免疫组化技术简介及相关临床应用.ppt
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1、免疫组化技术简介及相关临床应用,朱胜章 黔南州人民医院病理科,提 纲,1、背景知识简介 2、定义及基本原理 3、所用抗体及标本类型 4、常用染色方法 5、操作步骤及结果判断 6、临床应用 7、相关图片 7、开展该项目注意事项,背景知识简介,免疫组化技术是20世纪70年代初Sterb Berger在酶标法的基础上,以免疫学的抗原抗体反应为理论基础发展起来的一门方法学。 20世纪80年代该项技术在国外开始应用于诊断疾病,国内比国外约晚10年,即90年代开始运用于疾病的病理诊断。,最近20多年来,该项技术得到飞速发展,特别是绝大多数抗体能够应用在福尔马林固定的石蜡切片上,因而大大促进了它在临床病理学
2、上的应用。 从开始发展至今,该项技术一直在基础医学和临床研究中发挥重要作用,为疾病尤其是肿瘤性疾病的诊断、鉴别诊断及发病机制的研究提供了强有力的手段。 目前绝大多数大中型医院都开展了该项技术检查,我院有待开展此项技术。,定义及基本原理,定义: 免疫组化,也称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术,是应用免疫学基本原理抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究。,基本原理: 抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性,免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某
3、种化学物质提取出来,以此作为抗原或半抗原,通过免疫动物后获得特异性的抗体,再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。然后再通过化学显色方法将抗原抗体结合所在的部位显示出,来,从而达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性,定位或定量的研究。 有如下基本特点: 1、特异性强 2、敏感性高 3、定位准确 4、形态与功能相结合,所用抗体及标本类型,所用抗体类型 常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体,单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体,应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后,从动物血中所获得的免疫血清,是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。,所用标本类型: 主
4、要为组织标本和细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理切片和组织芯片)和冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法,对于组织形态保存好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;还能长期存档,供回顾,性研究;石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响,但可进行抗原修复,是免疫组化中首选的组织标本制作方法。,常用染色方法,免疫组织化学技术按照标记物的种类不同可分为: 1,免疫荧光法,标记物为荧光素,通过荧光显微镜观察; 2,免疫酶法,以酶标记抗体,抗原抗体反应后显色,通过光镜或电镜观察,目前最常用; 3,其它如亲和组织化学法、免疫铁蛋白法、免疫胶
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