蛋白酶的测定方法.ppt
《蛋白酶的测定方法.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《蛋白酶的测定方法.ppt(21页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、响应面法优化蛋白酶生产工艺(下),实验内容,1、干物质失重的测定 2、蛋白酶活力的测定 3、数据分析与建模 4、响应曲面作图 5、整改方案分析,一、干物质失重的测定,干重失重发酵前干重发酵后干重,二、蛋白酶活力分析,1、 原理,(1)、福林试剂在碱性情况下极不稳定,可被酚类化合物还原而呈蓝色反应。 (2)、蛋白质分子中含有具有酚基的氨基酸(酪氨酸、色氨酸及苯丙氦酸等)。 (3)、以酪蛋白为底物,同酶液反应,经一定时间后,加三氯醋酸,终止酶反应,并使残余的酪蛋白质沉淀,同水解产物分开,经过滤后取滤液。用碳酸钠碱化,再加入福林试剂使之发色,用分光光度计测定。 (4)、蓝色反应的强弱,同蛋白水解产物
2、的多少成正比而水解产物的量又是同酶活力成正比例关系。因此,根据蓝色反应的强弱就可推测蛋白酶的活力。,2 试剂,1 福林试剂 于2000ml磨口回流装置内加入钨酸钠(Na2WO42H2O)100g,钼酸钠(NaMoO42H2O)25g,水700ml,85%磷酸50m1,浓盐酸1000ml,文火回流10h加入硫酸锂(Li2SO4)150g,蒸溜水50m1,混匀取去冷凝器,加入几滴液体溴,再煮沸l5min,以驱逐残溴及除去颜色,溶液应呈黄色而非绿色。若溶液仍有绿色,需再滴加溴液。再煮沸除去之。冷却后,定溶至1000ml。过滤,置于棕色瓶中保存。此溶液使用时加2倍蒸馏水稀释,即成稀释的福林试剂。,2、
3、0.4mol/L三氯醋酸(TCA)溶液 称取三氯醋酸65.4g,定容至1000ml。 3、0.4mol/L碳酸钠溶液 称取无水碳酸钠(Na2CO3)42.4g,定容至1000m1。 4、0.05mol/L pH2.5 乳酸-乳酸钠缓冲液 A液:称取10.6g80-90%乳酸加蒸馏水定容至1000ml。 B液:称取16克70%乳酸钠加蒸馏水定容至1000ml。 取A液16ml与B液1ml稀释1倍即成0.05mol/L pH2.5 乳酸-乳酸钠缓冲液。,5、2%酪蛋白溶液 称取干酪素2g加入0.1mol/L氢氧化钠20ml在水浴中加热使溶解(必要时用小火加热煮沸),然后用pH2.5乳酸-乳酸钠缓冲
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 蛋白酶 测定 方法
链接地址:https://www.31doc.com/p-2972093.html