药敏试验(扩散法)操作方法PPT.ppt
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1、药敏试验(扩散法)操作方法,河南康星畜禽疫病诊断中心 马长宇 13333835742,内容:,一、药物敏感试验的目的与意义 二、常用的药敏测定方法 三、试验准备及用品 四、药敏试验操作步骤 五、结果观察 六、影响药敏结果的因素,一、概念,抗菌药物敏感性试验(AST,简称药敏试验):用于测试抗菌药物在体外对病原微生物有无抑制作用。 (1)MIC:体外能够抑制细菌生长的最低药物浓度,临床医师可以根据MIC确定药物剂量。通常达到稳态的血药峰浓度(Css)max应为MIC的4-8倍,重症感染以大于8倍为妥。 (2)为方便临床给药,根据MIC提供一个定性的结果是必要的。临床医师根据敏感、中介、耐药的提示
2、结合MIC可以方便地制定用药方案。 敏感(S):表示该药物对细菌的MIC值低于常规剂量下的抗菌 药物血液浓度或组织浓度4-8倍,可以用常规剂量治愈。 中介(I):表示该药物对细菌的MIC值接近于常规剂量给药后的血药浓度或组织药物浓度,细菌对该药的敏感性降低,但仍可用于生理性浓集部位的感染或使用高剂量药物进行治疗(注:必须考虑高剂量的安全性)。 耐药(R):表示该药物对细菌的MIC值等于或高于常规剂量下药物的血液浓度或组织浓度,细菌不能被该种药物抑制。,意义:,1、检测病原菌对各种抗生素的敏感性,指导临床合理用药。避免盲目用药、滥用药、大剂量用药。 2、监测耐药性,分析耐药菌变迁,了解某一地区致
3、病菌的耐药变迁、流行病学调查及监控,控制和预防耐药菌株的流行 3、为经验用药提供所选药物的参考依据,可预测抗菌治疗的效果。“敏感”治疗可能有效;“耐药” 肯定失败 4、新抗菌药的研究,以下情况不需进行药敏测定:,标本污染细菌,非致病菌引起 已知某些抗菌药对某菌有良好的抗菌作用且很少有耐药菌产生 已知细菌全部耐药的药物 对营养要求高而不易生长的细菌,二、常用的药敏测定方法,1、扩散法:纸片法、牛津杯法、打孔法等。 纸片法 手工测试的方法,通过测试药物纸片在固体培养基上的抑菌圈的大小,判断细菌对该种药物是否敏感。目前临床上广泛使用此法。定性 2、稀释法:琼脂稀释法、液体稀释法(试管、微量) 通过测
4、试细菌在含不同浓度药物培养基内的生长情况,判断其最低抑菌浓度(MIC)。自动化仪器均采用液体稀释法为药敏试验的方法。 定量 3、E测定法(E test): 与扩散法相似,但药物包被于长塑料条上,能够精确测定MIC值。适于一些特殊病原菌的药敏测试,但价格较为昂贵。 4、全自动药敏仪法:,1、培养基,1、是兼性厌氧菌和需氧菌药敏试验标准培养基 2、如营养要求高可加0.5%羊血。 3、平板直径为9cm。 4、琼脂板厚度4mm。误差1mm。 5、4保存7天。,MH肉汤(100)、MH琼脂(250) ;营养肉汤(60) 、营养琼脂 (80)均可以生化试剂店买到。,操作步骤:,1、玻璃器皿的准备 冲洗、包
5、裹、灭菌、干燥 2、记量、称取原料 3、加热溶解 4、校正PH值 5、灭菌 6、分装、包裹、备用,2、药敏片,1、单药(一种成分) 市场生化试剂店有售,也可自制。但含量及监测标准有严格界定。建议购买 2、成药(复方成分) 多种联合的抗菌药物制剂应以其成分中某种含量最高的抗菌药物为标准稀释成有效浓度。但多数厂家由于产品配方机密,多按产品用量进行配制。药敏片可由厂家提供,也可自制。 3、中药草药 将中药研成粉未,1克加适量的水充分浸泡煮沸,滤液除去杂质后浓缩成1毫升,过滤、高压灭菌后加入100张纸片干燥备用。,制作步骤: 1、纸片的准备 2、药液的配制 3、抗菌药敏纸片制作,质控:标准菌株的抑菌圈
6、直径应落在预期范围内,如果超出该范围,应视为失控而予以纠正。,简易药敏片的制法,纸片的准备: 1、取新华1号定性滤纸,用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中,瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15-20分钟高压消毒后,放在37温箱或烘箱中数天,使完全干燥。 2、药片吸水量的测定 在上述药片用微量移液器进行滴加蒸馏水,最可使药片完全浸透又不滴水为宜,最终计算出每片药片的吸水量。一般常用直经6mm的定性滤纸药片吸水量为0.01ml。,药液的制备(用于商品药的试验): 按兽药说明书(或标签)上标明的治疗量的10-20倍比例配制药液。如某药品:100g兑水100kg,
7、表明该药治疗量为1g兑水1L,配制药液时就是1g加50-100ml水或1L水加10-20g药品,即为配制药敏片所用的药液浓度。 抗菌药的稀释剂通常用纯化水。,说明: 不同厂家标示成分及含量相同的成品制剂在用成品做成药敏时常出现显著差异(包括同一厂家生产) 由于在进行成品制作时常加入一定量的辅助成份,其对药敏试验结果常造成较大影响,所以成品药敏试验结果并不能完全显示成品的真实结果。 不能用单药的药敏结果代替成药进行用药。(标示与真实成份及含量有很大差别) 建议选用厂家提供的以成品主药成份制作的药敏片使用。 中药由于其成份复杂及独特作用机理,药敏试验不能作为唯一的判定标准。,抗菌药敏纸片制作: 方
8、法一: 按每张纸片饱和吸水量为0.01毫升计,在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.5毫升,并翻动纸片,使各纸片充分浸透药液,翻动纸片时不能将纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称,放37温箱内过夜,干燥后即密盖。 方法二: 1、将药液盛于干净干燥的平皿中。然后将烘干的纸片逐片放入配制好的药液中,置于4-8浸泡1-2小时,同时要注意翻动,使各纸片充分透药液。 2、将浸泡好的药敏片用镊子夹出,放入另一干燥平皿中。置于恒温箱中,温度37,烘干1224小时。(注意经常翻动,避免药敏片重叠粘连)。 3、将烘干好的药敏片放入青霉素瓶内进行保存。,药敏纸片的储存: 长期储存应于20,日常使用的小量纸片可
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