蛋白质两性解离.ppt
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1、蛋白质两性解离 和等电点的测定,这样的药物是如何生产的?,一、目的,(1)熟悉蛋白质的两性性质及等电点与蛋白质分子沉淀的关系 (2)掌握蛋白质等电点的测定方法 (pH法),二、原理,蛋白质是两性电解质 。 蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。 当溶液的pH达到某值,蛋白质颗粒上正负电荷数目相等。 在电场中,蛋白质既不向阴极移动,也不向阳极移动。 此时,溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点(pI)。,不同蛋白质各有其特异的等电点。 在等电点时,蛋白质的理化性质都有变化。 可利用此种变化测定各种蛋白质的等电点。 最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。,本实验借观察在不同pH溶液中
2、,酪蛋白的溶解度以测定其等电点。 用醋酸与醋酸钠(醋酸钠混合在酪蛋白溶液中)配制成各种不同pH值的缓冲液。 向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后,沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。,三、材料,(一)试剂 1mol/L乙酸 0.1mol/L乙酸 0.01mol/L乙酸 0.02mol/LNaOH 0.02mol/L盐酸 0.01%溴甲酚绿指示剂 0.5%酪蛋白溶液,(二)器材 试管架 试管:15ml6 刻度吸管:1ml4,2ml4,10ml2 胶头吸管2,四、操作,一、蛋白质的两性解离 (1)取一支试管,加0.5%酪蛋白1ml,再加溴甲酚绿指示剂4滴,摇匀。 (2)用胶头滴管慢慢加入0.2mol/L盐酸,边加边摇直至有大量的沉淀生成。观察溶液颜色的变化。 (3)继续滴加0.2mol/L盐酸,沉淀会逐渐减少以至消失。观察此时溶液颜色的变化。 (4)滴加0.2mol/L NaOH 进行中和,沉淀又出现。继续滴加0.2mol/L NaOH,沉淀又逐渐消失。观察溶液颜色的变化。,二、酪蛋白等电点的测定 (1)取同样规格的试管5支,按下表精确地加入下列试剂后,充分混悬,(2)用-、+、+、+等符号表示各管的混浊度。根据混浊度判断酪蛋白的等电点。最混浊的一管的pH值即为酪蛋白的等电点。,五、注意事项,滴加液体后要迅速混匀,
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