项目五TLC技术.ppt
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1、项目 五 薄 层 色 谱 法 TLC Thin Layer Chromatography,科学家在研究植物叶子的色素成分时,将植 物叶子的萃取物倒入填有碳酸钙的直立玻璃管内,然后加入石油醚使其自由流下,结果色素中各组分互相分离形成各种不同颜色的谱带。按光谱的命名方式,这种方法因此得名为色谱法。,一、色谱,在色谱法中,静止不动的一相(固体或液体)称为固定相(stationary phase) ;运动的一相(一般是气体或液体)称为流动相(mobile phase).,二、薄层色谱构成,1、固定相 硅胶为使用最广泛的薄层材料 氧化铝有碱性、中性、酸性 硅藻土为化学中性吸附剂 纤维素天然多糖类 聚酰胺
2、为特殊类型有机薄层材料,对能形成氢键的物质有特别的选择性。,2、载板玻璃板 放在饱和碳酸钠溶液中浸泡数小时,除去玻璃表面的油污。然后充分漂洗干净,干燥,置干燥器中备用。要求光滑、平整、洗净后不附水珠。,3、黏结剂 无机黏结剂石膏(硫酸钙),添加石膏的吸附剂以字母“G”表示。没有黏结剂的吸附剂以字母“H”表示。 有机黏结剂羧甲基纤维素钠(CMC)、淀粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。其特点是薄层强度高、使用方便,但不能用浓硫酸作显色剂。,4、荧光黏结剂 在吸附剂中添加某种荧光指示剂,常用的荧光指示剂 在254nm紫外光下发蓝色荧光的有钠荧光素、硫化镉、阴极绿等。 在366nm有荧光的指示剂如彩蓝等。
3、 含有荧光指示剂的商品吸附剂以“F”表示,并以下标注明其激发光波长。例 硅胶HF254,薄层板活化(可直接用商品TLC,不需活化) 涂布后的薄层先在室温下晒干,在使用前置适当温度烘烤一定时间进行活化,然后置干燥器中备用。不同薄层活化条件略有不同,如: 硅胶 110 1h 氧化铝 110 30min,三 、TLC操作步骤,制样 选择溶剂,并加热溶解少量样品(约0.01g即可) 要求选择溶解样品的溶剂有高度挥发性和尽可能非极性,否则易使斑点扩展。,点样 用酒精灯拉细的毛细管蘸取少量样品溶液点在硅胶板上, 样品点应尽可能小。 点样量应适中,过浓会引起斑点拖尾,分离度变差,以最小检测量的几倍几十倍为宜
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