8-实验诊断.ppt
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1、临床病原体检测,芮勇宇 南方医科大学南方医院检验医学科,某年9月某日晚上某院急诊科来一病人,突然起病,寒战、剧烈头痛、恶心呕吐,面色潮红、眼结膜充血、咳嗽,左耳红肿热痛,体温40。,案例分析,医生及时抽血进行血液培养,血常规白细胞增高及核左移。 初步诊断败血症,收入院,使用泰能。 但是使用泰能3天,病人症状没有改善,血液培养阴性,给家属下病危通知书。,案例分析,请南方医院专家会诊,详细询问病史和仔细体查,得到重要线索,病人一周前爬过白云山,并躺在草地上休息;病人左耳有似被蚊虫叮咬后形成焦痂。,案例分析,怀疑恙虫病,外裴试验阳性。恙虫病立克次对头孢菌素类耐药,用四环素类抗生素,1天后退热,继续用
2、药1周,病人康复出院。 病原体检测重要性:明确临床诊断和指导临床用药。,案例分析,免疫室:酶链免疫吸附试验(ELISA)、胶体金层析试纸条、化学发光或电化学发光、乳胶凝集方法。 检测肝炎病毒、性病、呼吸系统病原体抗原或抗体。,检验科三个实验室合作进行病原体检查,基因室:荧光定量PCR方法,定量检测病原体基因。 细菌室(重点):涂片检查、培养鉴定和药敏试验,检测细菌真菌。,检验科三个实验室合作进行病原体检查,第一部分 细菌真菌涂片检查及临床意义 第二部分 细菌真菌培养鉴定及临床意义 第三部分 细菌真菌药敏检测及临床意义 第四部分 临床各科科研工作结合本次课,Part 1 Morphologica
3、l examinations of bacteria and fungi,1 non-stained. 2 gram stain, bacteria and fungi. 3 acid-fast stain, acid-fast bacillus. 4 Indian ink stain, cryptococcus.,single-celled, budding forms called yeast (spore). multicellular, filamentous forms called mold (spore and hypha). dimorphic fungi, exist in
4、two distinct morphologic forms.,1 Non-stained,Skin scraping, nail scraping ,and observation of hairs directly by microscopy are also most helpful in diagnosing dermatophytic infections. Employing a drop of potassium hydroxide (15%) on a glass slide over the surface of the specimen.,hairs,Skin scrapi
5、ng,Routine urine examination,Basic principle? Procedure? Peptidoglycan. crystal violet, iodine, alcohol. carbofuchsin red. Results, G+ or G-, cocci or bacilli bacteria, fungi, in oil immersion field.,2 Gram-stained,fungi in urine,positive cultured blood,positive cultured blood,positive cultured bloo
6、d,positive cultured blood,positive cultured blood,positive cultured blood,sputum,sputum,sputum,sputum,sputum,Fungi in leukorrhea, vaginitis,Diplococcus Neisseria gonorrhoeae,Basic principle? Procedure? Lipid. carbolfuchsin red, hydrochloric acid 3% alcohol, methylene blue. Results, acid-fast bacteri
7、a red, other bacteria and background blue.,3 acid-fast stain,The result report mode Negative, acid-fast bacilli not found, Positive (1 or 2), 1 or 2 whole visual field, Positive (+), 3 to 9 whole visual field, Positive (+), 10 to 99 whole visual field, Positive (+), 1 to 9 every visual field, Positi
8、ve (+), 10 every visual field.,acid-fast bacilli from sputum(+),Cryptococcus in cerebrospinal fluid. Basic principle, capsule. Procedure, sediment. Results.,4 the Indian ink stain,Cryptococcus neoformans,germinative,Advantages. cheap, rapid, diagnose primarily. Disadvantages. Not accurate.,Part 1 Mo
9、rphological examinations of bacteria and fungi,第二部分 细菌真菌培养鉴定及临床意义,一、血液 二、中段尿 三、粪便 四、痰液 五、咽拭子 六、穿刺液 七、分泌物 八、器械,一、血液的病原体检查 Etiologic Examination of Blood and Bone Marrow,目的和意义; 采血指征; 采血注意事项; 结果报告形式。,目前我国社会老龄化日趋严重,慢性病及恶性肿瘤、器官移植、爱滋病和结核病病人不断增多,侵袭性诊疗技术广泛应用,败血症发病率不断增加。 败血症病死率30%以上;早期病原学诊断和合理抗生素治疗,明显降低败血症病死
10、率。,血液培养的送检指征:,发热38或低温10109/L,“核左移”白细胞增多; 粒细胞减少,成熟的多核白细胞90次/分;呼吸频率20次/分; 二氧化碳分压32mmHg; 昏迷;多器官衰竭。,最好在抗生素使用前采集, 若已用抗菌药须,则尽量避开血药浓度的高峰期,最好在下次用药前。,血液标本采集时间,血液标本采集时间,理想状态:在发热高峰期前半小时, 建议第一次可在病人发热初期或高峰期采集, 根据病人发热情况,在24h内再取2-3次标本, 最好每次“双套”“双瓶”,“双套”指不同采血部位,“双瓶”指树脂瓶和厌氧瓶。,血液标本采集时间,标准血培养瓶(蓝色帽): 帽子和标签纸左上方为蓝色, “Sta
11、ndard 10 Aerobic/F”, 用于成人需氧菌和真菌培养, 血液量3-10ml ,8-10ml最佳。,中和抗生素的树脂瓶(灰色帽): 帽子和标签纸左上方为灰色, “PLUS+Aerobic/F” , 血液量3-10ml ,8-10ml最佳。,厌氧瓶(黄色或橘红色帽): 帽子和标签纸左上方为黄色, “Standard Anaerobic/F”, 血液量3-7ml ,5-7ml最佳。,中和抗生素的儿童瓶(粉红色帽): 帽子和标签纸左上方为粉红色, “PEDS PLUS/F”, 血液量1-3ml。,采集标本前先开申请单,到检验科细菌室或门诊领取血培养瓶; 采血前先在培养瓶标签纸左侧空白处(
12、箭头所指处)填写抽血时间和病人科别、床号和姓名; 不要在培养瓶条形码上涂写,以免影响扫描。,将标签纸上条形码右侧部分(含数字)撕下贴于检查申请单上; 而其它标本均是将申请单上双联号码撕下贴于标本上。,注射器采血后,将血培养瓶帽子揭下,橡皮由金属皮(围脖)固定于瓶上; 将橡皮塞用70%酒精消毒,注射器针头刺穿橡皮塞将血注入培养瓶内; 橡皮塞裸露即可。,细菌室接到已采集血液的培养瓶后,立即放入自动血液培养检测仪,自动培养及实时检测。,阳性初步结果报告: 仪器阳性报警,90%以上阳性标本24h内检出; 取出阳性瓶,对血液涂片及革兰氏染色; 立即将涂片结果(G+、G-细菌,球菌或杆菌,或真菌)电话通知
13、相应科室,并在网上发出; 利用阳性血液进行K-B法药敏试验,第二天将初步药敏结果电话通知相应科室。,结果报告形式,阳性最终结果报告: 将阳性血液接种血平板培养细菌; 第二天将血平板上生长的细菌鉴定及MIC法药敏试验;第三天发鉴定及MIC法药敏结果的正式报告。 阴性结果报告: 如培养5天仍为阴性,再接种血平板培养一天,核实为阴性后再发报告。,结果报告形式,二、中段尿标本病原体检查 Etiologic Examination of Urine,目的和意义; 采集方法; 结果报告形式。,检测泌尿系统感染; 一般进行细菌和真菌培养、菌落计数和药敏; 也可离心后对沉渣进行涂片检查,革兰氏染色或抗酸染色;
14、 也可用于淋球菌培养和涂片检查。,目的和意义,最常采集中段尿,晨起第一次尿送检最佳; 先用肥皂水、或1:1000高锰酸钾水溶液冲洗女性外阴部及尿道口或男性尿道口,再用灭菌水清洗,最后用灭菌纱布檫拭;排尿弃去前段尿,留取中段尿约10ml于无菌容器内加盖送检。,采集方法,尿道病原菌可在温暖尿液中繁殖,中段尿标本采集后应尽快送检,否则将影响病原菌计数的准确性; 排尿困难者可导尿,避免多次导尿所致尿路感染,导尿包必须为无菌的合格产品。,采集方法,“培养出3种以上细菌,疑采集污染,重留标本”: 如培养出3种或以上细菌,且无优势菌;约10%的标本不合格,采集时污染,采集中段尿(尤其女性)最好由专门医护人员
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