第四章色层分析法2.ppt
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1、4.5 薄层层析法及其实验技术,4.5.1 技术参数 4.5.2 理论基础 4.5.3 薄层层析固定相选择原则 4.5.4 薄层层析展开剂选择原则 4.5.5 薄层层析的实验技术 4.5.6 应用技术,提 纲,10-60min,塔板数高,0.01g,薄层层析法特点,4.5.1 技术参数,1) 比移值Rf,在薄层层析分离中,原点距展开剂前缘的距离为12cm,原点距展开斑点A.B的距离各为6cm.8cm。A.B两斑点的比移值各为多少?,RfA=6/12=0.50 RfB=8/12=0.67,一对斑点层析时移动距离的差值与两个斑点底宽和的比值的2倍。,2)分离度Rs,3) 分离数SN,a为Rf=1及
2、Rf=0两种组分斑点中心距离 W1/20为Rf=0 的组分斑点宽度的1/2 W1/2为Rf=组分斑点宽度的1/2,什么是相对比移值(Rf),他如何测定?代表了什么?为什么可以利用它来进行定性鉴定?,思考题,展开剂在薄层中的流速与展开剂的表面张力、黏度及吸附剂的种类,粒度,均匀度等因素有关,即和层析系统(包括固定相和流动相两方面)有关,但也和展开距离有关。,4.5.2 理论基础,溶剂在薄层中的流速问题,L2=k t, V=dL/dt= k/2L,1、在薄层层析过程中为什么不讨论平均塔板高度与展开剂流速间的关系,而是讨论与展开距离间的关系? 2、设用一定的层析系统进行薄层层析分离时,展开剂前缘移动
3、5cm需要5min。如果展开剂前缘移动10cm层析可以结束,需要多少时间?在展开剂前缘离原点5cm和10cm处,展开剂前缘的上升速度分别为多少?,思考题,何种层析(吸附、分配、亲和、凝胶) 被分离组分性质(极性、离子、分子 大小等) 吸附剂吸附性能强弱,4.5.3 薄层层析固定相选择原则,选择原则,常用固定相,吸附层析 展开剂对被分离组分有一定的溶解度 展开剂对被分离组分有适当的亲和力 展开剂极性一般比被分离物质的极性略小 分配层析 展开剂选择各组分溶解度相差大的溶剂,4.5.4 薄层层析展开剂选择原则,制备薄层板: 干板-软板,湿板-硬板 定性定量时薄层厚度为0.2-0.3mm 制备薄层的厚
4、度要求约为0.5-2mm,4.5.5 薄层层析的实验技术,活化 形式:硅胶G、硅胶H、硅胶GF254、 硅胶HF360 粘合剂(煅石膏:牢度差,不能用于分离无机物;羧甲基纤维素:牢度好,不能用腐蚀性显色剂;淀粉:不能用于分离有机物),硅胶,特殊薄层,混合薄层:两种不同吸附剂 酸碱薄层:稀酸或稀碱代替水 络合薄层:加入络合剂 涂布固定液的薄层: 具有浓缩区的薄层:不同粒度 高效薄层:极细均匀的吸附剂,1、层析用硅胶,有硅胶G、硅胶H、硅胶GF254、硅胶HF360等等不同标号,这些分别表示什么?应用这些硅胶时应分别注意些什么? 2、聚酰胺薄层的作用机理是什么? 3、试比较软板和硬板的优缺点。 4
5、、简述混合薄层、酸碱薄层、络合薄层、涂布固定液的薄层、具有浓缩区的薄层、高效薄层的分离原理。,思考题,点样: 溶解试样的溶剂,点液集中,点量精确,点样量适当,展开: 极性增强顺序:石油醚环己烷二硫化碳四氯化碳三氯乙烯苯甲苯二氯甲烷氯仿乙醚乙酸乙酯乙酸甲酯丙酮正丙醇乙醇甲醇吡啶酸,三角图形法,微量圆环技术,原则:先用单一溶剂,再用混合溶剂 在硅胶薄层上分离生物碱: 单一溶剂:环己烷、苯、氯仿 混合溶剂:苯-氯仿(9:1,1:1) 环己烷-氯仿-二乙胺(5:4:1) 苯-乙酸乙酯-二乙胺(7:2:1) 苯-正庚烷-氯仿-二乙胺(60:50:10:0.2) 二乙胺:改变极性,调整酸碱度,增大试样的溶
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- 第四 章色层 分析
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