体外放射分析(检验)-检验核医学.ppt
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1、第四章 体外放射分析,核医学教研室,教学目的,掌握体外放射分析的原理(RIA、IRMA) 掌握RIA与IRMA的异同 掌握RIA、IRMA的基本操作程序 掌握RIA、IRMA的基本试剂 了解体外放射分析试剂的要求 体外放射分析B与F的常见分离方法,重难点,重点: 1、RIA、IRMA的原理 2、RIA、IRMA的异同点 难点: 1、RIA的原理,体外放射分析指在体外实验条件下,以特异结合反应为基础,以放射性测量为手段,对生物活性物质进行超微量分析的总称。 特点:灵敏度高、特异性强、精密度好、应用范围广、方法简便。,一 体外放射分析的概述,(一)特异性结合 1、抗原与抗体 2、配体与受体 3、底
2、物与酶 4、激素与血浆结合球蛋白,(二)结合反应动力学规律 L+B=LB 1、竞争性结合分析 L+*L+B=LB+*LB 2、非竞争性结合分析 Sp.Ab1+Ag=SpAb1.Ag+*Ab2=Sp.Ab1. Ag.*Ab2+*Ab2,(三)放射性测量 放射性测量是定量的基础,第一节 放射免疫分析 radio innumo assay,RIA,竞争放射分析,放射免疫分析 (Radio Immuno Assay, RIA) 竞争性蛋白结合分析 (Competitive Protein Binding Assay, CPBA) 放射受体分析 (Radio Receptor Assay, RRA),L
3、+*L+B=LB+*LB,(一)放射免疫分析原理,*Ag+Ag+Ab =(*AgAb)+(AgAb)+*Ag + Ag 0 Max Min 条件: 1、 *Ag定量、足量 2、 Ab限量 *AgAb,放射性计数,Ag,Ag与*Ag-Ab成反比!,专用符号: 1、T (Total): 加入的*Ag的放射性计数 2、B (Bound): *AgAb免疫复合物的放射性计数 3、B0 Ag=0时*AgAb放射性计数 4、F (Free): 游离的*Ag的放射性计数 T=B+F 5、NSB(Non-specific binding): 非特异性结合产生的放射性计数 6、结合率:B/T、B/B0、B/F,
4、*Ag+Ag+Ab =(*AgAb)+(AgAb)+*Ag + Ag,不同坐标体系对应RIA剂量反应曲线,(二)RIA的三种基本试剂,标准品(Ag) 标记物( *Ag) 抗体(Ab),放 射 性 免 疫 及 免 疫 放 射 分 析 试 剂 盒,1、标准品,化学结构: 应与被测物具有相同的化学结构 化学纯度: 纯品 化学度量: 准确 稳定性: 保持生物活性不变,2、标 记 物,要求: 1、较高的比活度 2、生物活性与免疫活性:与标记前一致 3、放射化学纯度:95% 4、稳定性 鉴定: 1、最大结合率 2、标准曲线比较法 3、稀释曲线比较法,3、抗体,要求: 1、亲和力 2、高滴度 3、特异性 4
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