体外分析的数据处理-检验核医学.ppt
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1、体外分析的数据处理,数据处理基本步骤,数据处理是将实验测得的未知样品的直接结果换算成剂量,每次实验均需绘制标准曲线(剂量反应曲线),从中查出待测样品剂量。 1、绘图法(有人为误差) 2、数学模型拟合法,第一节 RIA、IRMA剂量反应曲线的建立,一、RIA剂量反应曲线 二、IRMA剂量反应曲线,一、RIA剂量反应曲线,反应动力学模式: *Ag+Ag+Ab (*Ag-Ab)+(Ag-Ab) 其中:Ab限量 (*Ag+Ag)抗原决定簇 Ab结合位点 对于Ab, *Ag和Ag不可辨别,与Ab结合机 率一致 如果:固定*Ag量, Ag则(*Ag-Ab), Ag则(*Ag-Ab); Ag浓度与(*Ag-
2、Ab)放射性计数呈反向关系,RIA剂量反应曲线,RIA-Kit有一组具有梯度,已知为标准浓度的Ag标准品,以此为横坐标,以与之相对应的(*Ag-Ab)放射性计数为纵坐标,可建立反映Ag浓度与(*Ag-Ab)计数的反向变化规律曲线RIA剂量反应曲线。 待测物的Ag浓度可根据其对应的(*Ag-Ab)计数,在曲线中查得。,常用专业名词,T(Total)管计数:每一试管投入的*Ag的 放射性计数。 B(Bound)管计数:(*Ag-Ab)的计数也 称结合计数 Bo管计数:当Ag=0浓度时的(*Ag-Ab) 计数,为最大结合计数 F(Free)计数:游离的*Ag的放射性计数, F=T-B,RIA剂量反应
3、曲线反应坐标(纵坐标)表达方式,B-(*Ag-Ab)计数 F/B或B/F 结合计数与游离计数之比,B,T,=,(*Ag-Ab)计数,每管总计数,1,B,B0,=,(*Ag-Ab)计数,“0”管(*Ag-Ab)计数,1,二、IRMA剂量反应曲线,反应动力学基本模式 -Ab(m)+Ag -Ab(m)Ag+*Ab(过量) -Ab(m)Ag*Ab+*Ab(余) 试中:Ag标准品或待测样品 如果 Ag -Ab(m)Ag*Ab,两者呈正向关系,IRMA剂量反应曲线,以Ag浓度为横坐标,其对应的-Ab(m)Ag*Ab计数为纵坐标(反应坐标),可建立两者的正向变化规律曲线IRMA剂量反应曲线。 待测物Ag的浓
4、度,可根据其对应的-Ab(m)Ag+*Ab计数在曲线中查得。 B(Bound)计数:- Ab(m)Ag*Ab放射性计数 Bmax计数:当标准品Ag的浓度为最大的点,对应的 - Ab(m)Ag*Ab计数,IRMA剂量反应曲线纵坐标(反应坐标)表达方式,B- -Ab(m)Ag*Ab放射性计数 F/B或B/F(结合计数与游离计数之比),B,Bmax,=,-Ab(m)Ag*Ab放射性计数,标准品max -Ab(m).Ag.*Ab计数,1,第二节 RIA、IRMA剂量反应 曲线处理的常用模式,函数表达式 y=f(x) 模拟曲线规律,常用方法有: 1、线性内插 2、坐标变换法(直线化法) 3、多项式拟合
5、4、样条函数拟合 5、四、五参数logistic模型 6、单位点质量作用定律模型,最小二乘法,一、线性内插,式中:Xa未知样品上一点标准品浓度(已知) Xb未知样品下一点标准品浓度(已知) ya标准品Xa对应的反应参数(B计数 或结合率测量数) yb标准品Xb对应的反应参数(B计数或结合 率测量数) y未知样品对应的反应参数(B计数或结合 率测量数),ya-y,ya-yb,=,X-Xa,Xb-xa,(对应边成比例),优点:计算简便 缺点:误差不均匀,尤其在直线的两侧误差不对称,误差较大。,二、坐标变换法(直线化法),常用loglogit方式 纵坐标变换y=Lny/(1-y) (y为结合率B/B
6、0) 横坐标变换X=LnX(X标准品Ag浓度) 数学模型:Lny/(1-y)=a+bLnX,y与Lny/(1-y)的比较,y=0.5 Lny/(1-y)=0 y Lny/(1-y) y Lny/(1-y) 0.9 2.197 0.1 -2.197 0.8 1.386 0.2 -1.386 0.7 0.847 0.3 -0.847 0.6 0.405 0.4 -0.405,优点:可使误差的不均匀性通过加权补偿,且可将坏点去除。 缺点:零剂量点丢失,灵敏度降低。不适用于顺序加样法。如有坏点,整条曲线会偏离。,三、多项式拟合,y=a0+a1x+a2x2+a3x3+anx RIA和IRMA常用: y=
7、a0+a1x+a2x2+a3x3 y结合计数或结合率或 y=a0+a1x1/2+a2x+a3x3/2 x标准品Ag浓度,优点:无论曲线好坏均可拟合。 缺点:仅能在某一区域模拟剂量反应曲线,普遍适用性差。曲线容易出现震荡,尤其是高剂量端,造成测量值偏小。,四、样条函数拟合,实为曲线内插,分段用三项函数拟合,然后进行平滑修正。 模式:y=ai+bi(x-xi)+ci(x-xi)2+di(x-xi)3 y反应参数(计数或结合率) x标准品Ag浓度,五、四、五参数logistic模型,由log-logit转化而来 g为不对称因子,如果g=1,上述模型成为四叁数 式中: y为反应参数(B计数或B/B0,
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