe2+氧化为Fe3+形成高铁血红蛋白症。亚硝酸盐能氧化血红蛋白,而N-羟基芳胺(如氨苯砜羟胺)、酚类化合物(如5-羟伯氨喹)和肼类(如苯肼)与氧合血红蛋白共氧化,形成高铁血红蛋白与过氧化氢。(五)酶促反应少数一些酶素通过酶促反应(enzymatic reaction)作用于特定靶蛋白上。例如,蓖麻蛋白(ricin)诱发核糖体的水解断裂,阻断蛋白质的合成。几种细菌毒素催化ADO-核糖从AND+转移到特定蛋白质。例如白
31、喉素阻断蛋白质合成过程中延伸因子(elongation factor)的功能,霍乱毒素通过这样一种机制活化一种G蛋白,毒蛇喊有破坏生物分子的水解酶。总之,大多数终毒物借助于它们化学反应性作用在内源分子上,具有一种类型以上反应性的那些毒物可以通过不同机制与不同的靶分子反应。例如,醌类可以作为电子受体启动巯基氧化或导致脂质过氧化的自由基反应但它们也可以作为软亲电物共价结合于蛋白巯基。铅离子当与血红素合成过程中的主要靶酶-ALAD的关键巯基形成配位共价键时,是作为软亲电物;然而,当它结合于蛋白激酶C或阻碍断钙通道、在这些靶部位替代天然配体Ca2+时,它的表现又像一种硬亲电物或一种离子。三、毒物对靶分
32、子的影响终毒物与内源性分子反映可引起功能与结构失常,对蛋白质而盐,这种反应可使蛋白质变成免疫系统的外源蛋白。(一)靶分子的功能失调某些毒物活化靶蛋白分子,模拟内源性配体,例如:吗啡激活鸦片受体;氯苯丁脂(clofibrate)为一种过氧化物酶体增殖物激活性受提的激动剂;佛波酯和铅离子刺激蛋白激酶C。但在更多情况下,化学物通常抑制靶分子的功能。有些外源化学物如阿托品、箭毒(curare)和番木鳖碱(strychine)通过附着于配体结合部位或通过干扰离子通道的功能而阻断神经递质受体。例如:河豚毒素(tetrotodoxin)蛤蚌毒素(saxitoxin)抑制神经元膜上电压激活的钠通道开放;而DD
33、T和除虫菊酯(pyrethroid)杀虫剂抑制它们的关闭;某些毒素阻断离子运转蛋白;另外一些毒物抑制线粒体电子转移复合物;许多毒物抑制酶活性;结合于微管蛋白如长春花碱、秋水仙素、紫杉醇、三价!或肌动蛋白入细胞松弛素、次毒!环肽的化学物损害这些细胞骨架蛋白的组装(聚合)的拆装(解聚)过程。当蛋白质与毒物交互作用而改变其构型结构时,蛋白质的功能即受损害,许多蛋白质具有催化活性和聚合为大分子复合物所必须的关键部分,特别是巯基。对其巯基的共价和(或)氧化修饰敏感的蛋白质包括酶类,如蛋白酪氨酸磷酸酶、甘油醛3-磷酸脱氢酶和丙酮酸脱氢酶,Ca2+泵和转录因子AP-1等。这些蛋白质和许多其他的蛋白质的活性受
34、巯基反应化学物所损害,触发异常的信号转导和(或)损害细胞能量和代谢稳态,蛋白酪氨酸硝化也可改变蛋白质功能或干扰酪氨酸激酶和磷酸酶参与的信号途径。毒物可干扰DNA的模板功能。化学物与DNA共价结合引起复制期间核苷酸错配。例如,黄曲霉毒素8,9-氧化物共价结合合于鸟嘌呤的N-7位使得带有加合物的鸟嘌呤与腺嘌呤配对而不是与胞嘧啶配对,导致不正确密码的形成及不正确的氨基酸插入蛋白质。在黄曲霉素诱发的ras原癌基因及p53肿瘤抑制基因突变时会出现这种情况。8-羟基鸟嘌呤和8-羟基腺嘌呤是由OH引起的致突变碱基,能引起本身的错配以及与邻近的嘧啶错配。化学物如阿霉素(doxorubcin)插入在双螺旋DNA
35、中的重叠碱基间,迫使邻近的碱基对分开,通过移动读码框架引起DNA的模板功能的叫大的错误。(二)靶分子的结构破坏除了加合物形成以外,毒物还可通过交联和断裂而使内源分子的初级结构改变。双功能的亲电物如2,5-己二酮、二硫化碳、丙烯醛、4-羟壬醛(4-hydroxynonedal)和氮芥烷化剂能交联细胞骨架蛋白、DNA,或使DNA与蛋白质交联。羟基自由基通过使上述大分子转变为活性亲电物(如蛋白!基)或自由基也引起交联。羟基自由基通过使上述大分子转变为活性亲电物(如蛋白!基)或自由基也引起交联,前者可于另一个大分子的亲核部位反应,而后者则可彼此发生反映。交联使被连接的分子发生结构与功能的抑制。某些靶分
36、子对化学物攻击后的自发性降解敏感,自由基如Cl3COO和OH可通过从脂肪酸去除氢而启动脂质的过氧化降解,所形成的脂质自由基(L)紧接着通过氧固化作用转变为脂质过氧自由基(LOO);并通过去氢反映形成脂质氢过氧化物(LOOH),通过Fe2+催化的Fenton反映形成脂质烷氧自由基(LO),随后的断裂引起!(如乙烷)以及活性醛(如4-羟壬醛和丙二醛)的形成(图4-6)。因此,脂质过氧化不仅破坏细胞膜脂质,而且还容易与膜蛋白质反应,或与更远的分子如DNA反应。除毒素和辐射引起的水解降解之外,毒物引起的蛋白质降解尚未完全证实。然而,却存在着酶辅基破坏的实例。例如,细胞色素P-450将稀丙基异丙基乙酰胺
37、转变为具有反映活性的代谢物,它使酶的血红素部位发生烷基化,导致变化了的血红素丢失及卟啉症的发生。ONOO-在乌头酸酶的4Fe-4S2+结构簇攻击乌头酸,这一结构簇上的一个Fe原子是十分易变的(因为它与一个无机硫复合,而不是像其他结构簇一样复合于酶结合的半胱氨酸)。由于ONOO-的氧化作用,易变的Fe丢失。从而使酶失活,!及乌头酸酶参与催化功能的柠檬酸循环。毒物可引起几种形式的DNA断裂。例如,DNA碱基受OH攻击可形成咪唑环开放的嘌呤或环收缩的嘧啶,这将阻断DNA复制。某些靶分子对化学物攻击后的自发性降解敏感,自由基如Cl3COO和OH可通过从脂肪酸去除氢而启动脂质的过氧化降解,所形成的脂质量
38、自由基(L)紧接着通过氧固化作用转变为脂质过氧自由基(LOO);并通过去氢反应形成脂质氢过氧化物(LOOH),通过Fe2+催化的Fenton反应形成脂质烷氧自由基(LO),随后的短列引起!(如乙烷)以及活性醛(如4-羟壬醛和丙二醛)的形成(图4-6)。因此,脂质过氧化不仅破坏细胞膜脂质,而且还容易与膜蛋白质反应,或与更远的分子如DNA反应。除毒素和辐射引起的水解降解之外,毒物引起的蛋白质降解尚未完成证实。然而,却存在着酶辅基破坏的实例。例如,细胞色素P-450将稀丙基乙酰胺转变为具有反活性的代谢物,它使酶辅基破坏的实例。例如,细胞色素P-450将烯丙基异丙基乙酰胺转变为具有反应活性的代谢物,它
39、使酶的血红素部位发生烷基化,导致变化了的血红素丢失及卟啉症的发生。ONOO-在乌头酸酶的4Fe-4S 2+结构簇攻击乌头酸,这一结构簇上的一个Fe原子是十分易变的(因为它与一个无机硫得合,而不是像其他结构簇一样得合于酶结合的半胱氨酸)。由于ONOO-的氧化作用,易变的Fe丢失。从而使酶失活,罹及乌头酸酶参与催化功能的柠檬酸循环。毒物可引起几种形式的DNA断裂。例如,DNA碱基受OH攻击可形成咪唑环开放的嘌呤或环收缩的嘧啶,这将阻断DNA复制。在鸟嘌呤N-7位置上大块加合物的形成使N-糖苷链不稳定,诱发脱嘌噙作用,脱嘌呤作用导致具有致突变作用的无嘌呤部位的形成。很具代表性的是,羟基自由基通过从D
40、NA的核糖提到H、产生C-4自由基、随后发生O2-加成、Griegee重排和磷酸二酯链的断裂而引起单链断裂。多种羟自由基攻击长度较短的DNA(这种情况发生在电离辐射后)引起双链的断裂,这对于受影响细胞常表现为致死效应。(三)新抗原形成虽然外源化学物或其代谢物的共价结合对于免疫系统功能的影响通常是不重要的,但在某些个体,这些发生变化了的蛋白质常激发免疫应答。某些化学物(如硝基氯苯、青霉素、镍)可能具有足够高的反应性而自发地结合于蛋白质。另外一些化学物可通过自氧化为醌类(如漆酚为毒长春藤中的变应原)或通过酶促生物转化而获得反应性。例如,细胞色素P-450将氟烷生物转化为三氟乙酰氯(trifluoa
41、cetyl chloride),转化为半搞原与肝各种微粒体和细胞表面蛋白质结合,诱导抗体产生。免疫反应被认为是第三病人中所见到的肝炎样综合征的原因。药物引起的狼疮和粒性白细胞缺乏是由药物-蛋白质加合物触发的免疫反应所介导的。导致这类反应的化学物通常都是亲核物,如芳香胺氨基比林(Aminopyrin)、氧氮平(clozapine)和异烟肼(isoniazid) 和巯基化合物如丙基硫氧嘧啶(propylthiouraeil)、甲巯咪唑(methimazole)和(S)-1-(3-巯基本点-甲基-1-1氧代丙基)-L-脯氨酸(captopril)。这些物质能被激活的料细胞释放的髓过氧化物酶或该种细胞
42、产生的ROS/RNS(HO,ONOO-,HOCL)所氧化,形成与这些细胞表面蛋白结合的活性代谢物,使它们成为抗原。遗憾的是,某些带有加合物的蛋白质能模拟正常蛋白质,因此也能受抗体攻击。第三节 细胞调节功能障碍多细胞机体的每个细胞都执行着特定的程度,某些程序决定细胞的命运分裂、分化(即表达专一化功能的蛋白)或凋亡。另一些程序控制分化了的细胞的瞬息活动ongoing(momentsry)activity,决定细胞分泌物质的数量、是否收缩或舒张、转运和代谢营养物质的速率等。细胞具有能被外部信号分子激活或灭活的信号网络来调节这些细胞程序。为了执行这些程序,细胞装备有合成、代谢、运动、转运和产生能量的体
43、系以及结构元件,组装为大分子复物、细胞膜和细胞器,以维持自身的完整性(内部功能)和支持其他细胞(外部功能)。毒物与靶分子的反应可导致细胞功能损害。一、毒物引起细胞调节功能障碍细胞受信号分子所调节,它激活与传导网络所联系的细胞受体,而信号转导师网络将信号传递给基因的调节区域和(或)功能蛋白。受体激活最终可导致:改变基因的表达,增加或减少特定蛋白的功能;通过磷酸化使特定蛋白发生化学修饰,从而激活动的那些程序主要影响功能蛋白的活性;然而,由于信号网络的分去和交互联系,一个信号常常触发两类应答。(一)基因表达调节障碍基因表达调节障碍可发生于直接负责转录的元件上、细胞内信号转导途径的成员以及细胞外信号分
44、子的合成、贮存或释放过程中。1、基因转录调节障碍遗传住处从DNA转录纪念品mRNA主要受转录因子(TFs)与基因的调节或启动区域间的相互作用所控制。通过与这一区域的核苷酸序列相结合,激活的转录因子促进前起始复合物(preinitiation complex)的形成,促使相毗邻的基因的转录。外源化学物可与基因的启动子区域、转录因子或前起始复合物的其他元件交互作用,然而转录因子激活作用的改变似乎是最常见的方式。从功能角度看,已知有两种类型的TF:配体激活的TF和信号激活的TF。许多天然化合物,如激素(如类醇、甲状腺激素)和维生素(视黄醇和维生素D)通过结合与激活而影响基因的表达(表-45)。外源化
45、学物可模拟天然配体。例如:祛酸类(fibric acid)降血脂药和邻苯二甲酸酯替代多不饱和脂肪酸作为氧化物酶体增殖物激活性受体(PPAR)的配体。而Cd夫代Zn金属应答元件结合的转录因子(MTF-1)的内源性配体。天然或外源化学物配体在以极端剂量摄入或在个体发生的关键期摄入时,可通过配体激活的TFs而引起毒性。糖皮质醇可引起淋巴细胞的凋亡,虽然在治疗淋巴恶性肿瘤时希望出现这种现象,但在许多其他情况下并不希望得到这种反应。TCDSD一种芳烃受体(AHR)的配体通过引起胸腺细胞的凋亡而导致胸腺萎缩。雌激素在表达雌激素受体的细胞(如睢雌性生殖器官、乳腺和肝脏中所见到的细胞)可促有些分裂。在雌激素长
46、期暴露时,由雌激素诱导的增殖似乎是这些器官肿瘤形成的原因。据推断,环境外源雌激素如DDT、多氯联苯、双酚A和莠去津(atrazine)促使乳腺癌发生率增加。一种真菌雌激素饲料污染物玉米赤霉烯酮(zearalenone)引起猪阴道下垂,这是雌激素受体介导的增殖性损害的一个实例。过氧化物酶体增生物的促有丝分裂作用及肝肿瘤促进作用也是受体介导的,因为在PPAR缺失的小鼠未能观察到这种现象。人类与啮齿动物不的同,PPAR以低水平表达,同时常以无功能的形式存在,因而不会表现出肝细胞及过氧化物酶体的增生。作用于配体激活的TFs的化学物,如糖皮质醇、TCDD和维生素诱发胎儿畸形,这可看作不合适的基因表达。候
47、选的靶基因是早期决定身体轮廓的同源框基因(homeoboxgene)。2、信号转导调节障碍细胞外信号分子,如生长因子、细胞因子、激素和神经递质能利用细胞表面受体和细胞内信号转导网络激活TFs。这些TFs控制着影响细胞周期进展、决定细胞结局的基因的转录活性。在这些TFs中,有c-Fos和c-Jun蛋白,它们以二聚体的形式(称之为AP-1)结合到十四烷酰佛波醇乙酸酯tetradeconoy phorbol acetate(TPA)应答元件(TRE),如细胞周期蛋白D基因启动子中的TRE。另一个是c-Myc蛋白,当它与Max蛋白二聚化并结合于其同源的核苷酸序列时,能激活细胞周期蛋白D和E基因,接着细胞周期蛋白通过活化细胞周期蛋白依赖的蛋白激酶而加速细胞分裂周期。因此,促有丝分裂的信号分子诱导细胞增生;相反,TGF-诱导细胞周期蛋白依赖的蛋白激酶抑制蛋白(如P27)的表达,这种蛋白价导着抗有丝分裂作用。从细胞表面受体到TFs,信号通过连续的蛋白质-蛋白质交互作用和蛋白质磷酸化而分段传递。暴露于所有细胞表面的生长因子受体实际上是起磷酸化,接着,这些受体能结合于连接物蛋白(adapter protein),并通过这些连接物蛋白激酶的磷酸化,接着,这些受体能结合于连接物蛋白激酶(MAPK)级联反应,涉及一系列蛋白激酶的磷酸化,最终到达TFs。因此,从受体经激酶再到转录因子的许多信号元件的
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