湖南省新田县高三生物二轮复习专题8第2讲微生物的培养与应用学案20170817190.doc
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1、第2讲 微生物的培养与应用考点一 微生物的实验室培养一、基础知识1、培养基(1)营养组成:一般都含有 碳源 、 氮源 、 水 和 无机盐 。 (2)种类:按物理状态分有 固体 培养基(琼脂的作用:作 凝固剂 )和 液体 培养基; 按功能或用途分有 选择 培养基和 鉴别 培养基。(3)培养乳酸杆菌时需要添加 维生素 ,培养霉菌时需要将培养基pH调为 酸性 ; 培养细菌时需要将pH调为 中性或微碱性 ,培养厌氧微生物时则需要提供 无氧 条件。2、无菌技术:(1)无菌技术的目的是 获得纯净培养物 ,此外还可以防止 感染实验操作者 。 获得纯净培养物的关键是 防止外来杂菌的入侵 ;使用后的培养基丢弃前
2、一定要 灭菌 处理。(2)无菌技术主要通过 消毒 和 灭菌 来避免杂菌的污染。 常用的消毒方法有:煮沸消毒、巴氏消毒、紫外线消毒、化学药剂消毒 。 灭菌的方法:(1)接种环、接种针等接种用具用 灼烧 灭菌,所用器具是 酒精灯 ; (2)玻璃器皿、金属用具可使用 干热 灭菌法,所用器械是 干热灭菌箱 ; (3)培养基、无菌水等使用 高压蒸汽 灭菌法,所用器械是 高压蒸汽灭菌锅 ;二、大肠杆菌的纯化培养:可分成 制备培养基 和 纯化大肠杆菌 两个阶段。1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基(1)操作步骤: 计算 称量 溶化 灭菌 倒平板 。 思考1在称量操作中,动作要迅速,主要是为了防止 防止牛肉膏吸收空
3、气中水分 。 思考2溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是防止 琼脂糊底而导致烧杯破裂 。(2)倒平板操作:待培养基冷却至 50 左右时在 酒精灯火焰 附近进行操作。2、纯化大肠杆菌 接种微生物常用的方法有 平板划线法 和 稀释涂布平板法,接种工具分别是 接种环 和 涂布器。接种前接种工具都应先 燃烧 灭菌,且待冷却后才接种操作的目的是 以免温度太高,杀死菌种 。 整个接种过程都应在 酒精灯火焰 附近进行。三、菌种保藏的方法1、临时保藏法:放在 4 的冰箱中保藏,主要用于 频繁使用 的菌种。2、甘油管藏法:放在 -20 的冷冻箱中保存,主要用于 长期使用 的菌种。四、简答题思考3平板冷凝后,要
4、将平板倒置的作用是 既可以使培养基表面的水分更好地挥发,又可以防 止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染 。思考4每次划线之前都要灼烧接种环的目的是 杀死上次划线后接种环上残留的菌种,使下一次 划线的菌种只来源于上次划线的末端 。思考5划线操作结束时仍需灼烧接种环的目的是 避免接种环上的细菌污染环境和感染操作者 。思考6从第二次划线操作开始,总是从上一次划线的末端开始划线的目的是 使细菌的数目随着 划线次数的增加而逐步减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落 。考点二 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、基础知识:1、尿素细菌能合成脲酶 将尿素CO(NH2)2分解为CO2和 NH3 。2、筛选微生
5、物的原理:人为提供有利于 目的菌株 生长的条件,同时 抑制或阻止 其他微生物生长。 例如:培养基中不加入有机物可以筛选 自养型 微生物; 培养基中不加入氮元素,可以筛 选 固氮 的微生物; 加入高浓度的食盐可筛选出 耐盐 的金黄色葡萄球菌。3、统计菌落数目常用方法是 稀释涂布平板法 。【此外还可用 显微镜直接计数 方法测定】 这种方法统计的菌落数往往活菌的实际数目 低 。为了保证结果准确,选择菌落数在 30300 的平板进行计数,且每个稀释浓度涂布 3 个平板,再取平均值。4、排除培养基是否被污染的方法:相同条件下培养没有接种微生物的空白培养基看是否有菌落生成。二、实验设计1、土壤取样时一般要
6、先铲去 表层土 ,取样用的器具使用前都需要 灭菌 。2、样品的稀释:不同微生物的稀释倍数 不同 。3、微生物的培养与观察:放在 恒温箱 中培养,选取菌落数目 稳定 时的记录作为结果。4、鉴定:在以尿素为唯一氮源的培养基中加酚红 指示剂变 红 色。 统计细菌数目的其它方法: 滤膜法 ,将大肠杆菌接种到 伊红美蓝 培养基中菌落呈 黑 色。考点三 分解纤维素微生物的分离一、基础知识: 1、纤维素酶是一种 复合酶 ,它至少包括三种组分:C1酶、CX酶 和 葡萄糖苷酶 。2、纤维素分解菌的筛选(1)方法: 刚果红 染色法。(2)原理:刚果红(CR)可以与纤维素形成 红色复合物 ,但并不与被 纤维素酶 分
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