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1、蔓荆子中黄酮类成分的含量 测定及应用前景,蔓荆子的化学成分,蔓荆子黄素的含量测定,总论:,蔓荆子的应用前景,蔓荆子概述,本品为马鞭草科植物单叶蔓荆VitextrifoliaL.var. simplicifoliaCham.或蔓荆VitextrifoliaL.的干燥成熟果实。秋季果实成熟时采收,除去杂质,晒干。,蔓荆子概述,药性:辛、苦,微寒。归膀胱、肝、胃经。,功效:疏散风热,清利头目。用于风热感冒头痛,齿龈肿痛,目赤多泪,目暗不明,头晕目眩。,用法用量:59g,生长环境: 适应性较强,对环境条件要求不严。但喜温暖湿润,土壤以疏松、肥沃的砂质壤土较好。耐盐碱,在酸性上土壤生长不良。,分布情况:
2、 主产山东、江西、浙江、福建、广东、广西等。,蔓荆子的化学成分,蔓荆子中主要化学成分为黄酮类和萜类,同时含有挥发油和有机酸等其他化学成分。现代药理研究表明,蔓荆子中的黄酮类化合物如蔓荆子黄素具有镇痛、 抗炎、 抗肿瘤的作用,中文别名:5-羟基-2-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-3,6,7-三甲氧基苯并吡喃-4-酮;紫花牡荆素,蔓荆子黄素的含量测定,1.对照品溶液的制备:精密称定蔓荆子黄素对照品 3 . 2mg ,置 10mL容量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀。精密吸取 1mL,置 10ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度。每 1mL含约30ug对照品,备用。用时, 用 0. 45um的微孔滤
3、膜过滤。 2.供试样品溶液的制备:干燥至恒重的蔓荆子药材过 40目筛, 准确称取 2g ,置具塞锥形瓶中, 准确加入甲醇 50mL, 称定质量, 加热回流 1h, 冷却, 再称重并用甲醇补足损失溶剂, 摇匀, 滤过待用。,3.色谱条件:色谱柱 HypersilODS( 4 . 6mm x150mm ), 柱温30 ,检测波长为 258nm; 流速为 1mL /m in ; 流动相为甲醇 -0. 4 %磷酸溶液 ( 60:40), 上样量20ul , 流动相经 0. 45um滤膜滤过。,4.线性关系考察:分别用微量移液器精密吸取对照品溶液40、 80 、 120、 160 、 200uL,置于
4、1. 5mL EP管中,再分别精密加入甲醇补齐至总体积 200uL , 按色谱条件进样。以峰面积为纵坐标, 蔓荆子黄素的浓度 ( Lg/mL)为横坐标绘制标准曲线,回归方程: y= 98. 228x- 18 . 079 , r= 0 . 9995。结果表明, 蔓荆子黄素浓度在 6- 30ug/mL与峰面积呈良好的线性关系。,5.回收率试验: 精密称取已测知含量的样品 5份, 每份 0. 5g , 分别精密加入紫花牡荆素对照品溶液 1mL (质量浓度为0 . 032mg /mL) 测 定, 结 果 紫 花 牡 荆 素 的 平 均 回 收 率 为99. 27%, RSD为 1 . 82 %。,回收
5、率%=,C A,B,X100%,A为供试品所含被测成分量,B为加入对照品量,C为实测值。,6.样品测定:每份 1g , 精密吸取 20LL进样测定。 2010版中国药典规定蔓荆子以干燥品计算, 含蔓荆子黄素不得少于 0 . 030 %,蔓荆子应用前景,蔓荆子为临床常用中药,具有疏风散热、清利头目的功效。 现代研究表明其主要含有挥发油、黄酮类、环烯醚萜类、二萜类、生物碱、甾体等化学成分。 近年来国内外学者对蔓荆子的药理作用进行了深入系统的研究,比如抗肿瘤、解热、镇痛、抗菌、抗炎、降压、抗氧化等药理作用,但目前蔓荆子的临床应用仍集中于治疗各种痛证和抗炎两个方面。,有学者从蔓荆子中发现了新的抗癌药先
6、导化合物-Vitexicarpin 和劳丹烷型二萜;还有学者对蔓荆子的消炎和镇痛活性进行研究,结果表明 紫花牡荆素、木犀草素、3-甲氧基-4-羟基肉桂醛为主要活性成分,这为蔓荆子临床上用于预防癌症、镇痛和炎症的治疗提供了理论依据。,黄酮类化合物,(Flavonoids),概述,结构与分类,黄酮类化合物的理化性质,提取和分离,概 述,1.基本结构: 2-苯基色原酮 现泛指两个苯环(A与B环)通过中央三碳链相互联结而成的一系列化合物,具C6-C3-C6结构。,2.分布,黄酮类化合物广泛分布于被子植物中。 比如唇形科、菊科等等。,3.生物活性,黄酮类化合物是中药中重要的有效成分, 具有多方面的生理活
7、性。银杏叶总黄酮、葛 根素等具有扩张冠状血管作用;芦丁、橙皮 苷等能降低毛细血管脆性。,黄酮类化合物的结构与分类,黄酮类是以2-苯基色原酮为基本母核,续 表:,黄酮类化合物的理化性质,2.溶解性,黄酮类化合物大多呈黄色,多为结晶性固体,具有一定的结晶形状,少数(如黄酮苷)为无定性粉末。,1.性状,游离苷元:脂溶性 在水中溶解度主要取决于分子中极性基团的多少,且与分子平面构型有关: 黄酮、黄酮醇类、查耳酮 难溶于水; 二氢黄酮、二氢黄酮醇 水中溶解度稍大。,3. 酸碱性: 酸性:黄酮类化合物分子中多具有酚羟基,故显酸性。酸性强弱与酚羟基的数目和位置有关。 7,4-二OH 7-OH或4-OH一般酚
8、OH3-OH, 5-OH,碱性:,4. 呈色反应:,(一) 还原反应: 1. 盐酸镁粉反应:黄酮类之特征反应(橙红紫红) 注意: (1) 醇液中比水液中反应较灵敏 (2) 保持高浓度的酸 (3) 做对照实验,去样假阳性 查耳酮,花色素 红色,2. 四氢硼钠(钾)反应: 二氢黄酮(醇)专属反应,H+,(二) 金属盐类络合反应: 具有3-OH, 5-OH或邻二酚OH的黄酮反应(+)。,1.铝盐:1% AlCl3或Al(NO3)3络合物多为黄色,并有荧光。,2. 镁盐:Mg(OAc)2甲醇溶液 Mg(OAc)2 二氢黄酮(醇类) 天兰色荧光 黄酮(醇)、异黄酮 黄橙黄褐色,(C5-OH色泽更明显),
9、3. FeCl3反应:酚类显色剂 含有3-OH, 5-OH, 邻二OH时,可显红、绿等较明显的颜色。,(三) 硼酸显色反应: 5-OH黄酮, 2-OH查耳酮反应(+),(四) 碱性试剂显色反应: 1.NH3蒸气显色深黄色,慢慢褪色; 2.Na2CO3显色:,二氢黄酮,OH-,查耳酮,显橙 黄色,邻二酚OH 或3,4-OH,OH-,黄色,极易氧化,深红色,绿棕色,O2,碱液中不稳定,黄酮类化合物的提取与分离,黄酮类化合物的提取,主要根据被提取物和共存杂质的性质选择合适的提取溶剂。 游离黄酮苷元 黄酮苷类及极性大的苷元 氯仿、乙醚 丙酮、乙醇,方法:,1.乙醇或甲醇提取 2.热水提取法 3.系统溶
10、剂提取法 原理:利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同,选用不同溶剂进行萃取而达到精制纯化目的。,溶剂萃取,E,t,2,O,水层,C,H,C,l,3,C,H,C,l,3,E,t,2,O,总黄酮苷,回收溶剂,EtOAc层,EtOAc(或,n-BuOH),萃取,总黄酮,回收溶剂,层,萃取,水层,石油醚液(叶绿素,蜡, 胡萝卜素等),加入少量水、,石油醚萃取,黄酮苷(黄酮苷可用7%酚/水洗下),(酚)除去酚类,浓缩,液,水液,萃取,浓缩液,减压浓缩,D,C,B,A,A沸水洗,B沸MeOH洗,C 7%酚/水,D 15%酚/醇洗,活性碳,适用于苷类,活性碳吸附,至上清检不,出黄酮化合物,直,接,柱,色,谱
11、,浓缩液,回收溶剂,醇提取液,MeOH或EtOH提取,原料,1.利用酸性强弱不同进行分离pH梯度萃取 梯度pH萃取法适合于酸性强弱不同的黄酮苷元的分离。根据黄酮类苷元酚羟基数目及位置不同其酸性强弱也不同的性质,可以将混合物溶于有机溶剂(如乙醚)后,依次用5%NaHCO3、5%Na2CO3、0.2%NaOH及4%NaOH水溶液萃取,来达到分离的目的。,分离:,a. 聚酰胺色谱:分离羟基黄酮类化合物 原理: 氢键吸附理论,2.色谱法,吸附力的大小由酚羟基的数目和位置来决定: 酚羟基数目,吸附,Rf值 ;反之, 亦然; 酚羟基的酸性,吸附,Rf值 。,洗脱剂有:水甲醇丙酮NaOH水液甲酰胺脲素水溶液 洗脱能力最弱,洗脱顺序规律:易难 1)苷元相同:三糖苷双糖苷单糖苷苷元 2)酚OH数目越多,越难洗脱; 当酚OH数目相同时,酸性越弱的越易洗脱;能形成 分子内氢键者易洗脱, 3)不同类型黄酮: 异黄酮二氢黄酮黄酮黄酮醇 4)分子中共轭双键多者则吸附力强,难洗脱。如: 二氢黄酮查耳酮,聚酰胺色谱适用于分离极性和非极性物质,如:黄酮体、酚类、醌类、有机酸、生物碱、萜类、甾体、苷类、糖类、氨基酸衍生物、核苷类等。 尤其对黄酮体、酚类、醌类物质的分离,远比其它方法优越,
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