HIV梅毒检测课件.ppt
《HIV梅毒检测课件.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《HIV梅毒检测课件.ppt(42页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、HIV抗体、梅毒 筛查技术,平昌疾控 李勇 2011.04.21,HIV抗体筛查依据: 全国艾滋病检测技术规范 (2009年修订版) 全国艾滋病检测工作管理办法,艾滋病检测实验室的管理,国家对艾滋病检测实验室实行分类管理,按照实验室的职能、开展检测工作的性质及范围共分三类实验室,分别是艾滋病参比实验室、艾滋病检测确证实验室、艾滋病检测筛查实验室(包括:艾滋病筛查中心实验室、艾滋病筛查实验室和艾滋病检测点) 。,艾滋病检测点的申请和验收程序,(一)申请设立艾滋病检测点的机构或单位应填写“艾滋病检测点资格审批申请表”(附件2),向当地区县卫生行政部门提出申请,经区县卫生行政部门批准后报市(州)卫生
2、行政部门审批。 (二)艾滋病检测点基本标准 1.人员条件:至少由2名经过市(州)级以上艾滋病检测技术培训并获得培训证书的专业人员组成。 2.建筑条件:需有艾滋病检测区域或专用实验台,能开展简便、快速检测。 3.设备条件:需配备快速试验所必须的物品,包括加样器、普通冰箱、操作环境温度控制设备、消毒与污物处理设备、一次性消耗品、安全防护用品。 (三)对符合规定、材料齐全的申请者,由所在市(州)卫生行政部门指定2人以上人员组成的艾滋病检测点评审专家组(专家组成员必须经过省级以上艾滋病检测相关培训)根据本方案艾滋病检测点基本标准对申报单位进行现场验收,同时使用5份盲样对其进行实验操作及结果判读进行现场
3、操作考核。 (四)专家组对通过现场验收的检测点报请市(州)卫生行政部门批准及备案。 (五)市(州)级卫生行政部门对通过验收者发出批复通知,同时抄送省卫生厅、省疾病预防控制中心和市(州)疾病预防控制中心,未通过验收者整改后可重新提出申请。,基 本 概 念,艾滋病(AIDS)又称获得性免疫缺陷综合征,是由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染所引起的一种免疫缺陷性疾病。 HIV在病毒分类中属逆转录病毒科慢病毒属中的人类免疫缺陷病毒组。全球流行的HIV可分为2型:HIV-1型和HIV-2型。 HIV-1型是引起艾滋病流行的主要病原(90%以上)。 HIV-2型主要局限于西非等国。应用免疫印迹法(WB)可以将
4、二者明确地区别开来。,HIV形态与结构,HIV呈球形,直径100-120nm 内含RNA分子及酶(逆转录酶、整合酶喝蛋白酶) 外层有包膜,膜上为突起插入,突起由糖蛋白(gp120)和跨膜蛋白(gp41)以共价键连接而成。 HIV基因:3个结构基因和6个调节基因 3个结构基因:env、gag、pol表达的蛋白: env-gp160、 gp120、gp41 gag-p55、p24、p17 pol-p66、p51、p31,HIV感染机理(一),HIV病毒侵入人体后,其表面糖蛋白gp120与细胞表面受体蛋白CD4以高亲和力结合,吸附到宿主细胞上;gp120再与宿主细胞表面辅助受体相互作用,使病毒与宿主
5、细胞膜更接近;gp41产生一系列构象变化,其N端的融合肽片段插入宿主细胞膜,导致病毒包膜与细胞膜的最终融合,病毒RNA进入细胞。 在HIV感染后,最先能够监测到病毒RNA、然后是p24抗原,最后是抗体。,HIV感染机理 (二) 感染HIV后,机体针对HIV基因编码的抗原性物质产生相应抗体,在临床上具有重要诊断学意义的主要是对抗结构基因编码抗原(如gpl60,gpl20,gp41,p66,p55,p51,p31,p24,p17等)的抗体。 由于个体差异、各种病毒蛋白的浓度和抗原性强弱不同及不同个体对不同抗原成分的反应性均有所不同,因此相应抗体的产生时间和不同个体对相同抗原成分的免疫应答强度等存在
6、一定差别,此外,检测方法和使用试剂的敏感性不同对HIV抗体的检出时间产生一定影响。在感染HIV后,患者血清中最先出现p24抗原,继之,各种HIV抗原可达到高峰;2-6周后,随着HIV-l抗体产生及浓度的不断增加,HIV抗原渐趋降低或检测不出。临床通用ELISA、免疫印迹法(WB)和目前开始推广的快速诊断法检测HIV抗体。,HIV感染的主要检测方法(一),目前检测HIV的方法很多,总体来说可以分为抗体检测和病毒检测两大类。病毒检测包括细胞培养(病毒分离)、p24抗原检测和病毒核酸检测。 早期对HIV的诊断主要是通过血清学试验检测抗HIV的抗体,间接地诊断HIV感染。 近几年,分子生物学方法不断被
7、应用到HIV的检测中,HIV的实验室诊断方法取得了很大的进展,核酸检测已经成为了HIV实验室诊断的发展方向。,HIV感染窗口期,窗口期的问题?抗体通常是在感染后38周能够被检测出来。95%在三个月可以检测出抗体。 在窗口期,病毒抗体不能被检出,但可以检测到病毒相关抗原或分离病毒。抗原能够在个体感染后先于血清转化218 d被检测到。因此,在血清转化期通过检测p24抗原作为早期辅助诊断HIV感染的一种方法。,HIV感染的主要检测方法(二) -HIV抗体检测,检测抗-HIV抗体是HIV/AIDS诊断的一项重要指标,抗-HIV抗体测定作为血清学诊断要求准确、可靠,必须经初筛、复检试验和确认实验三个步骤
8、。 初筛实验方法主要有:酶联免疫试验(ELISA)、明胶颗粒凝集试验(PA)、快速免疫(层析或渗滤)试验(RT)。 确认试验主要用免疫印迹试验( WB)。,HIV检测程序及流程图,筛查试验: 标本验收合格后,用筛查试剂进行检测,如呈阴性反应,报告HIV抗体阴性;对呈阳性反应的标本,须进行重复检测 复检:对筛查呈阳性反应的标本用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应,则报告HIV抗体阴性;如均呈阳性反应,或一阴一阳,需送艾滋病确认实验室进行确认。 应尽可能将重新采集的受检者血液标本和原有标本一并送检。,样品,样品,初筛试验,筛查试剂,阳性反应,阴性反应,复
9、检试验,一阴一阳,均阴性反应,均阳性反应,阴性报告,送确认实验室 确认试验,筛查试验的流程图,原有试剂+另一不同原理 (或厂家)试剂或另外两种 不同原理(或厂家)试剂,酶联免疫吸附试验(ELISA) 基本原理:是免疫反应物通过化学或免疫学的方法形成酶结合物,酶结合物能与待检样品中相应的抗原或抗体结合成为免疫复合物,然后加入酶底物,经酶的催化或水解作用,无色底物产生颜色,用肉眼、酶标仪观察结果。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。 初筛用的HIV ELISA试剂目前已经发展到第四代检测试剂。 第一代试剂主要以病毒裂解物或部分纯化的病毒抗原包被反应板,以检
10、测血清中的抗体。由于包被的抗原不很纯,假阳性率较高。 第二代试剂使用基因工程方法得到的重组抗原和合成肽包被反应板,由于纯化抗原的使用,特异性有了很大提高。 第三代试剂使用双抗原夹心法检测抗体,进一步提高了敏感性。-目前国内外主要使用第三代 第四代试剂则在第三代的基础上进一步增加了P24抗原的检测,把HIV抗原和抗P24的抗体同时包被反应板,可同时检测血清中的HIV抗体和P24抗原。检出时间提前了4-9.1d,用于血源筛查等。,HIV抗体筛查试验基本要求 筛查试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、批检合格、临床评估质量优良、在有效期内的试剂。 目前常用的筛查试剂有酶联免疫、颗粒凝集和其它快
11、速诊断试剂。 建议采用国家参比室试剂考评质量优良的试剂-中国疾病预防控制中心性艾中心网站,快速检测(RT)(1),常用的主要有以下几种: 明胶颗粒凝集试验(PA):PA是HIV血清抗体检测的一种简便方法,是将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体,与待检样品作用,混匀后保温(一般为室温)。当待检样品含有HIV抗体时,经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应,根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。 斑点EIA或称斑点ELISA(dot-EIA):以硝酸纤维膜为载体,将HIV抗原滴在膜上成点状,即为固相抗原。加血清样品作用,以后步骤同ELISA。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在10 m
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- HIV 梅毒 检测 课件
链接地址:https://www.31doc.com/p-2976779.html