结核病实验室检测新诊断技术2011416.ppt
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1、结核病实验室检测 新诊断技术介绍 省结核病参比实验室 杨丹丹,发光二极管荧光显微镜(LED)方法 液基夹层杯技术 线性探针耐多药检测技术(HAIN) 基因芯片耐多药检测技术(GENECHIP) TB和利福平耐药快速分子鉴定(X-Pert),一、发光二极管荧光显微镜(LED)方法,适用范围:痰涂片镜检 所需试剂/仪器: LED显微镜、荧光染色液 中盖项目:淮安市(淮阴区、楚州区) 原理:,发光二极管荧光显微镜(LED),镜下视野,发光二极管荧光显微镜(LED),不需要加热玻片,步骤简单 视野比普通的显微镜大大2-4倍 对数目少的不必使用镜油 节省人力时间,时间为普通的1/4每天可检查至少60个涂
2、片 可帮助早期诊断肺结核 即使菌浓度较低 杆菌也有很高的灵敏度,与ZN相比阳性发现率平均增加10%,不需要空调设施 不需要暗室 诊断性能优于标准荧光显微镜 寿命长( 15-20,000小时) 荧光染色液有致癌作用,推荐自动染色机。 涂片需避光低温保存。 需加强操作人员的培训和质量控制。 成本低廉,价格低于现有的光学显微镜。 适合县、乡级基层实验室使用。,二、液基夹层杯技术,适用范围:痰涂片镜检 十一五国家重大科技专项:泰兴、江阴 厂家:湖南天骑公司 原理:集菌法,流程图 痰标本消化灭活 基片的夹层杯 离心 细菌附着在基片 在夹层杯中直接染色 取出基片 于载玻片上 镜检 自动阅片计算机报告系统。
3、 所需仪器设备:普通的抗酸染色液、彭氏杯(专利)、涂片机、KP21型快速干片机、抗酸杆菌自动阅片计算机报告系统。,重大专项:泰兴、江阴地区部分实验结果比较,三、线性探针耐多药检测方法(HAIN),适用范围: 1、TB的诊断 2、一线抗结核药物耐药诊断 3、二线抗结核药物耐药的诊断 4、目前,利福平(rpoB基因) 、异烟肼(Kat基因、inhA基因)耐药的诊断 所需仪器设备:生安柜、超声振荡仪、PCR扩增仪、可调温振荡仪,原理:基于分子生物学扩增技术。 rpoB基因突变位点有:4个 Kat基因、inhA基因突变位点有:2个、4个,正确流程,杂交,DNA提取,MIX制备,痰液前处理,操作步骤,一
4、、痰标本处理 去污染前处理液:氢氧化钠+柠檬酸三钠+N-乙酰半胱氨酸。 痰标本+等体积去污染前处理液:振荡-离心-静置-PBS清洗-离心-留取沉淀。 二、DNA提取 处理后痰标本沉淀 : 95C孵育-超声裂解-取上清液用于PCR扩增。 三、扩增产物杂交 PCR产物变性,与探针试条上的标记突变位点杂交,标记物显色。,四、结果判读,试剂质控,位点质控,HAIN和目前常规药敏方法比较,适用范围: 1、TB复合群鉴定。 2、TB菌种鉴定。 3、利福平和异烟肼耐药检测 。 原理:多重PCR扩增和反向杂交来识别。,四、GENECHIP基因芯片耐多药检测技术,基因芯片,将核酸片段有序地固化于支持物(如玻片、
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