2007年禽流感核酸检测考核结果汇报.ppt
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1、2007年禽流感核酸检测考核结果汇报,1,2,核酸检测是禽流感检测的一种重要手段 快速、灵敏、特异性高 多种因素影响检测的结果 标本的采集 核酸的提取 反应体系的优化,包括引物探针的设计,试剂的选择 熟练的操作 良好的实验室管理,3,2005年以来中国大陆H5N1 人禽流感确诊病例实验室诊断,4,2006年核酸考核:参考品制备和网络实验室评价检测。 制备标准品包括:病毒裂解液、体外转录RNA、 样品包括不同检测的灵敏度设灰色检测区、统一配发核酸提取试剂和引物。 2007年核酸考核:了解各省禽流感核酸检测能力 考核标本:病毒裂解液、不同时发放核酸提取试剂和引物,流感网络实验室核酸考核进程,07年
2、考核目的,深入了解各省份禽流感核酸检测能力的基本情况。 了解各省禽流感核酸检测工作中可能存在的实际问题。 了解核酸检测工作的不足并确定下一步的工作重点。,5,组织形式,本次考核由中国CDC发文,国家流感中心执行。 本次考核定位为基础水平考核,并附有情况调查表。 本次考核标本发放全国31个省(自治区、直辖市)的流感网络实验室,考核时间为1个月。 本次考核内容为鉴定10份盲样的型别及亚型。,6,考核标本的设计,考核标本共10份盲样,均为病毒裂解液。分别为禽流感H5N1标本4份,H9N2标本1份,H3N2和B型混合标本1份,H1N1标本1份,B型标本1份,阴性标本2份,病毒浓度均控制在易检范围之内。
3、,H5N1标本为病毒原液10-1-10-4的梯度稀释,以此结果来判定核酸检测的灵敏度是否合格;H3N2标本混有B型,此项内容考核结果判定;阴性标本考核是否有交叉污染出现。,7,所用毒株名称: H1N1: A/Jiangsuxinghua/33/2007 H3N2: A/Jiangsuguangling/316/2007 B: By/Fujianggulou/1774/2007 H5N1:A/Xinjiang/1/2006(H5N1) H9N2: A/chicken/Foshan/48/98(H9N2),8,9,考核标本的定量结果,10,考核标本的制备,1.稳定性检测: 冰盒内室温4天。 冰盒内
4、室温4天,后-20度2周。 2.可重复性验证: 不同仪器 不同操作人 不同标本抽样,运输和结果提交情况,国家流感中心,11,考核结果,22个省份结果正确, 河北、辽宁、黑龙江、云南、贵州五省H3N2+B标本由于实验思路不同未检出B型,黑龙江未检测出H3,用AN2引物检测出N2亚型。陕西没有检出H9只检出了N2。 宁夏、贵州两省H5N1 的10-4稀释度标本未检出。 广西首次H5N1与H9N2均未检出,第二次提交全部正确。 阴性标本均无问题,没有污染情况发生。,国家流感中心,12,考核结果分析,完整的标注应当有样品名,引物名,片断大小,Marker梯度等等。,13,考核结果分析:实验结果标注不清
5、,很多省份标注不够规范。,国家流感中心,14,考核结果分析,国家流感中心,15,考核结果分析,Realtime结果应该有两个图,一个应包含阳性曲线和域值线的情况并标明所用引物和样品名称,另一个应包含机器显示的CT值。,16,我们发放的禽流感引物和人季节性流感引物在同种亚型之间是可能存在交叉的,7号其实是H3N2标本。,考核结果分析:引物交叉情况说明,H9N2的N2引物与H3N2的交叉情况,17,考核结果分析:引物交叉情况说明,甲型鉴定引物的交叉情况,18,考核结果分析:鉴定的思路,国家流感中心,19,考核结果分析:鉴定的思路,国家流感中心,20,考核结果分析:鉴定的思路,21,考核结果分析:R
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