大脑中动脉缺血再灌注大鼠脑组织PAR1表达与炎症反应的关系.doc
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1、DOC格式论文,方便您的复制修改删减大脑中动脉缺血再灌注大鼠脑组织PAR1表达与炎症反应的关系(作者:_单位: _邮编: _) 作者:周青珍, 王华梅, 吴家幂【摘要】 目的:研究脑缺血再灌注(CIR)后脑组织中蛋白酶激活受体1(PAR1)的表达及其与炎症反应的关系。 方法:40只雄性SD大鼠线栓法建立大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,再灌注后于3 、6 、12 h及1 、2 、3 、7 d取脑,免疫组化法和脑组织匀浆法检测PAR1、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量。 结果:缺血再灌注后脑组织PAR1表达增加(P0.01),MDA含量增多(P0.01),SOD活性降低(P0.01
2、);PAR1表达与MDA含量正相关(r1=0.844,P0.05),与SOD含量负相关(r2=-0.901,P0.01)。 结论:CIR后PAR1表达增多可加重脑组织炎性反应。 【关键词】 大脑中动脉;栓塞;蛋白酶激活受体1 Abstract: Objective To investigate the correlation between proteaseactivated receptor1(PAR1) expression and inflammatory reaction of brain tissue after cerebral ischemia reperfusion(CIR).
3、Methods Fourty SD rats were randomly divided into eight groups:sham group,CIR3 h,CIR6 h,CIR12 h,CIR1 d,CIR2 d, CIR3 d,and CIR7 d group(n=5).To establish middle cerebral artery occlusion(MCAO) model with Longa methods.At the indicated timepoint,the rat was sacrificed and its brain was removed.PAR1 wa
4、s detected with immunohistochemistry,SOD and MDA contents in brain homogenate were measured.Results Compared with sham group,PAR1 expression was increased obviously(P0.01).Contents of MDA were increased with the time of CIR prolonged(P0.01),and there was positive correlation between PAR1 expression
5、and MDA content(r1=0.844,P0.05),but SOD activity was decreased(P0.01),and negatively correlated with PAR1 expression(r2=-0.901,P0.01). Conclusion Increased PAR1 expression may aggravate inflammatory reaction of brain tissue in rats after CIR with MCAO. Key words: Middle cerebral artery;Occlusion;Pro
6、teaseactivated receptor1 近年来研究发现中性粒细胞的聚集、黏附和浸润,以及炎性因子的大量产生是缺血再灌注损伤的重要因素2。脑缺血再灌注(cerebral ischemia reperfusion,CIR)后中性粒细胞在凝血酶作用下趋化于缺血组织周围,通过激活蛋白酶激活受体-1(proteaseactivated receptor1,PAR1)导致细胞内Ca2+升高,刺激小胶质细胞的活化和增生3,促进炎症因子表达,活化的白细胞释放自由基,引起脑缺血后脑组织损害。本实验通过建立大脑中动脉栓塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,
7、了解CIR后脑组织中PAR1表达与代表自由基水平的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)之间的相关性, 以探讨PAR1在CIR后脑组织炎症反应中的作用。 1 材料和方法 1.1 实验动物与分组 健康雄性SD大鼠40只,体重270320 g(南京青龙山实验动物养殖中心提供),随机分为8组:假手术组,缺血再灌注3 、6 、12 h及1 、2 、3 、7 d组(n=5)。 1.2 脑缺血再灌注模型的制备 选用日本产钓鱼尼龙线,直径0.2 mm,每段长4 cm,头端烧成杵状备用。参照Zea Longa报道的线栓法1建立大鼠大
8、脑中动脉栓塞MCAO模型。术后2 h,外拉尼龙线,使其球端回至颈外动脉残端,恢复大脑中动脉供血,实现再灌注,于上述不同时间点断头取脑;假手术组除插入尼龙线15 mm外,余步骤同手术组,术后24 h断头取脑。 1.3 免疫组化染色 在相应时间点,大鼠深度麻醉后,打开腹腔,由左心耳灌注生理盐水100 mL,再用4%甲醛内固定后断头取脑。标本置中性福尔马林中固定、包埋。按下述步骤行PAR1免疫组化染色:切片、微波修复抗原、3%过氧化氢抑制、兔血清封闭、加一抗(山羊抗小鼠多克隆抗体,美国Santa Cruz公司)、4 过夜、加生物素二抗(兔抗山羊IgG)、加SABC、DAB显色,苏木素复染。 1.4
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