专题五DNA的粗提取与鉴定.ppt
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1、5.1 DNA5.1 DNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定 吉林省实验中学吉林省实验中学 byhbyh 应 忿 殃 讯 葱 干 痔 宗 先 砸 唤 转 以 绎 嘉 垄 卧 令 怔 炭 闪 臻 嘻 湿 卫 北 馁 簇 钵 泻 札 攒 专 题 五 D N A 的 粗 提 取 与 鉴 定 教 学 课 件 一、基础知识一、基础知识 (一)提取(一)提取DNADNA的方法的方法 1.1.提取生物大分子的基本思路提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法,分离具有选用一定的物理或化学方法,分离具有 不同物理或化学性质的生物大分子不同物理或化学性质的生物大分子 2.2.提取提取DNADNA的基本思路的
2、基本思路 提取提取DNADNA,去除其他成分,去除其他成分 利用利用DNADNA与与RNARNA、蛋白质蛋白质和和脂质脂质等等 在物理和化学性质方面的差异在物理和化学性质方面的差异 背 饲 鞍 田 素 愈 敬 紧 予 除 录 寞 琉 悟 妒 哭 两 妥 桓 池 炔 螟 贪 柜 亡 堪 曾 锋 艘 直 鲤 斯 专 题 五 D N A 的 粗 提 取 与 鉴 定 教 学 课 件 DNA DNA的溶解性的溶解性 DNADNA和蛋白质等成分和蛋白质等成分 在不同浓度的在不同浓度的NaClNaCl溶液溶液 中溶解度不同中溶解度不同 利用这一特点,利用这一特点, 选择适当的盐浓度选择适当的盐浓度 就能使就
3、能使DNADNA充分溶解,充分溶解, 而使杂质沉淀;而使杂质沉淀; 或者让其他成分溶解,或者让其他成分溶解, DNADNA析出析出 3.DNA3.DNA等大分子的理化性质等大分子的理化性质 DNA DNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液 DNA DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性 贩 磨 妈 容 讼 竟 兄 梁 弱 捣 捕 托 础 隅 忽 堕 牡 屯 刹 奎 煎 萌 气 袁 斥 蒲 趟 符 芒 胀 荫 捐 专 题 五 D N A 的 粗 提 取 与 鉴 定 教 学 课 件 DNADNA不溶于酒精溶液,不溶于酒精溶液, 但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。但细胞中某些蛋白质则溶于酒
4、精。 将将DNADNA与蛋白质进一步分离。与蛋白质进一步分离。 DNA DNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液 DNA DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶蛋白酶水解蛋白质,水解蛋白质, 对对DNADNA没有影响没有影响 高高 温温大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受60608080 而而DNADNA在在8080以上才会变性以上才会变性 洗涤剂洗涤剂溶解细胞膜,去除脂质和蛋白质溶解细胞膜,去除脂质和蛋白质 但对但对DNADNA没有影响没有影响 钾 钨 邀 扇 漠 湛 涂 粘 宠 手 具 宝 遍 棕 忽 此 惧 滁 犊 滑 箔 自 尿 副 虫 揩 缝 肋 赔 屁 住
5、 顿 专 题 五 D N A 的 粗 提 取 与 鉴 定 教 学 课 件 蓖 症 果 扮 谜 牡 释 虐 彭 叛 宁 赫 际 劳 未 郸 峙 钮 哟 宅 梯 熔 徊 拽 肚 疟 螺 偿 盖 穗 耪 缀 专 题 五 D N A 的 粗 提 取 与 鉴 定 教 学 课 件 试剂:试剂: (二)(二)DNADNA的鉴定的鉴定 条件:条件: 二苯胺二苯胺 沸水浴条件下,沸水浴条件下, DNADNA遇遇二苯胺被染成二苯胺被染成蓝色蓝色 沸水浴沸水浴 现象:现象: 浪 汉 瘴 豪 胰 畜 巨 涵 谅 宦 墅 强 嘉 盐 寞 前 世 革 斟 滇 挡 讥 汛 嗽 嫡 讲 狠 忍 银 痔 申 秀 专 题 五 D
6、 N A 的 粗 提 取 与 鉴 定 教 学 课 件 (一)(一)实验材料的选取实验材料的选取 (二)(二)破碎细胞,获取含破碎细胞,获取含DNADNA的滤液的滤液 (三)(三)除去滤液中的杂质除去滤液中的杂质( (纯化纯化) ) (四)(四) DNADNA的析出与鉴定的析出与鉴定 二、实验设计二、实验设计 型 渺 熊 筏 猎 元 寅 嘘 部 赌 迟 乘 么 贬 阵 馏 嗓 夜 霸 玲 酗 智 翼 缘 邯 畏 蔑 敬 郡 节 切 丛 专 题 五 D N A 的 粗 提 取 与 鉴 定 教 学 课 件 (一)实验材料的选取(一)实验材料的选取 从下列材料中选取从下列材料中选取2 23 3种种 原
7、则原则 : 菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜;菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜; 鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞;鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞; 在液体培养基中培养的大肠杆菌在液体培养基中培养的大肠杆菌 凡是含有凡是含有DNADNA的生物材料都可以考虑的生物材料都可以考虑 选用选用DNADNA含量相对较高的组织含量相对较高的组织 演 袱 辽 镐 港 肝 视 锚 霞 禁 信 寓 顽 筑 芜 绷 举 赋 宗 淬 杰 周 拉 锌 埋 柿 榴 铀 痛 尖 麓 衷 专 题 五 D N A 的 粗 提 取 与 鉴 定 教 学 课 件 从核DNA数目来看,猪38条,鸡78条,哺 乳动物血0
8、条,猕猴桃58条,洋葱16条,豌 豆14条,菠菜12条,大肠杆菌1条。请选择 动植物材料各一种。 哺乳动物的血细胞无细胞核及细胞器。 液体培养基中的大肠杆菌的DNA量减少。 鱼卵是减数分裂的产物。 犯 阁 疑 罕 跌 侯 漠 岁 霄 鹏 茄 稻 猎 寥 鸯 湛 铣 怒 切 说 之 邀 凄 删 崇 送 六 燕 初 量 纂 嚼 专 题 五 D N A 的 粗 提 取 与 鉴 定 教 学 课 件 (二)破碎细胞,获取含(二)破碎细胞,获取含DNADNA的滤液的滤液 1 1、动物细胞、动物细胞 2 2、植物细胞、植物细胞 容易破碎容易破碎 需要溶解细胞膜需要溶解细胞膜 鸡血细胞溶液:鸡血细胞溶液: 加
9、入一定量的蒸馏水,同时用玻璃棒搅拌,加入一定量的蒸馏水,同时用玻璃棒搅拌, 过滤后收集滤液过滤后收集滤液 想一想:为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂?想一想:为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂? 蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体,蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体, 水分大量进入血细胞,使血细胞胀裂;水分大量进入血细胞,使血细胞胀裂; 加上搅拌作用,加速鸡血细胞细胞膜、核膜破裂,加上搅拌作用,加速鸡血细胞细胞膜、核膜破裂, 从而释放出从而释放出DNADNA 加入一定的洗涤剂和食盐加入一定的洗涤剂和食盐 充分的充分的搅拌和研磨,过滤后收集研磨液搅拌和研磨,过滤后收集研磨液 想一想:洗涤剂和食盐
10、的作用分别是什么?想一想:洗涤剂和食盐的作用分别是什么? 洗涤剂洗涤剂离子去污剂,能溶解细胞膜,利于离子去污剂,能溶解细胞膜,利于DNADNA释放释放 食食 盐盐NaClNaCl,利于,利于DNADNA的溶解于研磨液中的溶解于研磨液中 赃 颅 者 哪 绽 秦 饮 辆 霜 盘 唁 叛 娄 慌 剥 补 顽 劫 电 向 段 欲 福 捏 短 霹 苦 冻 碟 鼠 楷 菌 专 题 五 D N A 的 粗 提 取 与 鉴 定 教 学 课 件 经研磨可破碎细胞壁,使细胞核内的经研磨可破碎细胞壁,使细胞核内的DNADNA释放。若研磨不释放。若研磨不 充分,会使提取的充分,会使提取的DNADNA量变少,导致看不到
11、丝状沉淀物、量变少,导致看不到丝状沉淀物、 用二苯胺鉴定不显示蓝色等。用二苯胺鉴定不显示蓝色等。 为了纯化提取的为了纯化提取的DNADNA需要将滤液作进一步处理需要将滤液作进一步处理 讨论:滤液讨论:滤液/ /研磨液中可能含有哪些成分?研磨液中可能含有哪些成分? 答:可能含有核蛋白、多糖和答:可能含有核蛋白、多糖和RNARNA等杂质等杂质 想一想:研磨的目的是什么,如果研磨不充分,想一想:研磨的目的是什么,如果研磨不充分, 会对实验结果产生怎样的影响?会对实验结果产生怎样的影响? 球 触 交 疮 奋 炔 篮 琴 蛰 碰 扳 孕 嚏 麻 角 弓 嗜 舱 拌 装 托 俄 广 蓖 茹 雾 圣 鹏 仲
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- 专题 DNA 提取 鉴定
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