《中国药典》2017年版仪器分析方法应对.ppt
《《中国药典》2017年版仪器分析方法应对.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《《中国药典》2017年版仪器分析方法应对.ppt(115页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、2019/5/16,1,中国药典2010年版 新仪器分析方法应对,李志伟,2019/5/16,2,现代分析技术的应用进一步扩大,2019/5/16,3,中国药典2010年版一部新修订项目,2019/5/16,4,2010年版二部与2005年版药典主要项目收载情况比对表,2019/5/16,5,柱色谱 纸色谱 薄层色谱 气相色谱,色谱法在2010年版药典的应用,高效液相色谱 离子色谱 凝胶色谱 毛细管电泳,正相色谱 反相色谱 离子对色谱,2019/5/16,6,色谱法的应用:纸色谱,纸色谱的基本原理-分配色谱 固定相-吸附在滤纸上的水 移动相-展开剂 样品在水和展开剂中的溶解度不同,故分配不同而
2、达到分离。例:盐酸苯乙双胍,2019/5/16,7,色谱法的应用:薄层色谱,2010版药典(二部)采用TLC的品种数量,共435个,2019/5/16,8,色谱法的应用:气相色谱,2019/5/16,9,色谱法的应用:高效液相色谱,20世纪70年代中期,HPLC仪开始出现,主要填料:10 m 的无定型硅胶颗粒。 70年代后期,发展了反相液相色谱。 80年代,HPLC 被广泛应用于化合物的分离,主要填料:粒径为5 10 m 球形硅胶。 90年代早期,粒径为 5 m 的高纯硅胶,即所谓的 B 型硅胶被发展,并成为这个行业填料的标准,这种 B 型硅胶含有微量的金属。 90年代后期,为了满足快速分离的
3、需求,发展了 3 m 或 3.5 m 的球形硅胶,其作用和性能逐渐的获得了人们的认同和接受。手性色谱柱的开发。 21世纪早期,为适应超快速的分离要求,粒径小于 2 m 的填料被开发出来,发展出了整体柱、无机和有机杂化硅胶。 目前,市场上流行的分析用的 HPLC 硅胶基质填料主要为 B 型硅胶。,填料发展史,2019/5/16,10,色谱法的应用:高效液相色谱,填料发展史,2019/5/16,11,色谱法的应用:高效液相色谱,2010版药典二部中色谱柱的使用情况,2019/5/16,12,色谱法的应用:高效液相色谱,2019/5/16,13,色谱法的应用:高效液相色谱,2010版药典主要修订项目
4、 1、色谱柱 (1)常用色谱柱填料粒径310m (2)微径柱填料粒径 约2m(UPLC或UFLC) 硬件须匹配 色谱条件可适当调整 以品种正文规定条件的测定结果为准 2、柱温 (1)通常为室温 (2)以硅胶为载体的普通色谱柱,最高使用温度不得超过60,(HTLC),2019/5/16,14,基本原理 离子色谱中发生的基本过程就是离子交换,因此,离子色谱本质上就是离子交换色谱。 在离子色谱的基本组成中,重要的和与其他高效液相色谱不同的就是抑制器和电导检测器,离子色谱用的泵是PEEK材料衬里的不锈钢泵。,色谱法的应用:离子色谱,离子交换色谱法主要用于分析有机酸、氨基酸、多肽及核酸等离子型化合物的分
5、离。,2019/5/16,15,色谱法的应用:离子色谱,阳离子交换柱 山梨醇及制剂 甘油果糖氯化钠注射液 甘露醇及制剂 利巴韦林及制剂 盐酸二甲双胍及制剂 苹果酸及制剂 富马酸及制剂,阴离子交换柱 肝素钠及制剂 帕米磷酸二钠及制剂 氯膦酸二钠及制剂 硫酸软骨素钠及制剂,2019/5/16,16,例:离子色谱(氯膦酸二钠),照离子色谱法(附录 J)试验 用阴离子交换色谱柱或效能相当),柱温30, 以水为流动相A,以0.1mol/L氢氧化钾溶液为流动相B,梯度洗脱,流速为1.2 ml/min。 检测器为电导检测器,检测方式为抑制电导检测。,用于氯膦酸二钠原料药的有关物质与制剂的含量测定,2019/
6、5/16,17,固定相是有一定孔径的多孔性填料,流动相是可以溶解样品的溶剂。小分子量的化合物可以进入孔中,滞留时间长;大分子量的化合物不能进入孔中,直接随流动相流出。 它利用分子筛对分子量大小不同的各组分排阻能力的差异而完成分离。 常用于分离高分子化合物,如多糖、多肽、蛋白质、核酸等。,色谱法的应用:凝胶色谱法,2019/5/16,18,2010版药典二部采用常压凝胶色谱的品种,2019/5/16,19,2010版药典二部采用高效凝胶色谱的品种,2019/5/16,20,2010版药典二部采用高效凝胶色谱的品种,2019/5/16,21,2010版药典二部采用电泳法的品种,色谱法的应用:电泳及
7、毛细管电泳法,2010版药典二部采用CE的品种,2019/5/16,22,例:毛细管电泳(抑肽酶),sigma抑肽酶对照品毛细管电泳谱图,2019/5/16,23,例:毛细管电泳(抑肽酶),供试品毛细管电泳谱图(杭州澳亚生物技术有限公司生产,批号:071015),2019/5/16,24,例:毛细管电泳(抑肽酶),2019/5/16,25,色谱法的应用:毛细管电泳,分离模式 毛细管区带电泳CZE 胶束电动毛细管色谱MEKC 毛细管等电聚焦CIEF 毛细管凝胶电泳CGE 毛细管电色谱CEC,高分子化合物的分析 手性化合物的分析,2019/5/16,26,色谱法的应用:液相色谱常用检测器,光学检测
8、器:紫外、荧光、示差折光、蒸发光散射(通用型检测器) 电化学检测器:极谱、库仑、安培 电学检测器:电导、介电常数 质谱检测器 选择性检测器:灵敏度较高,2019/5/16,27,2010版药典二部采用检测器情况,色谱法的应用:液相色谱常用检测器,2019/5/16,28,色谱法的应用:蒸发光散射检测器,优点: 适用于没有特征紫外吸收或紫外吸收很弱的待测物,使用UV时灵敏度更低;无需衍生化而直接测定,避免了衍生带来的误差。 可以应用有强紫外吸收的试剂,如氯仿、丙酮等。 适用于组分复杂样品的分析,可以进行梯度洗脱,基线平稳。 通用型检测器,只要待测物挥发性低于溶剂,即可适用。对不同物质,ELSD相
9、应因子的变化比其它检测器要小得多。 对环境影响不灵敏,室温下即可操作。 没有溶剂前缘峰,适用于保留时间短的物质的检测。 与LC-MS的色谱条件一致,可直接进行方法转换。,2019/5/16,29,色谱法的应用:蒸发光散射检测器,影响ELSD响应的因素 载气流速、雾化器设计与温度、流动相的组成和流速等影响雾化过程。 被分析物的浓度和体积质量决定了进入光散射池的气溶胶中的颗粒的直径。 被分析物的折射指数、光源发出的光的强度和波长、光电倍增管的位置等影响散射光强度。 光电倍增管的灵敏度和入射光的强度决定了检测的效率,反映为实验者所观测的峰面积。,2019/5/16,30,色谱法的应用:蒸发光散射检测
10、器,2019/5/16,31,色谱法的应用:蒸发光散射检测器,图 硫酸核糖霉素有关物质色谱图 (蒸发管温度:65,分流模式),2019/5/16,32,色谱法的应用:蒸发光散射检测器,图 硫酸核糖霉素有关物质色谱图 (蒸发管温度:110,不分流模式),2019/5/16,33,色谱法的应用:蒸发光散射检测器,谨慎使用,充分优化实验条件。企业质控人员和药检所人员均需要。 漂移管温度的优化:温度对响应值的影响无明显的规律性。最优温度为在流动相基本挥发的基础上,产生可接受噪音的最低温度。 雾化气流速的优化:流速越大,响应值越低。最优气体流速应是在可接受噪音的基础上,产生最大检测响应值的最低气体流速。
11、,2019/5/16,34,色谱法的应用:示差折光检测器,原理:连续测定流通池中溶液折射率来测定试样中各组分浓度。 优点:通用型检测器 缺点: 1)对温度变化敏感 2)对溶剂组成变化敏感,不能用于梯度检测 3)属于中等灵敏度的检测器,2019/5/16,35,色谱法的应用:示差折光检测器,山梨醇 山梨醇注射液 甘露醇 甘露醇注射液 乳果糖口服溶液,葡甲胺 麦芽糖 乳糖 -环糊精 羟丙基-环糊精,2019/5/16,36,色谱法的应用:电导检测器,原理:根据物质在某些介质中电离后所产生的电导变化来测定电离物质含量。 优点:对流动相流速和压力的改变不敏感,可用于梯度洗脱。 缺点:对温度变化敏感(每
12、升高1度,电导率增加2%-2.5%)。 广泛应用于离子色谱。主要用于检测水溶性无机和有机离子。,2019/5/16,37,色谱法的应用:电导检测器,帕米膦酸二钠注射液 注射用帕米膦酸二钠 盐酸头孢吡肟 注射用盐酸头孢吡肟,氯膦酸二钠 氯膦酸二钠注射液 氯膦酸二钠胶囊,2019/5/16,38,色谱法的应用:质谱检测器,2019/5/16,39,色谱法的应用:质谱检测器,离子化方式: 电喷雾 大气压化学电离 MALDI,质量分析器: 四级杆 离子肼 飞行时间 磁分析器 傅立叶变换离子回旋共振,方 法 学 验 证 的 重 要 工 具,2019/5/16,40,简介,色谱质谱的在线联用将色谱的分离能
13、力与质谱的定性功能结合起来,实现对复杂混合物更准确的定量和定性分析。而且也简化了样品的前处理过程,使样品分析更简便。 色谱质谱联用包括气相色谱质谱联用(GC-MS)和液相色谱质谱联用(LC-MS),液质联用与气质联用互为补充,分析不同性质的化合物。,2019/5/16,41,液质联用与气质联用的区别:,气质联用仪(GC-MS)是最早商品化的联用仪器,适宜分析小分子、易挥发、热稳定、能气化的化合物;用电子轰击方式(EI)得到的谱图,可与标准谱库对比。 液质联用(LC-MS)主要可解决如下几方面的问题:不挥发性化合物分析测定;极性化合物的分析测定;热不稳定化合物的分析测定;大分子量化合物(包括蛋白
14、、多肽、多聚物等)的分析测定;没有商品化的谱库可对比查询,只能自己建库或自己解析谱图。,2019/5/16,42,2019/5/16,43,2019/5/16,44,常见术语:,质荷比: 离子质量与它所带电荷(以电子电量为单位计)的比值,写作m/Z. 峰: 质谱图中的离子信号通常称为离子峰或简称峰. 离子丰度: 检测器检测到的离子信号强度. 基峰: 在质谱图中,指定质荷比范围内强度最大的离子峰称作基峰. 总离子流图;质量色谱图;准分子离子;碎片离子;多电荷离子;同位素离子,2019/5/16,45,总离子流图:,在选定的质量范围内,所有离子强度的总和对时间或扫描次数所作的图,也称TIC图.,2
15、019/5/16,46,质量色谱图,总离子流图,2019/5/16,47,准分子离子:,指与分子存在简单关系的离子,通过它可以确定分子量.液质中最常见的准分子离子峰是M+H+ 或M-H- . 在ESI中, 往往生成质量大于分子量的离子如M+1,M+23,M+39,M+18称准分子离子,表示为:M+H+,M+Na+等,2019/5/16,48,碎片离子:,准分子离子经过一级或多级裂解生成的产物离子. 碎片峰的数目及其丰度则与分子结构有关,数目多表示该分子较容易断裂,丰度高的碎片峰表示该离子较稳定,也表示分子比较容易断裂生成该离子。,2019/5/16,49,Ephedrine, MW = 165
16、,2019/5/16,50,如何看质谱图:,(1)确定分子离子,即确定分子量 氮规则:含偶数个氮原子的分子,其质量数是偶数,含奇数个氮原子的分子,其质量数是奇数。与高质量碎片离子有合理的质量差,凡质量差在38和1013,2125之间均不可能,则说明是碎片或杂质。,2019/5/16,51,(2)确定元素组成,即确定分子式或碎片化学式,高分辨质谱可以由分子量直接计算出化合物的元素组成从而推出分子式 低分辨质谱利用元素的同位素丰度,例:,2019/5/16,52,有机质谱的特点,优点: (1)定分子量准确,其它技术无法比。 (2)灵敏度高,常规10-710-8g,单离子检测可达10-12g。 (3
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 中国药典 中国 药典 2017 仪器 分析 方法 应对
链接地址:https://www.31doc.com/p-2787787.html