GCMS测定三种不同蒿属植物挥发性物质.doc
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1、学号:071040219本科生毕业论文SPME-GC/MS测定三种不同蒿属植物挥发性物质 院 (系): 生物科学与技术学院 姓 名: 付伟 班 级: 0710402班 专 业: 生物工程 指导教师: 周毅峰 副教授 中国恩施二一四年五月2ID:071040219BACHELORS THESIS OF HUBEI UNIVERSITY FOR NATIONALTIES Determination of three kinds of different Artemisia volatile substance SPME-GC/MSName: Fu WeiGrade: 071040219Profes
2、sion: Biological engineeringTutor: Zhou Yi-feng Enshi ChinaMay, 2014I2学术声明1、 坚持以“求实、创新”的科学精神从事研究工作。2、 本论文是我个人在导师指导下进行的研究取得的学术成果。3、 本论文中除引文外,所有试验、数据和有关材料均是真实的。4、 本论文中除注明作者和来源的引文外,不包含其他人、其他机构已经发 表或撰写过的研究成果。5、 其他同志对本研究所做的贡献已在论文中做了声明并表示了谢意。6、 本声明的法律后果由本人承担。 作者签名:年 月 日导 师 审 核 声 明 本人郑重声明:该生所呈交的学位论文,是在本人的指
3、导下独立进行研究工作所取得的成果。其中文字、图、表及其它相关内容均经本人审核,同意作为该生的学位论文提交。 导师签名: 年 月 日I2SPME-GC/MS测定三种不同蒿属植物挥发性物质付伟(湖北民族学院生物科学与技术学院,湖北恩施,445000)摘要:为了解艾蒿、臭蒿和黄花蒿三种蒿属植物挥发性物质的组成,探寻其与叶面腺毛体的关系,通过顶空固相微萃取和气相色谱-质谱联用法对其化学成分进行鉴定分析比较,并利用体式荧光显微镜观察三种蒿属植物叶面腺毛体数量。结果表明:1)黄花蒿挥发性物质种类和含量最多,艾蒿挥发性物质种类和含量其次,臭蒿挥发性物质种类和含量最少,三者主要成分均为单萜类化合物与倍半萜类化
4、合物;2)三种植物均含有顺-3-己烯酸乙酯、蒈烯、桉树脑、大根香叶烯、-石竹烯;3)艾蒿挥发性物质还含有罗勒烯、2,6-二甲基-1,5,7-辛三烯-3-羟基、樟脑、-榄香烯、丁香烯、桉叶稀、杜松烯、E-环氧法尼稀,臭蒿挥发性物质还含有羟基脲、-蒎稀、-榄香烯、丁香烯,黄花蒿挥发性物质还含有3-己烯-1-醇、2-辛烯-4-醇、5,5-二甲基-1-乙基-1,3-环戊二烯、邻异丙基甲苯、莰烯、D-柠檬稀、-蒎稀、E-法尼烯。4)三种植物中黄花蒿挥发性物质种类和含量最多,其腺毛体数量也最多,艾蒿挥发性物质种类和含量其次,其腺毛体数量也处于其次,臭蒿挥发性物质种类和含量最少,其腺毛体数量也最少。关键词:
5、艾蒿;臭蒿;黄花蒿;腺毛体;挥发性物质Determination of three kinds of different Artemisia volatile substance SPME-GC/MSFu Wei(College ofbiologicalscience and technology,Hubei Institute for Nationalities,Enshi,445000)Absract: In order to know the volatile substances of Artemisia argyiH. Lv. et Vaniot, Artemisia hedinii
6、 and Artemisia annuaL.and try to explore its relationship with the number of glandular trichomes on leaf. Using headspace solid-phase micro extraction and gas chromatography-mass spectrometry to analysis and identify the chemical components,and using type fluorescent microscope to observe the number
7、 of glandular trichome. The results show that: 1)the species of Artemisia annuaL volatile substances is most, the species of Artemisia argyiH. Lv. et Vaniot volatile substances is second, the species of Artemisia hedinii volatile substances is least.The main constituents are monoterpenes and sesquit
8、erpene;2)All contain cis-Ethyl 3-hexenoate, karen, Cineole, Germacrene, -Caryophyllene;3)Artemisia argyi volatile substances also contains Ocimene ,2,6-Dimethyl-1,5,7-octatriene-3-ol, DL-Camphor, -Elemene, Caryophyllene, -selinene, Cadinene, E- Farnesene,Artemisia hedinii volatile substances also co
9、ntain Hydroxycarbamide,-pinene,-Elemene, Caryophyllene,Artemisia annuaL. volatile substances also contains 3-Hexen-1-ol,2-Octen-4-ol,1-isopropyl-2-methylbenzene,-pinene,D-limonene,5,5-dimethyl-1-ethyl-1,3-cyclopentadiene,Camphene, E-Farnesene.4) The species and contents of volatile substances and gl
10、andular trichomes of Artemisia annua L.are most; The species and contents of volatile substances and glandular trichomes of Artemisia argyi are second; The species and contents of volatile substances and glandular trichomes of Artemisia hedinii.are least.Keywords: Artemisia argyiH. Lv. et Vaniot;Art
11、emisia hedinii;Artemisia annuaL.;glandular trichomes;volatile substancesIV目录1 文献综述11.1 艾蒿的生物学特性11.2臭蒿的生物学特性11.3黄花蒿的生物学特性21.4蒿属植物挥发性物质研究21.5研究意义32 材料与方法52.1 材料与设备52.2.1材料52.2.2设备52.2 GC-MS条件52.3方法52.3.1体式荧光测定三种蒿属植物的腺毛体数52.3.2三种蒿属植物挥发性物质测定53结果与分析73.1三种蒿属植物叶片形态观测73.2三种蒿属植物挥发性成分测定84讨论10参考文献10致谢13附件141 文
12、献综述1.1 艾蒿的生物学特性艾蒿(Artemisia argyiH. Lv. et Vaniot)俗名医草、野艾、蕲艾,多年生草本植物或者略成半灌木状,有浓烈香气。基部木质化而上部为草质,并有少量短分枝,茎枝上覆盖有灰色蛛丝状柔毛。一回羽状深裂,裂片卵形、卵状披针形或披针形,叶基部宽楔形渐狭成短柄,叶脉明显,在背面凸起;上部叶羽状半裂、浅裂或不分裂,而为椭圆形、长椭圆状披针形、披针形。瘦果长卵形或长圆形,花果期7-10月。艾蒿的适应性极强,向阳排水顺畅的地方都可以生长,以湿润肥沃的土壤生长较好,生长在路旁荒野、草地1。主要分布于安徽、广东、湖北、湖南等省,常见于低海拔到中海拔区域的荒地、路旁
13、河边及山坡等地,也见于森林草原及草原地区。艾蒿的主要药用部位是叶,经大量研究表明其含有挥发油、桉叶烷、黄酮、三萜类及微量化学元素等2。现代药理发现,艾蒿叶含大量挥发油并且为多种化合物的混合物,有脂肪族化合物、芳香族化合物,但更多为萜类衍生物,还含有大量的多酚类物质黄酮,有抗氧化、抑菌、清除自由基等的作用。对于抗菌作用、利胆作用、对呼吸系统影响等药理方面对艾蒿做了大量研究 。目前各报道中其全草和叶的挥发油主要成分及含量存在较大差异,这可能与艾蒿的种类、生长环境、气候条件、采集时间或者其它因素等有关3。 1.2臭蒿的生物学特性臭蒿( Artemisia hedinii )俗称海定蒿、牛尾蒿、克朗,
14、一年生草本植物,有浓烈的臭味。茎单生较稀少,高约15100cm。叶绿色,背面有腺毛状短柔毛;基生叶多数,羽状分裂,羽状深裂或者全裂;茎下部或者中部为长椭圆形,二回羽状分裂,第一回全裂,每裂叶多有多枚小裂叶,基部稍平展,椭圆形卵状瘦果,一般花期为710月。臭蒿产于内蒙古西南部、新疆南部、四川西部、云南西部等,其中青海和西藏最常见,多分布于海拔20005000m地区,多生于湖边、草地、田边、河滩等,局部地区可形成植物群落优势种群或者主要的伴生种。臭蒿煎剂、去挥发油水浸剂、挥发油等有促进胆汁分泌和利胆作用;对肝脏有影响、可用于治疗肝细胞肿胀、脂肪变、坏死等4;对正常体温有明显的降低,具有解热作用;有
15、一定的抗动脉粥样硬化作用,可以降血脂、扩张冠脉及促纤溶;水浸液、挥发油有降血压作用;有抗菌和消炎作用;其对平滑肌有相应的作用;具有促进白细胞分裂、免疫调节和诱生干扰素等作用,可以提高机体免疫功能;还有抗钩端螺旋体、平喘等;幼嫩枝、叶可以作为菜蔬或者酿制茵陈酒,或者可作为家畜的饲料。在民间入药,有清热、消炎、解毒的功效,主要治疗湿热黄疸、胆囊炎、痈肿毒疮等,还可以作为杀虫药。1.3黄花蒿的生物学特性黄花蒿(Artemisia annuaL.)俗称黄蒿、青蒿、草蒿等,一年生草本,有浓烈的挥发性香气。根单生、垂直、纺锤形;茎单生,有纵棱,幼时为绿色后变为褐色或着红褐色,多分枝;茎、枝、叶、两面及总苞
16、叶背面无毛或者初时背面微有稀疏短微毛,后脱落无毛;茎下叶都为圆形或者三角卵形,绿色,两面有细小脱落性的白色腺点及细小凹点;中部叶二回有羽状深裂,无柄。果实瘦小,椭圆形或者卵形,交扁,花果期811月5。黄花蒿具有极强的环境适应性,常常生长在路边、荒地、山坡等处,局部地区可以形成优势种群或者主要伴生种。广泛分布于欧洲、亚洲的温带、寒温带以及热带地区,欧洲中部、东部、南部及亚洲北部、中部、东部最多,向南延伸到地中海及非洲北部,亚洲南部、西南部各国;从亚洲北部迁入北美洲、并广泛分布于加拿大以及美国6。 黄花蒿富含挥发油、青蒿素、樟脑等,植株地面部分含有东茛菪内脂类化合物。青蒿素为倍半萜内脂化合物,可治
17、疗各种类型疟疾,具有速效和低毒的特点,对恶性疟及脑疟尤佳。现已在青蒿素的基础上开发出了多种衍生物,均具有抗疟、抗孕、抗心律失常等作用。黄花蒿的水煎液对白喉杆菌、炭疽杆菌等有较强的抑菌作用,也有抗流感病毒的作用。1.4蒿属植物挥发性物质研究蒿属植物生长环境不同和提取方法不同,挥发性物质及相对含量会出现很大差异,艾蒿、臭蒿、黄花蒿三种蒿属植物中研究较多的为黄花蒿,其挥发性物质主要为萜类及其含氧衍生物,其中单萜及其衍生物和倍半萜及其衍生物最多,还含有小分子脂肪族化合物和小分子芳香族化合物。挥发性物质大多是无色或着淡黄色,室温就可以挥发,极大多数比水轻,仅少数比水重。挥发性物质可以随水蒸气蒸馏出来,却
18、很难溶于水,能溶于乙醇、氯仿、脂肪油等,其中某些成分对人类社会发展有着巨大的贡献。黄花蒿含有大量挥发性物质,化学成分复杂,可分为蒿酮、樟脑、茨烯、丁香烯等成分,因其以烯类为主,故具有芳香气味7,如甜没药萜醇、甜没药萜醇氧化物A、甜没药萜醇氧化物B等挥发性物质含量较高,具有灭菌、消炎、愈合溃疡等功能,可用于口腔卫生产品,具有很大的开发和应用价值,也可以作为空气清香剂的主要成分,在医药工业、香料、香精和化妆品中广泛应用。黄花蒿挥发性物质含有以亚油酸为主的多种脂肪酸,亚油酸是人体必需脂肪酸,与平滑肌收缩、类固醇激素、前列腺素以及其他生命机能有关,还具有颇高保健功能8。黄花蒿挥发性物质具有兰花香味,蒿
19、粉可以作为磨擦剂或着护理剂用以制备牙膏应对口臭、口腔异味,口气倍感清新、持久9。挥发性物质清爽气、芳香味、香气浓郁,可用于化妆品、香皂、香水、空气清新剂等10。含有挥发性物质的中草药或着提取出挥发性物质大多具有止痛、抑菌、矫味等作用,是防暑良药11。1.5研究意义 目前国内外高校和科研机构研究院所对蒿属植物的研究主要在于挥发油、化学成分、药理作用、栽培技术等方面,其中对蒿属植物中的黄花蒿的相关研究最多,却很少将多种蒿属植物中挥发性物质与叶面腺毛体数量联系在一起。 本文采用顶空固相微萃取法在室温条件下利用萃取头对艾蒿、黄花蒿和臭蒿三种蒿属植物挥发性物质进行萃取,然后进行气相色谱质谱联用分析蒿属植
20、物挥发性物质分析,比较三种蒿属植物挥发性物质的异同点。实验中对三种蒿属植物叶面腺毛体数量观察,将其与三种蒿属植物叶片挥发性物质联系在一起。蒿属植物为宝贵的中药材,气相色谱质谱联用法(GC-MS)可有效地分析蒿属植物挥发性成分,从而探讨蒿属植物的挥发性物质成分及其含量,为艾蒿、臭蒿、黄花蒿的鉴别提供可靠依据,也为其在医药、工业、科研等方面的开发利用提供研究依据和理论指导,对开发利用我国丰富的蒿属植物资源具有重要的现实意义和理论价值,使蒿属植物生物资源的开发利用有一定经济价值和社会效益。2 材料与方法2.1 材料与设备2.2.1材料 新鲜的采自栽培基地的黄花蒿,校内实习基地采摘的新鲜艾蒿和臭蒿。2
21、.2.2设备 数显鼓风干燥箱(GZX-9420MBE,上海博迅实业有限公司医疗设备厂);分析天平(ME204E/02,梅特勒-托利多有限公司);尼康 Nikon AZ100型体式荧光DIC成像系统(上海衡浩仪器有限公司);Agilent6890N/5975C型气相色谱-质谱联用仪(美国安捷伦公司);DBV/CAR/PDMS 50/30m萃取头(美国Supelco公司)。2.2 GC-MS条件色谱条件:HP-5MS石英毛细管柱(0.25m0.25mm30m),载气为氦气,流速为1mLmin-1,进样口温度为250,不分流进样。程序升温条件(40保持2min,再以5min-1升温至130,保持1m
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