AgilentHPLC1100工作站高级操作培训.ppt
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1、HPLC 1100 ChemStation 高级操作培训,授课教师 纪学海,2019年5月13日,Update: 2005-3-21,Slide 2,HPLC 1100 Advance操作培训日程安排,第一天 上午: 1 课程简介及相互介绍 2 化学工作站各个工作界面介绍 3 完整方法的编辑、修改、存储及运行 4 HPLC 1100 仪器配置及参数设置 下午:1 数据分析参数设置 2 色谱图的优化处理 3 积分事件及手动积分的选择和应用 4 高级校正表的编辑和设置 第二天 上午:1 报告格式的选择及设定 2 光谱的提取、光谱库的建立及检索 3 色谱峰纯度检测 4 色谱条件的优化及色谱图的提取
2、下午:1 序列参数的设置以及统计功能的使用 2 批处理功能的设置及应用,Update: 2005-3-21,Slide 3,第三天 上午:1 个性化报告的设定与编辑 2 工作站故障诊断功能的应用 3 结业考试 结业午餐 下午:1 化学工作站的重新安装、配置及启动(选修) 2 发结业证 3 自由练习、讨论,Update: 2005-3-21,Slide 4,第一章 化学工作站各个工作界面介绍,Update: 2005-3-21,Slide 5,化学工作站各个工作界面的切换,切换工作界面,Update: 2005-3-21,Slide 6,化学工作站Views菜单,Update: 2005-3-2
3、1,Slide 7,化学工作站的Change Access Level功能,Update: 2005-3-21,Slide 8,化学工作站Scheduler的使用,Update: 2005-3-21,Slide 9,化学工作站Scheduler的使用,Update: 2005-3-21,Slide 10,选择在线信号,从 View菜单, 选择 Online Signals, 单击 Change,在Edit Signal Plot窗口中选择要监控的信号。,Update: 2005-3-21,Slide 11,在线信号显示,Update: 2005-3-21,Slide 12,查看Logbook,
4、从View菜单选择Logbook,单击Current Logbook显示当前Logbook内容。,Update: 2005-3-21,Slide 13,方法的概念:方法是一个参数集,它包括分析一个样品所需要 的所有参数。 方法文件名:xxx.m。 方法的组成: 方法信息(Method information) 仪器参数及采集参数(Instrument/Acquisition) 数据分析参数(Data Analysis) 运行时间表(Run Time Checklist),第二章 方法编辑、保存,Update: 2005-3-21,Slide 14,使用 Edit Entire Method 编
5、辑一个完整的方法,编辑一个完整的方法,单击图标,也可以开始编辑一个完整的方法。,Update: 2005-3-21,Slide 15,选择所要编辑的内容,Update: 2005-3-21,Slide 16,方法信息 (Method Information),Update: 2005-3-21,Slide 17,包括:流量(Flow),流动相组成(Solvents),停止采集时间(Stop Time),后运行时间(Post Time),梯度编程(Timetable),压力限制设定(Pressure Limits)等,泵的操作参数,Update: 2005-3-21,Slide 18,标准自动进
6、样器参数,Update: 2005-3-21,Slide 19,标准进样过程原理示意图,准备位置,抓取样品瓶 吸取样品,进样和运行位置,Update: 2005-3-21,Slide 20,标准自动进样器的程序进样,Update: 2005-3-21,Slide 21,Wellplate自动进样器参数,Update: 2005-3-21,Slide 22,控温范围:低于室温1080 两个单独的加热区 安装切换阀可以进行柱切换 可以容纳30 cm长色谱柱 安装柱识别可以自动记录进样次数,柱温箱参数设置,Update: 2005-3-21,Slide 23,可以选择存储 5 个信号 信号波长范围
7、191 - 949 nm 可变狭缝: 1, 2, 4, 8, 16 nm 可以时间编程 可以保存数张或所有光谱,DAD检测器参数设置,Update: 2005-3-21,Slide 24,DAD参数优化 Step and Slit: Agilent 1100 DAD 狭缝宽度可以程序变化,变化步径1,2,4,8,16nm。如果样品浓度较高,而需要精细的光谱结构,建议使用1或2nm的狭缝宽度。如果样品浓度较稀,建议使用8或16nm宽度狭缝。采集样品的谱带宽度至少要与狭缝宽度一样。 Peak Width: 增加响应时间(峰宽)可以增加组成色谱信号中每个数据点的采集次数。因为检测器的噪音与采集次数平
8、方根成反比,所以增加响应时间可以降低噪音。但增加响应时间(峰宽)会降低定量分析的重复性。一般对于精确的定量分析,一个色谱峰要求采集20个数据点。设置峰宽的经验:设置峰宽等于实际色谱峰的最窄峰宽。,Update: 2005-3-21,Slide 25,Sample Signal and Reference Signal: 设置样品吸收波长与参比波长遵从下列规则: 样品吸收波长选择在样品的最大吸收波长,而且在此吸收波长下没有流动相吸收的干扰。 选择样品信号的谱带宽度应覆盖样品吸收谱带的半峰宽(假设样品吸收谱带为高斯峰)。 参比吸收谱带应选择在尽量靠近样品吸收谱带,而且在此区域没有或尽量低的吸收强度
9、。 参比峰谱带宽度要大于或等于样品谱带宽度。 注意:增加样品谱带宽度,会降低样品的吸收强度,但会降低噪音。 选择合适的参比吸收波长可以减小梯度洗脱过程中的基线漂移。 Peak Supression(峰抑制): DAD检测器一个非常有趣的功能是进行峰抑制。例如有两个样品没有分开,共同洗脱出来,可以设置某一个样品的等吸收波长为参比波长,则被设为参比峰的样品被抑制,而另一个样品峰被分离。不过,此样品峰的吸收强度要损失1030。,Update: 2005-3-21,Slide 26,VWD检测器参数设置,Update: 2005-3-21,Slide 27,选择在方法中要执行的项目 可以选择保存GLP
10、数据 可以将方法和数据保存在一起,运行时间表(Run Time Checklist),Update: 2005-3-21,Slide 28,从Method菜单选择Save Method / Save Method as或从存贮方法工具图标存贮方法。,存储方法,单击本图标可以保存方法,务必注意不要发生方法覆盖、丢失,Update: 2005-3-21,Slide 29,要分析单个样品,先从RunControl菜单选择 Sample Info., 输入样品信息。 样品信息包括: 操作者姓名(Operator Name),存盘数据文件(Data File),样品参数(Sample Parameter
11、s) 样品评述(comment)。 然后运行方法(Run Method)。,运行方法,Update: 2005-3-21,Slide 30,用户图形友好界面(GUI),Update: 2005-3-21,Slide 31,用户图形友好界面各个模块的控制,Update: 2005-3-21,Slide 32,用户图形界面溶剂瓶的填充量,Update: 2005-3-21,Slide 33,用户图形友好界面各种参数的显示,Update: 2005-3-21,Slide 34,Instrument菜单简介,Update: 2005-3-21,Slide 35,选择Instrument More Pu
12、mp Auxiliary菜单,即可弹出下图窗口。,泵的辅助功能,在该窗口可以设置泵的最大升流速率、泵冲程大小以及设置溶剂的压缩补偿因子。,Update: 2005-3-21,Slide 36,自动进样器的扩展功能,Update: 2005-3-21,Slide 37,色谱柱信息的输入,Update: 2005-3-21,Slide 38,VWD停泵扫描采集光谱,使用VWD停泵扫描的功能,可以采集样品的吸收光谱,主要操作步骤如下: 1.在Online工作站界面的View菜单下打开VWD Scans窗口; 2.按照正常的进样方式采集样品色谱数据,并保证能够在 Online Signal窗口中观测到
13、色谱信号; 3.进样后,色谱图上出现基线时,扫描空白吸收光谱 在Instrument菜单下,选择More VWD中的Blank Scan 4.色谱图上出现色谱峰时,扫描样品吸收光谱 在Instrument菜单下,选择More VWD中的Sample Scan 此时得到的是自动扣除空白吸收后的样品吸收光谱。,Update: 2005-3-21,Slide 39,可变波长检测器VWD的停泵扫描功能,进样之前选择VWD Scans菜单,打开VWD光谱扫描窗口,Update: 2005-3-21,Slide 40,可变波长检测器VWD的停泵扫描功能,Update: 2005-3-21,Slide 41
14、,可变波长检测器VWD的停泵扫描功能,扫描所得的流动相吸收光谱,Update: 2005-3-21,Slide 42,可变波长检测器VWD的停泵扫描功能,出现色谱峰时,点击Sample Scan,扫描样品峰的吸收光谱,Update: 2005-3-21,Slide 43,可变波长检测器VWD的停泵扫描功能,光谱窗口中给出扣除流动相吸收光谱后的样品峰吸收光谱,Update: 2005-3-21,Slide 44,第三章 谱图优化,本章内容:,谱图调用 空白谱图的扣除 谱图优化 谱图加标注 谱图比较、处理,Update: 2005-3-21,Slide 45,调用数据文件,在Data Analys
15、is界面,File菜单下选择Load Signal。,扣除空白谱图,Update: 2005-3-21,Slide 46,扣除空白谱图,选择需要扣除的空白运行色谱文件,Update: 2005-3-21,Slide 47,选择、规定一个方法中要进行调用、处理的信号,Signal Details,Update: 2005-3-21,Slide 48,使用 Signal Options. 功能来优化色谱图的显示,谱图优化,在Data Analysis界面下,Graphics菜单下选择Signal Options.,Update: 2005-3-21,Slide 49,谱图优化工具,谱图优化图标,谱
16、图显示方式,化合物名称,保留时间显示,标题显示,轴,单独/重叠显示,基线,打印窗口,色谱图控制图标,移动标注,文字标注,设置标注格式,线形标注,删除标注,WMF图标注,拷贝,Update: 2005-3-21,Slide 50,选择: 字体和字型 字体大小 字体颜色、旋转角度等,在色谱图上加标注,Update: 2005-3-21,Slide 51,Add Annotation Draw Line in Window Move Annotation Delete Annotation,谱图处理工具,谱图处理工具,Update: 2005-3-21,Slide 52,如何执行积分 自动积分 如何
17、建立积分事件表 如何使用积分事件表 手动积分,本章内容:,第四章 积分优化,Update: 2005-3-21,Slide 53,增强积分方式可以提供: 当基线波动时,基线的定位。 使用初始峰高参数去除噪音峰。 控制积分开始和结束的标识。 在噪音中定位信号峰。 使用二阶导数确定肩峰。,增强积分方式,Update: 2005-3-21,Slide 54,当调用信号时,可以通过Integrate after load选项自动积分。 您也可以通过以下方式进行积分: 从 Integration 菜单选择积分或自动积分 选择积分工具。 运行一个包括数据分析的完整方法。,如何执行积分,Update: 20
18、05-3-21,Slide 55,自动积分,检查开始和结束区域,确定噪音。 赋予初始Slope Sensitivity和Height Reject值. 对第一次积分赋予一个临时峰宽值。 设置Area Reject为0。 执行测试性积分,有可能重复几次。 基于较早洗脱出的色谱峰宽计算峰宽值。 优化Slope Sensitivity和Height Reject。 从初始的峰宽和噪音水平计算Area Reject。,Update: 2005-3-21,Slide 56,积分事件,初始值,信号选项框,高级基线选择,Update: 2005-3-21,Slide 57,高级基线,Update: 2005
19、-3-21,Slide 58,添加积分事件功能,删除积分事件功能,积分事件表,Update: 2005-3-21,Slide 59,积分任务,对当前色 谱图积分,自动积分,积分事件,设置Baseline Now,设置Baseline Hold,设置拖尾 切线撇去,积分器开关,设置斜率,设置最小峰面积,设置固定峰宽,设置肩峰检测,积分工具栏,Update: 2005-3-21,Slide 60,Peak width: (半峰宽) 如果没有设置半峰宽的时间积分表,半峰宽在整个积分过程中自动变化,变化遵从0.75exiting peak + 0.25current peak。 Timed Event
20、s :(时间性积分事件) Area Sum ON or OFF:设定某一时间段内进行峰面积加和,加和后保 留时间被分配到第一个峰的保留时间上。 Baseline All Valleys On or OFF: 设定是否进行峰谷积分。,Update: 2005-3-21,Slide 61,Baseline Hold ON or OFF: 在Baseline Hold ON与Baseline Hold OFF两点间做水平基线。,Baseline Now: 在某一时刻点重新设置基线。 Baseline Back: 设置某一时刻点,从检测到的基线向此点做水平基线。,Update: 2005-3-21,S
21、lide 62,存贮积分事件到方法,作为方法的一部分存贮积分参数,保存方法,Update: 2005-3-21,Slide 63,选择积分工具,对目前色谱 图进行积分,自动积分,积分事件,手动积分 画基线,手动积分 负峰,手动积分 切线撇去,手动积分 裂分峰,手动积分 去除峰,手动积分工具,Update: 2005-3-21,Slide 64,Draw Baseline Negative Peak(s) Tangent Skim Split peaks Delete Peak(s) All Valleys,手动积分,Update: 2005-3-21,Slide 65,峰类型符号 峰起止点符号
22、 B 基线 P 基线渗透 V 峰谷点 H 水平基线 M 手动积分 T 切线撇去 其它符号 + 参考峰 I 内标峰 A+ 面积加和峰 N 负峰 S 溶剂峰 警示符号 + 高于含量上限 低于含量下限,Update: 2005-3-21,Slide 66,基线符号,B BB B,B=基线,B V B,V=峰谷点,B P B,P=基线渗透,B H H,H=水平基线,Update: 2005-3-21,Slide 67,如何建立校正表 如何选择校正表的设置 如何进行再校正 如何使用峰识别工具,本章内容:,第五章 高级校正表的建立,Update: 2005-3-21,Slide 68,配置系列标样*,然后
23、逐一进样分析。 *系列标样浓度范围要包含未知样品浓度。 调用低浓度标样数据,优化谱图显示。 优化积分参数,获得满意的积分结果, 然后存贮积分事件到方法。 用最低浓度标样数据建立一级校正表。 逐个对每个标样进行优化谱图,优化 积分后,分别加入校正表。 检查校正曲线,把校正曲线存入方法。,建立校准表的过程,Update: 2005-3-21,Slide 69,校 正 参 数 的 建 立,Signal details,Update: 2005-3-21,Slide 70,Available Signals 此框包括了所有要被处理的信号,可从此框选择被处理的信号,通过Add to Method 按键拷
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- AgilentHPLC1100 工作站 高级 操作 培训
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