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1、1、检验程序 检样做成几个适当倍数的稀释液选择2-3个适宜稀释度各以1ml之量分别入灭菌平皿内每皿内加入460C左右适量营养琼脂培养48小时报告菌落数,第一节 菌落总数测定,2、检样处理 (1)以无菌操作将检样25g(或25ml)剪碎,放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨制成1:10的均匀稀释液。 固体检样在加入稀释液后,最好置灭菌均质器中以8000r/min100000r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。 (2)用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml,沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他
2、稀释的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液),振摇试管混合均匀,制成1:100的稀释液。 (3)另取1ml的灭菌吸管,按上项操作顺序,制10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次,即换用1支1ml灭菌吸管。,(4)根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择23个适宜稀释度,分别在制10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度作两个平皿。 (5)稀释液移入平皿后,应及时将凉至460C营养琼脂培养基(可放置在4610C水浴锅内保温)注入平皿15ml20mL,混合均匀.同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液(不含样品)的灭菌平皿内作空白对照。 (6)等琼脂凝
3、固后,翻转平板,置(361)0C恒温箱内培养(482)h取出,计算平板内菌落数目,乘以倍数,即得每g(每mL)样品所含菌落总数。,3、菌落计算方法 (1)菌落计数方法 做平板菌落计数时,可用肉眼观查,必要时用放大镜检查,以防遗漏。在记下各平板的菌落数后,求出同稀释度的各平板平均菌落总数。 (2)菌落计数的报告 平板菌落数的选择 选取菌落数在30300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板,应采用两个平板平均数,其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数,若片状菌落不到平板的一半,而其余的一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后
4、乘2以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时(菌落之间无明显界线),若仅有一条链,可视为一个菌落数;如果有不同来源的几条链,则应将每条链作为一个菌落计。,稀释度的选择 应选择平均菌落数在30300之间的稀释度,乘以稀释倍数报告之。若有两上稀释度,其生长的菌落数均在30300之间,则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2,应报告其平均数;若大于2则报告其中较小的数字。 若所有稀释度平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 若所有稀释度均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数
5、报告之。,若所有稀释度的平均菌落数均不在30300之间,其中一部分大于300或小于30时,则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 菌落数的报告 菌落数在100以内时,按其实有数报告;大于100时,采用二位有效数字,在二位有效数字后面的数值,以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数,也可用10的指数来表示。,注意英文表述,菌落总数aerobic bacterial count 大肠菌群coliform bacteria 沙门氏菌salmonella 致泻性埃希氏菌diarrheogenic escherichia coli 霉菌和酵母molds and yeasts 金黄色葡萄
6、球菌staphyloc 菌落形成单位colony form unit 微生物学检验 microbiological examination,讨论1,真菌菌落算不算菌落总数?(请学生比较新老国标中关于菌落的定义的差异),讨论2,新国标上菌落总数计算公式上n 分别代表什么?,(n1 第一稀释度(低稀释倍数)平板个数(含适宜范围菌落数) n2 第二稀释度(高稀释倍数)平板个数(含适宜范围菌落数),讨论3,成片的菌落如何计数?,讨论4,对原始记录表的评价 设计原始记录表,菌落总数的测定 平板菌落计数法 菌落总数记录报告,记录表,按照以下原则进行编制: 可以满足检验过程的复现; 可以实现培养基和试剂的溯
7、源及复现其制备过程; 一页原始记录基本包括该样品的多个常规检验项目,也就是一份样品的所有微生物检验项目在一张原始记录上体现。 为了符合实验室资质认定评审的要求,可能会有点繁,而且基本上没有办法对原始记录作假,因为记录上体现的内容环环相扣。,菌落总数的测定 出现的实际工作问题,做菌落总数检测时,发现稀释倍数大的比稀释倍数小的平皿上生长的菌落数还多,而且空白对照又没长菌,我找不出啥原因? 我做的菌落总数的测定,是把浓缩的复合芽孢杆菌进行10-8、10-9、10-10稀释,在涂布法吸取0.1ml的3个浓度的时候,培养皿中长出来的菌2个10-9长了一大片的菌连在一起,10-8也有一个这样,其他的几乎不长,究竟怎么会事? 检测菌落总数时,有些菌落难以区别,有没有什么好的试剂,能增加菌落的可见率? 我公司做的菌落总数和技术监督局所测的数目存在巨大差别. 是这样的:我公司跟客户采购一批的鸡粉,多次检测此批产品菌落总数均在5000左右,超过我司的内控标准。但客户检测数目与我司不符,于是我司把产品送到当地的技术监督局检测,所得结论是菌落总数为:205个/克。所以我们老总怀疑我们的工作能力,但问题是在其中一次操作中,我们同时化验两种不同品牌的鸡精,一种不符合要求,一种可以。,
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