临床标本的细菌学检验ppt课件(1).ppt
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1、第十八章,临床常见标本的细菌学检验,常见临床标本,1、血液 2、尿液 3、粪便 4、 4、脓汁 5、痰 6、穿刺液(胸水、腹水、心包液、关节液、脑脊液) 7、胆汁 8、咽拭子,标本采集的基本原则,尽早采集 病程早期、急性期、症状典型时、抗生素治疗前 无菌采集 标本容器须灭菌处理,但不得使用消毒剂 选择合适方法采集 适量采集 肠热症患者,病程第1周采集血液、第2周粪便、 第3周尿液 安全采集 注意防止污染、避免自身感染 标本的运送 采样后立即送检,一般不超过1h 痰、尿标本应保存在4;脑脊液、滑膜液应25保存,检验的基本程序,初次分离选用的培养基类别,血液、骨髓 先增菌后接种血、巧、中 胸腹水
2、先增菌后接种血、巧、中 脑脊液 先增菌后接种血、巧、中 胆汁 先增菌后接种血、中 尿液 接种血、中 粪便 接种SS、中 痰 、咽拭子 接种血、巧、中 脓、伤口分泌物 接种血、巧、中 白喉棒状杆菌 接种血、胱氨酸亚碲酸钾血琼脂 淋病奈瑟菌 接种血、MTM 真菌 沙保罗琼脂,检验的报告方式,初步报告方式 涂片染色、直接镜检 从染色性、基本形态、排列方式几方面报告 阳性结果: 检出XX性XX菌,形似XX菌 找到XX性XX菌 找到真菌菌丝和孢子 阴性结果:未找到或未检出细菌 未查到抗酸杆菌 未发现真菌菌丝或孢子,检验的报告方式,确定报告方式 经分离培养、生化反应及血清学试验后 报告 阳性结果:培养出X
3、X细菌 有XX细菌生长 检出XX群XX菌 培养XX天有XX菌生长 阴性结果:未培养出细菌 未检出细菌 培养XX天无细菌生长,第一节、 血液标本的细菌学检验,血液标本的细菌培养是诊断菌血症或败血症的基本方法。 如从患者血液中检出细菌,一般应视为病原菌。 常见的病原菌主要有: 1、革兰阳性菌: 金黄色葡萄球菌、A群链球菌、B群链球菌、肺炎链球菌、肠球菌 草绿色链球菌 产单核细胞李斯特菌、结核分枝杆菌 2、革兰阴性菌 脑膜炎奈瑟菌、卡他莫拉菌 伤寒及副伤寒沙门菌、铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌 3、其他病原菌:念珠菌、新型隐球菌,血培养最佳的采血时机?,最佳采血时机,一般于病人发热1-2天内采集血液标本
4、。 尽可能在未使用抗菌药物前采集。 对已经使用抗菌药物的患者,则在下一次使用抗菌药物之前采集。 尽可能在寒战或发热前0.51h内采集。,血培养瓶的消毒,取下顶部保护性的弹性帽盖。 注意:内部的橡皮塞并非无菌的,必须进行消毒。 75%酒精消毒血培养瓶橡皮塞子60s。 将标本注入培养瓶内。,采血套数及采血量,应在不同部位采集23套血培养。 应在10min内完成采血。 成人每瓶血培养应采8 10ml。 儿童每瓶采3 5ml。 新生儿0.5ml。 婴幼儿1 2ml,采血量不能超过全血量的1%。 增菌培养液与血液的比例为10:1。 婴幼儿不需常规做厌氧菌血培养。,感染性心内膜炎对血培养检测的特殊要求,血
5、培养套数:建议起始采集3套血培养,如果24h内报告阴性,则继续采集2套血培养,共采集5套血培养。 解释:采集多套血培养, 其一,可以帮助判断阳性血培养是真性菌血症,还是由污染菌引起, 因为由污染菌引起的往往在多套血培养中仅有一套报阳性; 其二,多套血培养可以提供更充足的采血量,而血量是影响血中微 生物检出的非常重要的因素; 其三,多套血培养可帮助判断是否为持续性菌血症。 如病人已实施治疗,应在增菌培养液中加入相应拮抗剂: 磺胺类药物对氨基苯甲酸5mg/100ml. 青霉素2u青霉素酶/ml 氨基糖苷类、多粘菌素类聚回香脑磺酸钠 其他抗生素MgSO4 5mg/100ml,血标本采集的注意事项,应
6、从静脉采血,不建议采集动脉血。 血培养不宜从静脉导管或静脉留置装置取血。 血培养瓶常温保存,不应冷藏;采集血标本后请立即送到检验科进行检测,如果是夜班采集标本,可以放室温保存(不要冷藏或者放到孵箱内,第二天交班请立即送到检验科。,血液标本细菌学检验方法和操作流程,3. 报告方式 培养7d无菌生长者报告“培养7d无菌生长”。 查见细菌报告菌名和药敏结果。,2. 培养瓶中有细菌生长时的不同表现。,第二节 脑脊液标本,脑脊液的细菌学检查对于细菌性脑膜炎的诊断有重要价值。 正常人的脑脊液是无菌的,检出细菌提示有细菌性(急性化脓性、结核性等)脑膜炎。,标本中常见的病原菌,一、革兰阳性菌 金葡菌 A群(化
7、脓性)链球菌 B群(无乳)链球菌 新生儿 肺炎链球菌 成人 结核分枝杆菌 产单核细胞李斯特菌 二、革兰阴性菌 脑膜炎奈瑟菌 成人 流感嗜血杆菌 儿童 三、真菌 新型隐球菌 白色念珠菌,(一)标本的采集,由临床医师以无菌操作腰椎穿刺(图5一3),抽取脑脊液3一5ml,盛于无菌容器中立即送检,一般不能超过1h。 脑膜炎奈瑟菌离体后能产生自溶素、迅速自溶;肺炎链球菌及流感嗜血杆菌也易死亡。因此脑脊液无论涂片或培养、必须于采集后立即送检或床旁接种,不宜将其置于冰箱保存、否则影响检出率。 第一管作微生物学检验、第二管生化和免疫学检验、第三管脑脊液常规。,脑脊液标本细菌学检验方法和操作流程图,(1)一般细
8、菌涂片检查: 化脓性脑膜炎脑脊液大部分明显混浊,可直接涂片,无色、透明的脑脊液3000r/min ,离心10-15min后涂片,革兰染色后镜检。 根据染色及形态特征,常可初步提示细菌的种类例如,革兰阴性、凹面相对的球菌,可能是脑膜炎奈瑟菌;链状排列的革兰阳性球菌,可能是链球菌;长丝状等多形态性的革兰阴性杆菌,可能是流感嗜血杆菌。 结核分枝杆菌涂片检查: 取脑脊液的离心(3000r/min ,30min)沉淀物作抗酸染色,发现红色杆菌,报告“找到抗酸杆菌”。如有纤维团,直接取纤维团涂片。镜检必须非常仔细,因为往往在一张玻片上只能找到1一2个结核菌。 (3)新型隐球菌涂片检查 取脑脊液的离心沉淀物
9、作墨汁负染色,加盖片后高倍镜检,黑色背景中见有菌体和较宽的荚膜,可能为“新型隐球菌”。,1、涂片检查,(二)检验方法和操作流程,(二)检验方法和操作流程,2. 分离培养 标本离心后接种血平板、巧克力平板,5-10 CO2 35 培养18-24h,进一步鉴定。 血平板 CO2 环境培养,易于识别溶血链球菌和肺炎链球菌 巧克力平板CO2 环境培养,有利于检出肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌。 3. 报告方式 培养48小时,仍无菌生长者报告“培养2天无细菌生长”。 查见细菌报告细菌,报告菌名和药敏结果。,第三节 痰标本,下呼吸道的痰液是无细菌的,而经口腔咳出的痰带有多种上呼吸道的正常寄生菌(如
10、草绿色链球菌)。若从患者痰标本中查见致病菌或条件致病菌,提示有下呼吸道感染。 常见的病原菌主要有: (1)革兰阳性菌 肺炎链球菌、A群链球菌、金黄色葡萄球菌 结核分枝杆菌、白喉棒状杆菌 (2)革兰阴性菌 卡他布兰汉菌、脑膜炎奈瑟菌 流感嗜血杆菌、肠杆菌科细菌 铜绿假单胞菌、嗜肺军团菌 (2)其他病原菌 放线菌、奴卡菌、真菌、肺炎支原体,(一)痰标本的采集,标本采集方法 (1) 自然咳痰法 (2) 支气管镜采集法 (3) 气管穿刺法 (4) 结核分枝杆菌标本收集法:收集24h痰液 以提高阳性检出率。,呼吸系统标本细菌学检验方法和操作流程,(二)检验方法和操作流程,1. 肉眼观察 包括颜色、粘度、
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