第十二章血液分析仪器.ppt
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1、第十二章 血液分析仪器,广州医学院化学教研室,制 作: 张超 副教授 E-mail: chao-,血液分析仪器是临床实验室最常用的分析仪器,包括: 血细胞分析仪 血液凝固分析仪 血液流变学分析仪,第一节 血细胞分析仪,一、血细胞分析仪(Blood cell analyzer, BCA) 指对一定体积全血内血细胞异质性进 行自动分析的临床检验常规仪器。,又称血细胞自动计数仪(ABCC)、血液学自动分析仪(AHA)。 ABCC代表早期的低档次BCA,AHA外延过大。, 历史,手工计数 仪器简单计数 两分群 三分群 五分群 五分群网织红,20世纪40年代末, 电阻抗法微粒子计数专利 50年代, Co
2、ulter Model A型用于临床 60年代, 测定参数达7项 70年代, 全血细胞计数(CBC) 80年代, 双通道、白细胞23分群、五分群 90年代以来,多功能、多参数、流水线,二、血细胞分析仪分型,1. 按自动化程度,半自动血细胞分析仪 全自动血细胞分析仪 血细胞分析工作站 血细胞分析流水线,2. 按检测原理,电容型血细胞分析仪 光电型血细胞分析仪 激光型血细胞分析仪 电阻抗型血细胞分析仪 联合检测型血细胞分析仪 干式离心分层型血细胞分析仪 无创型 血细胞分析仪,3. 按对白细胞分类的水平,两分群血细胞分析仪 三分群血细胞分析仪 五分群血细胞分析仪 “五分群网织红” 血细胞分析仪,三、
3、电阻抗法血细胞分析仪基本原理, 电阻值R:,血细胞,电解质溶液(稀释液), 细胞通过仪器微孔时:,阻抗R ,仪器产生脉冲信号, 根据脉冲信号进行血细胞计数和体积测定。,贝克曼库尔特 ACT diff 2TM 三分类血细胞分析仪,这可要记住哦!,1.白细胞的检测,三分群细胞分析仪:,Three-part Differential BCA,2.红细胞和血小板的检测,红细胞和血小板共用一个小孔管,正常人红细胞体积和血小板体积间有一个明显界限,血小板计数准确容易,CPU对血小板和红细胞分布图进行判断,2.红细胞和血小板的检测,异常人红细胞体积和血小板体积间界限不清!,四、联合检测型血细胞分析仪的检测原
4、理,主要体现在白细胞分类,实质是选用较特异的方法将血中含量较少的嗜酸、嗜碱性粒细胞检出,发现异常细胞。 共有特点是:均使用鞘流技术。,1.容量、电导、光散射检测技术(VCS) (Volume、conductivity、light scatter),1987年 美国BECKMAN COULTER 公司发明VCS,光散射,电导性,电阻抗,体积(volume,V) 电阻抗原理测定细胞体积和数量 电导性(conductivity,C) 高频电磁探针,测量细胞内部结构,包括细胞核、细胞浆的比例及细胞内的化学成分。 光散射( scatter,S ) 细 胞内粗颗粒的光散射强 度要比细颗粒更强,2. 光散射
5、与细胞化学联合检测技术,Bayer公司生产 ADVIA 120 血细胞分析仪。 这类仪器是应用激光散射与过氧化物酶染色技术对白细胞进行分类计数。 仪器有四个通道:,血红蛋白测量通道,血红细胞/血小板测量通道,嗜碱性粒细胞测量通道,过氧化物酶测量(细胞分类)通道,高角度前向散射光:细胞核及颗粒的信息 低角度前向散射光:细胞大小的信息,结合细胞化学染色技术对白细胞进行分类计数。,染色剂:过氧化氢、1-氯-1-萘酚,胞浆固定剂:甲醛,基本原理是: 基于细胞大小、折射率、核形、核浆比值、以及颗粒性质等,均可影响不同角度下的散射光强度 不同白细胞在以上几个方面完全一致的几率很小,从而对白细胞进行分类,4
6、.电阻抗、射频与细胞化学联合检测技术,这类仪器是利用电阻抗、射频这一成熟细胞计数技术结合细胞化学技术,通过 4 个不同的检测系统对白细胞、幼稚细胞进行分类和计数。 嗜酸性粒细胞检测系统 嗜碱性粒细胞检测系统 淋巴、单核和粒细胞检测系统 幼稚细胞检测系统,Sysmex生产的NE-8000血细胞分析仪。,白细胞分类散射图,联合使用多项技术(流式、激光、射频、电导、电阻抗、细胞化学染色)同时分析一个细胞,综合分析实验数据,从而得出较为准确的白细胞“五分群”结果。,五、网织红细胞检测原理,网织红细胞中嗜碱性物质 RNA,在活体状态下与特殊的荧光染料结合。 荧光强度与 RNA 含量成正比。 用流式细胞术
7、检测 网织红细胞大小和 RNA 含量及血红蛋 白的含量,细胞与试剂反应前后的变化,反应前,反应后,血细胞分析仪网织红细胞成熟度分类,六、血红蛋白测定原理,除干式、无创型外,各型BCA对血红蛋白测定都采用光电比色原理。,血细胞悬液中加入溶血剂后,红细胞溶解释放出血红蛋白,后者与溶血剂中有关成分结合形成血红蛋白衍生物,进入血红蛋白测试系统。,特定波长(530550nm)下进行光电比色。,七、仪器基本结构,机械系统 电学系统 血细胞检测系统 血红蛋白测定系统 计算机 键盘控制系统,1.机械系统,包括机械装置(如全自动有进样针、分血器、稀释器、混匀器、定量装置等)和真空泵,以完成样本的定量吸取、稀释、
8、传送、混匀,以及将样本移入各种参数的检测区。,2. 电学系统,包括主电源、电压元器件、控温装置、自动真空泵电子控制系统,以及仪器的自动监控、故障报警和排除等。,3.血细胞检测系统,国内常用的血细胞分析仪,使用的检测技术可分为电阻抗检测技术和光散射检测技术两大类。,电阻抗检测技术:由检测器、放大器、甄别器、阈值调节器、检测计数系统和自动补偿装置组成。 流式光散射检测技术:由激光光源、检测装置和检测器、放大器、甄别器、阈值调节器、检测计数系统和自动补偿装置组成。,4.血红蛋白测定系统 由光源、透镜、滤光片、流动比色池和光电传感器等组成。 5.计算机和键盘控制系统,二、仪器的性能指标、鉴定与调校,(
9、一)血细胞分析仪的性能指标,1.测试参数 2.细胞形态学分析 3.测试速度 4.样本量 5.精密度与示值范围 6.打印,(二)血细胞分析仪的鉴定,ICSH 公布了电子血细胞分析仪的评价方案:在细胞计数、血红蛋白测定方面,要鉴定评价仪器测试样本的总变异、携带污染率、线性范围、可比性和准确性等。,出厂前已经过厂方技术鉴定合格,但由于运输振动或因故障维修后或长时间停用后再启用等原因,以及正常使用半年以上或认为有必要时,都必须对仪器进行调校及性能测试,这对了解仪器性能,发现问题,确保检验质量有重要意义。,(三)血细胞分析仪的调校,1. 安装 洁净的环境、稳定的电源、可靠的接地、适宜的温度和湿度是保证B
10、CA正常工作的前提。,三、仪器的维护与常见故障,(一)仪器的维护,2.维护 良好的工作环境是仪器正常工作的前提,精心细致的维护是仪器处于良好工作状态的保证。做好仪器的维护保养,有助于提高仪器测量的准确性,减少故障的发生,延长仪器的使用寿命。,检测器的维护 采血顺利 防止纤维丝堵孔 关机前对检测器的微孔进行清理冲洗 计数期间,及时按 “反冲”键,冲掉沉积变性的蛋白质 定期卸下检测器,用5%次氯酸钠浸泡清洗,管路的维护,机械传动部位的维护,有自我诊断功能,有故障发生时,内置电脑的错误检查功能显示出“错误信息”,并伴有报警声。,(二)常见故障,1.开机时的常见故障 2.测试过程中常见的错误信息 其中
11、检测器的微孔堵塞是影响检验结果准确性最常见的原因。根据微孔堵塞的程度,将其分为完全堵孔和不完全堵孔两种。,仪器测试原理的不断创新 白细胞分类的改进 红细胞和血小板计数原理的改进 新血细胞分析参数的出现 各种特殊技术的应用 仪器自动化水平的提高 无创型全血细胞分析仪的研究,四、血细胞分析仪的进展,克服了电阻抗法在病理情况下测定MCH、MCHC结果不准及血小板计数精确性较差的缺点,红细胞和血小板计数原理的改进,二维激光散射法测定红细胞和血小板,第二节 血液凝固分析仪,血液凝固分析仪(automated coayulation analyzer,ACA)是采用一定分析技术,对血栓与出血有关成分自动检
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