岛津LC-10AT型HPLC操作规程2.ppt
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1、1,第一节 岛津LC-10AT型HPLC操作规程,2,目的:规范岛津LC-10AT型高效液相色谱仪的使用。 范围:适用于岛津LC-10AT型高效液相色谱仪的使用。 职责:操作员对本规程的实施负责。,3,一、 系统组成,本系统由1个LC-10ATvp溶剂输送泵、Rheodyne 7725i手动进样阀、SPD-10Avp紫外-可见检测器、N2000色谱数据工作站和电脑等组成,另外还包括打印机。,4,二、 准备,1 、准备所需的流动相,用合适的0.45m滤膜过滤,超声脱气20min。 2 、根据待检样品的需要更换合适的色谱柱(注意方向)和定量环。 3、 配制样品和标准溶液,用合适的0.45m滤膜过滤
2、。(注意腐蚀性与有机系的的溶剂) 4 、检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。,5,接通电源,依次开启不间断电源、 泵、检测器,待泵和检测器自检结束后,打开打印机、电脑显示器、主机,最后打开色谱工作站。,三、 开机,6,四、 参数设定,1、 波长设定:在检测器显示初始屏幕时,按func键1次,波长数字键闪动,输入所需波长值,按Enter键确认。按CE键退出到初始屏幕。 2 、流速设定:在泵显示初始屏幕时,按func键,用数字键输入所需的流速(流速一般为超过1ml/min),按Enter键确认。按CE键退出,7,五、 更换流动相并排气泡,1: 将管路的吸滤器放入装有准备好的流动相
3、的储液瓶中; 2 :逆时针转动泵的排液阀180,打开排液阀; 3 :按泵的purge键,pump指示灯亮,泵大约以9.9ml/min的高流速冲洗,3min(可设定)后自动停止,一般视管路无气泡即可。 4 :将排液阀顺时针旋转到底,关闭排液阀。 5 :如管路中仍有气泡,则重复以上操作直至气泡排尽。 6 :如按以上方法不能排尽气泡,从柱入口处拆下连接管,放入废液瓶中,设流速为5ml/min,按pump键,冲洗3min后再按pump键停泵,重新接上柱并将流速重设为规定值。,8,六、 平衡系统,1、查看基线: 1.1:按N2000色谱数据工作站操作规程打开“在线色谱工作站”软件, 1.2:输入实验信息
4、并设定各项方法参数后, 1.3:按下“数据收集”页的 按钮。,9,六、 平衡系统,2 、 2.1 :按泵的pump键,泵启动,pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统,一般最少需6倍柱体积的流动相。 2.2 :检查各管路连接处是否漏液,如漏液应予以排除。 2.3 :观察泵控制屏幕上的压力值,压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡,按检查管路后再操作。 2.4 :观察基线变化。如果冲洗至基线漂移0.01mV/min,噪声为0.001mV时,可认为系统已达到平衡状态,可以进样。,10,七、 进样,1 、进样前按检测器zero键调零,按软件中 零点校正 按钮校正基线零
5、点,再按一下 查看基线 按钮使其弹起。 2 、用试样溶液清洗注射器,并排除气泡后抽取适量即可以进样了。 3、含量测定的对照溶液和样品供试溶液每份至少进样2次 。,11,八、 谱图的判断 及结果计算,系统适用性实验:三个重要指标 分离度(加强):一般应1.5。 重复性:两次谱图的峰面积应相差不超过1%。 理论塔板数:应规定的理论塔板数目。 拖尾因子:0.95T1.05 保留时间:对照与样品的主成分保留时间应大致一致。 RSD: 3%,12,八、 谱图的判断 及结果计算,1、内标法 用含对照品和内标物质的对照溶液所得色谱峰响应值,按下式算出校正因子(f): 其中 As和Ar分别为内标物质和对照品的
6、峰面积或峰高,ms和mr分别为加入内标物质和对照品的量。,13,八、 谱图的判断 及结果计算,2、外标法: 用含对照品的对照溶液所得色谱峰响应值,按下式计算比值(r):r=mr/Ar(其中 mr和Ar分别为对照品的量和相应的峰面积或峰高。 ) 再根据供试品溶液的色谱峰响应值,计算供试品中被测成分的含量(mi):mi=rAi(其中 Ai为供试品溶液中被测成分的峰面积或峰高)。 必要时,再根据稀释倍数、取样量和标示量折算成标示量的百分含量,或根据稀释倍数、取样量折算成百分含量。,14,九、 清洗管路及进样口,1、分析完毕后,先关检测器和数据处理机,再用经滤过和脱气的适当溶剂清洗色谱系统,正相柱一般
7、用正已烷,反相柱如使用过含盐流动相,则先用水,然后用甲醇-水冲洗,冲洗前先按(4.1.14.1.2)操作,再用分析流速冲洗,各种冲洗剂一般冲洗1530分钟,特殊情况应延长冲洗时间;并且用水冲洗密封圈三次。,15,九、 清洗管路及进样口,2、 冲洗完毕后,逐步降低流速至0,关泵,进样器也应用相应溶剂冲洗,可使用进样阀所附专用冲洗接头。 3 、关断电源,作好使用登记,内容包括日期、检品、色谱柱、流动相、柱压,使用小时数,仪器完好状态等。,16,【特殊情况】:谱流路系统,从泵、进样器、色谱柱、到检测器通池,在分析完毕后,均应按(5.1)充分冲洗,特别是用过含盐流动相的,更应注意先用水,再用甲醇-水,
8、充分冲洗。,九、 清洗管路及进样口,17,谢谢大家!,18,第二节 岛津LC-10AT型HPLC注意事项,19,一、 流动相,1、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水,酸碱液及缓冲液需经过滤后使用,过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围; 2、水相流动相需经常更换(一般不超过2天),防止长菌变质;,20,二、样品,1、采用过滤或离心方法处理样品,确保样品中不含固体颗粒; 2、用流动相或比流动相弱(若为反相柱,则极性比流动相大;若为正相柱,则极性比流动相小)的溶剂制备样品溶液,尽量用流动相制备样品液; 3、手动进样时,进样量尽量小,使用定量管定量时,进样体积应为定量管的35倍;,21,三、色谱
9、柱,1、 使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书,注意适用范围,如pH值范围、流动相类型等; 2、 使用符合要求的流动相; 3、 使用保护柱; 4、 如所用流动相为含盐流动相,反相色谱柱使用后,先用水或低浓度甲醇水(如5甲醇水溶液),再用甲醇冲洗。,22,三、 色谱柱,5、 色谱柱在不使用时,应用甲醇冲洗,取下后紧密封闭两端保存; 6、 不要高压冲洗柱子; 7、 不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱; 使用过程中注意轻拿轻放。,23,四、操作过程,1、 开机操作: (1)、打开电源,用Harb相连接时,注意Harb电源,打开计算机,打开Bootp Server(一般启动时已打开); ( 2 )、自
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