水体中大肠菌群的测定PPT课件.ppt
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1、水体中大肠菌群的测定,【课前预习】,1. 典型的大肠杆菌群菌落特征是什么? 2. 食品中大肠菌群数测定的意义是什么?,【目的要求】,1. 学习和掌握大肠菌群的测定方法(多管发酵法) 2. 了解测定过程中每一步的反应原理。 3. 了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性,【实验原理】,大肠菌群是一群能在37培养48h内发酵乳糖产酸、产气的需氧或兼氧革兰氏染色阴性无芽抱杆菌。以大肠杆菌为主,包括肠细菌属、柠檬酸细菌属、埃希氏菌属和克雷伯氏菌属等。 大肠菌群在肠道和粪便中数量非常高,且与肠道和粪便中的病原菌生活习性相近,可作为判断样品是否被人、畜粪便污染的标志。,发酵法: 又称多管发酵法或三步发酵法(此法
2、是根据大肠菌群具有发酵乳糖产酸产气的特性,利用含乳糖的培养基培养不同稀释度的样品经初发酵、平板分离和复发酵3个检测步骤,最后根据结果查最大自然数(most probable number)表,算出食品中的大肠菌群数。 ),1) 初发酵(推测试验): 将不同稀释度的水样,分别接种于含有乳糖等糖 类的培养液中(3倍或1倍乳糖培养基,视所加的水样 体积和培养基体积而定),经37 C培养24 h,观察产 酸产气情况,以初步判断是否有大肠菌群存在。,发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基,并倒置杜氏小套管。乳糖能起选择作用,因为很多细菌不能发酵乳糖,而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。为便于观察细菌的产酸情况,培
3、养基内加有溴甲酚紫作为pH指示剂,细菌产酸后,培养基即由原来的紫色变为黄色。溴甲酚紫还有抑制其他细菌如芽孢菌生长的作用。,2)平皿分离(证实试验),水中除大肠菌群外,尚有其它细菌可能引起糖类发酵,因此需要进一步证实。 将初发酵管中已发酵的菌液接种于伊红美兰培养基,37 C培养24 h,根据菌落特征,挑取可能为大肠菌群的菌落制片,经革兰氏染色,进一步证实是否为大肠菌群。,平板培养基使用伊红美蓝琼脂(eosin methyleneblue agar,EMB agar)。伊红美蓝琼脂平板含有伊红和美蓝染料,在此亦作为指示剂,大肠菌群发酵乳糖造成酸性环境时,该两种染料即结合成复合物,使大肠菌群产生带核
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