红细胞检验的基本方法.ppt
《红细胞检验的基本方法.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《红细胞检验的基本方法.ppt(64页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、红细胞检验的基本方法,叶云,血液学教研室 叶云,1.来源 2.形态 3.功能,红细胞,红细胞疾病,1.缺铁性贫血,2.巨幼贫,3.溶贫,4.其他,IDA blood smear,本章 概况,1.有关铁指标、叶酸和维生素B12的检验。 2.红细胞膜缺陷、酶缺陷的检验。 3.血红蛋白异常的检验。 4.PNH的检验。 5.免疫性溶血的检验。,铁指标检验的几个概念,1.血清铁(serum iron )。 2.血清转铁蛋白(serum transferrin)。 3.血清铁蛋白(serum ferritin)。 4.血清总铁结合力(TIBC)。 5.转铁蛋白饱和度。,1.原理,一、 SI(serum i
2、ron)的测定,SF PH+还原剂 Fe2+显色剂络合物,2、参考值:,成年男性11.631.3molL 成年女性9.030.4molL,3、临床评价:,降低:见于缺铁性贫血(IDA)、慢性失血和 感染等。 增高:见于肝疾病、铁粒幼细胞贫血、慢性 溶血和反复输血等。,1、原理:,二、 SF(serum ferritin)的测定,(125I标记SF+待测血SF)+定量抗体 125I复合物1+复合物2 125I标记SF+定量抗体 125I复合物3,成人男性15200gL, 女性12150gL , 小儿低于成人;,2、参考值:,3、临床评价:,降低:见于IDA早期、失血、慢性贫血等。 增高:见于肝疾
3、病、血色病、急性感染和恶 性肿瘤等。,三、 TIBC测定,1、原理:,1.过量铁标准液+血清SF 2.SF PH+还原剂Fe2+显色剂有色络合物,TIBC:男性5077molL 女性54 77molL UIBC:25.151.9molL,2、参考值:,3、临床评价:, 增高:见于IDA和红细胞增多症等。 降低或正常:见于肝疾病、恶性肿瘤、溶 血性贫血、慢性感染和肾病综合征等。,1、原理:,当体内缺铁时,铁蛋白的利用加快,肠道对铁吸收也增加。口服放射性59Fe,测定体内59Fe 放射性量比率的变化,可推算出铁吸收率。,2、参考值:,3、临床评价:,增加:见于IDA,可高达5080。 降低:见于肠
4、道吸收不良综合征。 正常:见于正常人、再障、巨幼细胞贫血、 急性失血等。,正常值:26.035.0,四、铁吸收率测定,五、血清转铁蛋白测定,1、原理:,免疫散射比浊法:利用抗人转铁蛋白血清与 待检测的转铁蛋白结合形成抗原抗体复合物, 其光吸收和散射浊度增加,与标准曲线比较, 可计算出转铁蛋白含量。,2、参考值:,免疫散射比浊法为28.651.9molL。,增高:见于IDA和妊娠。 降低:常见于肾病综合征、肝硬化、恶性肿 瘤、炎症等。,3、临床评价:,1、原理:,六、血清转铁蛋白受体测定,双抗体夹心法。 1.血清中转铁蛋白受体+抗体 2.抗原抗体复合物+酶抗体; 3.加入底物和显色剂,其颜色的深
5、浅与转铁蛋白受体的量成正比。,2、参考值:,以不同浓度标准品的吸光度值绘制标准曲线, 通过标准曲线查出未知标本的转铁蛋白受体 水平。,3、临床评价:,升高:常见于缺铁性贫血和溶血性贫血。 降低:见于再障、慢性病贫血、肾功能衰竭等。 用于临床观察骨髓增生状况和治疗反应。,小低贫的初步诊断,1.HGB(g/L) 男性120 女性110 2.HCT 0.35 男性0.40 女性 3.RBC (1012/L) 男性4.0 女性3.5 4.MCV(fl) 80 fl=10-15L 5.MCH (pg)27 pg=10 12g 6.MCHC 0.32,血清铁指标检验的应用,小细胞低色素性贫血的鉴别 铁 总
6、铁结合力 铁饱和度 铁蛋白 缺铁贫 减低 增高 减低 减低 地贫 正常 正常 正常 正/高 慢感贫 减低 正/低 减低 增高 铁粒贫 增高 减低 增高 增高,体积不同红细胞的形态,第二节 叶酸和维生素B12 的检验,一、血清和红细胞叶酸测定,二、血清维生素B12测定,三、血清维生素B12吸收试验,四、血清内因子阻断抗体测定,1、原理:,一、血清和红细胞叶酸测定,叶酸测定(measurement of folacin)RIA, 核素+叶酸放射碘叶酸化合物。,2、参考值:,血清叶酸:成年男性8.6123.8nmolL 女性7.9320.4nmolL 红细胞叶酸:成人3401020nmolL红细胞,
7、3、临床评价:,红细胞与血清中的叶酸浓度相差几十倍,当 未发生巨幼细胞贫血时,红细胞叶酸测定对 判断叶酸缺乏尤其有价值。,叶酸减低:巨幼细胞贫血,红细胞过度增生 (如溶贫、骨髓增生性疾病等)。,1、原理:,二、血清维生素B12测定,RIA法,用抗氧化剂和氰化钾在碱性环 境下(pH12),将人血清中的维生素B12从 载体蛋白中释放出来。加入57Co 标记的维生 素B12,与固定在微晶纤维颗粒上纯化的维生 素B12结合物竞争结合,检测其放射活性,其 量与受检血清的维生素B12含量成反比,与标 准管作对照,换算出维生素B12含量。,2、参考值:,成人148660pmolL,3、临床评价:,降低:,增
8、高:,白血病患者 真性红细胞增多症 恶性肿瘤和肝细胞损伤,巨幼细胞贫血。,1、原理:,三、血清维生素B12吸收试验,给受检者口服放射性核素57Co标记的维生素 B120.5g,2小时后肌注未标记的维生素B12 1mg,收集24小时尿测定57Co排出量。,2、参考值:,正常人7,3、临床评价:,巨幼细胞贫血7 恶性贫血5,1、原理:,四、血清内因子阻断抗体测定,用57Co标记的维生素B12与血清中的内因子结 合,形成57Co标记的维生素B12内因子复合 物;当存在内因子抗体时,形成的复合物的 量减少。检测其放射活性,与阳性对照管进 行比较,可得知内因子抗体的存在。,2、参考值:,阴性:正常人,比
9、值1.000.10 阳性:比值阳性对照血清比值0.10,3、临床评价:,内因子阻断抗体阳性:多见于由维生素B12 缺乏引起的巨幼细胞贫血、恶性贫血等。,第三节 溶血的检验,一、红细胞寿命测定,二、血浆游离血红蛋白检测,四、血浆高铁血红素白蛋白检测,三、血清结合珠蛋白检测,五、尿含铁血黄素试验,六、尿卟啉检测,1、原理:,一、红细胞寿命测定,红细胞寿命测定(erythrocyte life span determination)是将放射性核素(51Cr)标记 的红细胞注入血循环后,逐日观察其消失率, 记录成活曲线,计算出红细胞寿命。,2、参考值:,半寿期为2532天,3、临床评价:,红细胞寿命缩
10、短: (1)溶血性贫血,约为14天。 (2)再生障碍性贫血,约为1529天。,溶血的检验,1.血浆(plasma):血液中除去红细胞、白细胞、血小板的无形成分,含有除钙离子外其他所有凝血因子。 2.血清(serum):血液自然凝固后分离出来的淡黄色液体,缺少某些凝血因子(、因子)。,plasma and serum,四、血浆高铁血红素白蛋白检测,高铁血红素白蛋白+硫化铵 铵血色原 用光谱仪在绿光区558nm 处有一最佳吸收区带。,2、参考值:,正常人呈阴性,血管内溶血时,血浆中游离血红蛋白大量增 加,血浆中可检测出高铁血红素白蛋白。,3、临床评价:,1、原理,1、原理,五、血清结合珠蛋白(Hp
11、)测定,1.待侧血清+Hb液Hp-Hb复合物+未结合Hb。 2.电泳分离出Hp-Hb复合物。,2、参考值:,电泳法 0.51.6g/L,3、临床评价:,1.减低:常见于各种溶血,尤其是血管内溶血。排除严重肝病及传单。 2.增高:感染、SLE、创伤、恶肿、妊娠等。,1.原理,六、尿卟啉检测,尿中卟啉类物质在酸性条件下,经乙醚提取,于405nm处显红色荧光,从而可对尿卟啉进行定性检测。,2、参考值:,正常人呈阴性,3、临床评价:,增加:先天性红细胞生成性卟啉病、迟发性皮肤型卟啉病、肝红细胞生成型卟啉病等。 对缺铁性贫血、铅中毒、铁粒幼细胞贫血和珠蛋白生成障碍性贫血等的诊断有一定价值。,1、原理:,
12、五、尿含铁血黄素试验,又称Rous试验。当血红蛋白通过肾滤过时, 部分铁离子以含铁血黄素的形式沉积于上皮 细胞,并随尿液排出。尿中含铁血黄素是不 稳定的铁蛋白聚合体,其中的高铁离子与亚 铁氰化钾作用,在酸性环境下产生普鲁士蓝 色的亚铁氰化铁沉淀。尿沉渣肾小管细胞内 外可见直径13m的蓝色颗粒。,2、参考值:,正常人呈阴性,3、临床评价:,阳性提示慢性血管内溶血,尿中有铁排出。无论有无血红蛋白尿,只要存在慢性血管内溶血如PNH,本试验结果即呈阳性,并可持续数周。 溶血初期,虽然有血红蛋白尿,此时本试验可呈阴性反应。,第四节 红细胞膜缺陷的检验,一、红细胞渗透脆性试验,二、自身溶血试验及其纠正试验
13、,三、红细胞膜三磷酸腺苷活性测定,四、酸化甘油溶血试验,五、高渗冷溶血试验,六、红细胞膜蛋白电泳分析,1.原理,一、红细胞渗透脆性试验,渗透脆性试验(osmotic fragility test)检测红细胞对不同浓度低渗盐溶液的抵抗力。红细胞在低渗盐溶液中,当水渗透其内部达一定程度时,红细胞发生膨胀破裂。,2、参考值:简易半定量法,开始溶血:75.282.1mmolL(4.44.8gL)NaCl 完全溶血:47.954.7mmolL(2.83.2gL)NaCl,3、临床评价:,脆性增加:遗传性球形红细胞增多症、椭圆形红细胞增多症和部分自身免疫性溶血性贫血。 脆性降低:珠蛋白生成障碍性贫血、血红
14、蛋白C、D、E病,低色素性贫血、肝疾病等。,1、原理:,二、自身溶血试验及其纠正试验,红细胞在37孵育48小时,其间由于膜异常 引起钠内流倾向明显增加,ATP消耗过多; 或糖酵解途径酶缺乏所引起ATP生成不足等 原因可导致溶血,称为自身溶血试验。在孵 育时,加入葡萄糖或ATP作为纠正物,观察 溶血可否有一定的纠正,称为纠正试验。,2、参考值:,正常人红细胞孵育48小时,不加纠正物的溶血 率3.5,加葡萄糖的溶血率1.0,加 ATP纠正物的溶血率0.8。,3、临床评价:,遗传性球形红细胞增多症自身溶血率增加,加入葡萄糖或ATP后明显纠正。 G6PD缺乏症等戊糖旁路代谢缺陷的病人自身溶血率增加,能
15、被葡萄糖纠正。 丙酮酸激酶缺乏症时不能利用葡萄糖产生ATP ,其自身溶血率明显增加,加葡萄糖不能纠正,加ATP可纠正。 获得性溶血性贫血或自身免疫性溶血时试验结果常各有不同,对诊断意义不大。 本试验不够敏感和特异,仅对遗传性球形红细胞增多症有较大诊断价值.,二、自身溶血试验及其纠正试验,1、原理:,三、红细胞膜三磷酸腺苷活性测定,NaKATP酶、Ca2Mg2ATP酶和Mg2ATP 酶都是红细胞膜上的ATP酶。为测定酶的活性可分别测定酶作用于ATP的水解产物无机磷含量,若在基质中只加入Ca2Mg2ATP酶可测定Ca2Mg2ATP酶的活性,若在基质中加入Na、K、Mg2和ATP,测定的为NaKAT
16、P酶和Mg2ATP酶的共同含量,再在基质中加入NaKATP酶的抑制剂,测定结果仅为Mg2ATP酶活性,两者的差为NaKATP酶活性。,2、参考值:,红细胞膜NaKATP酶:(2.930.67)mU109 红细胞Ca2Mg2ATP酶:0.42.5molL1mg 膜蛋白h1,3、临床评价:,遗传性球形红细胞增多症:NaKATP酶活性增加,Ca2Mg2ATP酶活性减低。 蚕豆病:Ca2Mg2ATP酶活性降低。 许多药物作用于红细胞时,NaKATP酶和Ca2Mg2ATP酶活性改变。,四、酸化甘油溶血试验,当甘油存在于低渗溶液氯化钠磷酸缓冲液时, 可阻止其中的水快速进入红细胞内,使溶血过 程缓慢。但甘油
17、与膜脂质又有亲和性,可使膜 脂质减少。当红细胞膜蛋白及膜脂质有缺时, 它们在pH6.85的甘油缓冲液中比正常红细胞溶 解速度快,导致红细胞悬液的吸光度降至50 的时间(AGLT50)明显缩短。,2、参考值:,正常人AGLT50290s,3、临床评价:,遗传性球形红细胞增多症AGLT50明显缩短 (25150s)。自身免疫性溶血性贫血、肾 功能衰竭、妊娠等AGLT50也可缩短。,1、原理,五、高渗冷溶血试验,在高渗状态下,温度骤然变化影响红细胞膜脂质的流动性,并可能累及膜磷脂与膜骨架蛋白结合位点,红细胞容易破裂而发生溶血。当膜蛋白缺陷致膜表面积与体积比值降低,溶血率明显增加。而膜表面积与体积比值
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 红细胞 检验 基本 方法
链接地址:https://www.31doc.com/p-2970452.html