实验1大肠杆菌的培养和分离浙科版选修一ppt课件.ppt
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1、,微生物,微生物(microorganism),结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物。 例:酵母、霉菌、细菌、放线菌、病毒和小型原生动物等等 微生物的利用: 抗生素;酒;腐乳;污水治理,历史小资料,19世纪中期,关系到法国经济命脉的酿造业曾一度遭受毁灭性的打击。在生产过程中,出现了葡萄酒变酸、变味的怪事。经过一番研究,法国科学家巴斯德发现,导致生产失败的根源在于发酵物中混入了杂菌。,保持培养物纯净,保证无杂菌污染很重要!,大肠杆菌的培养与分离,一、大肠杆菌(E. coli),兼性厌氧的肠道内的共生菌群 合成维生素B和维生素K,供机体利用;产生大肠杆菌素,抑制肠道致病菌和腐
2、生菌滋生。 革兰氏阴性菌,作为一种工程菌, 在基因工程技术中被广泛采用。 例:大规模生产治疗糖尿病的药物胰岛素,培养基(culture media),按照微生物对营养物质的不同需求,配制出的供其生长繁殖的营养基质。 提供微生物生长的条件: 合适的温度:25-37 合适的pH:细菌 6.5-7.5 中性偏碱 真菌 5.0-6.0 中性偏酸 营养成分:含有碳源、氮源、生长因子、水和无机盐。,关微生物营养物质的叙述中,正确的是 A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量,D,LB培养基的配方,固体培养基的配制:每50ml 液体培
3、养基添加1g 琼脂,琼脂?,红藻中提取的多糖,在98 以上熔化,44 以下凝固,常温下凝结成有弹性的凝胶。,凝固剂,培养基种类,培养基(培养液)是由人工方法配制而成的,专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。,(1)按物理状态分:固体培养基和液体培养基、半固体培养基。 (2)按功能分:选择培养基和鉴别培养基。 (3)按成分分:天然培养基和合成培养基。,1.培养基的类型,固体培养基:菌落,液体培养基:,表面生长,均匀混浊生长,沉淀生长,半固体培养基:,无动力 有动力(弥散),4.培养基的用途,液体培养基:增菌、工业生产 固体培养基:纯化(分离),鉴定、活菌计数、保藏菌种 半固体培养基:动力检测,培养
4、基的分类,液体培养基 半固体培养基 固体培养基 选择培养基(抑制不需要的微生物生长) 酵母菌、霉菌青霉素 金黄色葡萄球菌高浓度食盐 鉴别培养基 大肠杆菌伊红-美蓝培养基,物理性质,培养基用途,下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是 A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌 C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前,B,一、无菌技术,1.无菌技术的概念,无菌操作泛指在培养微生物的操作中,所有防止杂菌污染的方法。,1)无菌操作:各种器皿必需是无菌的 各种培养基必需是无菌的 接种时不能带入其他杂菌,()消毒: 指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物。(不包括芽孢和
5、孢子),2.消毒与灭菌的概念及两者的区别,(2)灭菌: 以物理或化学方法消灭所有微生物,包括所有细菌的繁殖体,芽孢等,而达到完全无菌的过程。,(3)消毒的方法,1、100煮沸5-6min 2、巴氏消毒法: 70-75 下煮30min或 80 下煮15min。适用于如牛奶、啤酒、果酒、酱油等不宜进行高温灭菌的液体 3、用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒 4、氯气消毒水源 5、紫外线消毒:如接种室空气 ,(4)常用灭菌的方法:,1、灼烧灭菌,2、干热灭菌:160-170 下加热1-2h。,3、高压蒸汽灭菌:100kPa、121 下维持15-30min.,4、不能加热灭菌的化合物,如尿素(加热会分
6、解):G6玻璃砂漏斗过滤(G6孔径最小,细菌不能滤过),接种环,1.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要,请选择合适的方法。 (1) 培养细菌用的培养基与培养皿 (2) 玻棒、试管、烧瓶和吸管 (3) 实验操作者的双手,答:(1)、(2)需要灭菌;(3)需要消毒。,思考题,灭菌锅,检查水位 设定高压温度及时间,121 20min 放入待灭菌物品 加热, 并打开放气阀排冷空气 关闭放气阀继续升温升压 待温度降低至80以下开盖,取出物品烘干,无菌技术操作要点,1、实验操作空间,操作者的衣着和手 2、微生物培养的器皿用具和培养基等 3、为避免周围环境中的微生物的污染,实验操作应在 进行
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