实验1大肠杆菌的培养和分离ppt课件.ppt
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1、实验1: 大肠杆菌的培养和分离,大肠杆菌(E.coli),分布:人和哺乳动物肠道,此外还广泛分布于水、 污水、土壤、谷类、乳制品等当中。,大肠杆菌在人体的_中一般对人体无害,但任何 大肠杆菌如果进入_都会对人体产生危害。 大肠杆菌是_工程中被广泛采用的工具。,肠道,泌尿系统,基因,革兰氏_(填阴或阳)性菌,阴,代谢类型:,异养,兼性厌氧型,生长适宜温度:,质粒、,EcoR限制酶、,E.coli-DNA连接酶、,受体细胞,37左右,易培养、生活周期短等特点。,细菌的代谢类型,自养型细菌 异养型细菌:,光合自养型: 化能自养型:,大部分腐生菌和寄生菌,如蓝细菌,如硝化细菌,1、同化作用类型,2、异
2、化作用类型,需氧型细菌 厌氧型细菌 兼性厌氧型细菌,大多数细菌,如破伤风杆菌,如酵母菌、大肠杆菌。,大肠杆菌属于异养、兼性厌氧型细菌,大肠杆菌,酵母菌,放线菌,霉菌,菌落:单个或少数细菌在固体培养基上大量生长繁殖时,所形成的肉眼可见的具有一定形态结构的子细胞群体。,不同微生物形成的菌落具有不同 的特征,是鉴定菌种的重要依据。 如菌落的大小、形状、边缘、光泽度、颜色、透明度等。,菌落的概念,白色或乳白色,光滑,大肠杆菌菌落:,二、 培养基,不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方,3、调节pH,1、培养基的种类,2、成分,水、碳源、氮源、 无机盐、生长因子,(生长因子即细菌生长必需,而自身不能合
3、成的 化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶),真菌:56 细菌:6.5 7.5,4、有时会加一定量的氯化钠以维持一定的渗透压,(固体、半固体、液体),1.无菌操作的概念,无菌操作泛指在培养微生物的操作中,所有防止_污染的方法。,三、无菌操作,_必须无菌、 _也必须要无菌、 _时不能带入其他杂菌,主要包括:,杂菌,2.消毒与灭菌的概念及两者的区别,消毒:使用较温和理化因素,仅杀死物体表面或内 部的一部分对人体有害的微生物的过程。不能杀死 芽孢和孢子。,灭菌:使用强烈的理化因素消灭物体内外所有微生 物,包括芽孢和孢子。,各种器具,培养基,转移菌种,高压蒸汽灭菌 洒精灯灼烧灭菌 干热灭菌,灭菌方
4、法:,煮沸消毒法 巴氏消毒法 化学药剂消毒法(酒精、氯气等) 紫外线消毒法,消毒方法:,3、常用的灭菌和消毒的方法,培养基、无菌水、 各种耐高温的玻璃金属器具,需要保持干燥 耐高温的玻璃金属器皿,接种环等金属器具,高压蒸汽灭菌锅 1kg/cm2 、121 下维持15min.,请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。 如果需要,请选择合适的方法。 (1) 培养细菌用的培养基与培养皿 (2) 玻棒、试管、烧瓶和吸管 (3) 实验操作者的双手,答:(1)、(2)需要灭菌;(3)需要消毒。,(一)制备LB培养基(通用的细菌培养基),1、配方:蛋白胨0.5克,酵母提取物0.25克, 氯化钠0.5克,水
5、50ml (配固体培养基再加琼脂1克),溶解,计算称量,调pH,分装,加塞,包扎,2、流程,四 、 操作步骤,灭菌,倒平板,分装:注意不要使培养基沾在管口或瓶口上,因此在将培养基转移到三角瓶或试管中时必须用_。 加塞:试管用塑料盖或_;三角瓶口用_或_封口,再用_或报纸封口。 包扎:用_或报纸,三角漏斗,棉花塞,封口膜,6层纱布,牛皮纸,牛皮纸,高压蒸气灭菌法,灭菌,1)加水:,2)装锅:,向外层锅内加入适量的水,加水的要求是_.,物品放置的要求_:,加盖:将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的_内。 再以_方式同时旋紧相对的两个螺栓,使螺 栓松紧一致,勿使漏气。,不触及内胆,整齐、稳定、留出空隙,
6、排气槽,两两对称,3)加热排气:,4)保温保压:,5)出锅:,打开排气阀,使水沸腾以排除锅内的 _。_后,关上排气阀。,当锅内压力升到_kg/cm2时,控制 热源,维持压力至_min。,切断电源,让灭菌锅内温度自然下降,当压 力降至_时,打开_,旋松螺栓,打开 盖子,取出灭菌物品。,冷空气,待冷空气完全排尽,0,1,15,排气阀,否则会因锅内压力较高,打开气阀后造成的压力差 可能使容器内的培养基喷溅造成棉塞沾染培养基而 发生污染,甚至使容器爆炸。,灭菌后,通常将实验用具放入6080 _ 中烘干,以除去灭菌时的水分,避免引起_。,烘箱,污染,倒平板:待培养基冷却至_ 时,将每只培养皿倒入_ml未
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