下颌前突与正常人群中Nell1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究.ppt
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1、下颌前突与正常人群中Nell-1基因 单核苷酸多态性位点rs61150458的 研究 专 业: 口腔正畸学 导 师: 王小琴 教授 研 究 生: 赵 华 前言 材料与方法 结果 讨论 结论 前言前言 Allwright and Bundred通过流行病 学调查显示在亚洲人群中下颌前突 (Mandibular Prognathism,MP) 患病率 较其他地区相对较高,大约为8- 40% 但是其致病原因至今仍不清楚。 MP有家族聚集倾向 MP可能为常染色体显 性遗传病 局部因素 有一个影响MP的主基 因且符合孟德尔遗传 多因素影响 Gheriani Marazita 许多学者 Ricardo S
2、ilviene 200 3 年 2007年 19世纪 20072007年,余兴华等人对年,余兴华等人对MPMP患者和正患者和正 常下颌患者进行了生长激素受体基因单常下颌患者进行了生长激素受体基因单 核苷酸多态性分析。核苷酸多态性分析。 另外还有许多学者在研究与下颌骨另外还有许多学者在研究与下颌骨 发育有关的基因,比如发育有关的基因,比如ShhNell-1ShhNell-1 PtcPtc等。等。 结果发现了一个位于第结果发现了一个位于第1010外显子的外显子的 16731673位位SNPSNP位点碱基突变类型为腺嘌呤位点碱基突变类型为腺嘌呤 (A)(A)胞嘧啶胞嘧啶(C)(C)。 国内研究现状
3、Nell-1Nell-1基因基因 目前对目前对 Nell-1 Nell-1 基因的研究主要集中在骨组基因的研究主要集中在骨组 织工程学方面,基因改变研究未见报道。织工程学方面,基因改变研究未见报道。 本实验对本实验对105105例(实验组例(实验组6060例,对照组例,对照组4545例例 )受试者的)受试者的Nell-1Nell-1基因基因SNPSNP位点位点rs61150458rs61150458进进 行了初步研究。行了初步研究。 SNP位点 基因 G C 蛋白质 Glu Asp 天冬氨 酸 谷氨酸 研究目的 u探讨Nell-1基因单核苷酸多态性 位点rs61150458在下颌前突与正 常人
4、群之间的差异 u为下颌前突的病因学机制提供理 论基础。 材料与方法 仪器及材料厂家 PCR扩增仪 深圳泰立仪器仪表有限公司 紫外凝胶分析系统 UVP 凝胶电泳仪 Hoefer Scientific Instruments Hinf 限制性内切酶 Fermentas life sciences 引物 生工生物工程有限公司 实验试剂与仪器 研究对象 满足以下条件的进行头颅侧位片测量: l 均为汉族人,且没有异族通婚史 l 双侧颌面对称,无面部畸形 l 无不良习惯及替牙障碍 l 均为成年人,无外伤史,无手术史 纳入标准 对照组(正常):SNA 、SNB、 ANB、上颌长 、 上颌位置、MP-FH 在
5、正常范 围之内, 2ANB4 实验组( MP ) :SNA、上颌长、上颌位置、 MP-FH在正常范围之内, ANB0。 实验组60人对照组45人 采静脉血5ml 提取全部DNA 设计相应目的基因的引物 PCR扩增目的基因 Hinf 酶切 统计学分析 实验步骤 DNA提取采用TKM血细胞DNA快 速提取法 DNA提取 目的基因引物的设计 u 引物的设计采用Printer 3.0软件 u上游引物:gcttccagggtggagtttta u下游引物:cacagagttttggacccatgt 50LPCR反应体系 试剂名称剂量 10Buffer5L MgCl2(25mM)4L dNTP(10mM)
6、1L 上游引物(10M)1L 下游引物(10M)1L Taq酶0.4L 模板DNA10L 三蒸水28L PCR反应参数 温度()时间 预热942min 变性9420s 退火5630s 延伸7230s 循环次数36次 1 SspI aat|att13 1 tctttccctaatatttggcttccagggtggagttttagtaaaaattacagaaatgtgtcc 61 MboII n|nnnnnnntcttc84 61 NdeII |gatc83 61 MboI |gatc83 HinfI g|antc101 61 tcctttgaactgctcagaaaaggatcacattctt
7、cctgagaatcagtgctgccgtgtctg 121 MboII n|nnnnnnntcttc167 121 tagaggtaagtgggcttggtggtgggccatgcgtggggtgaggctggggctggtcttctg 181 gggcatgagattttaatgaatagtatgataataacatgggtccaaaactctgtgcgctgc 酶的确定 Hinf 5 G A N T C 3 3 C T N A G 5 统计学分析 比较各组间等位基因频率和基因型分 布,采用卡方检验。 对两组研究对象的基因型分布进行 Hardy-Weinberg遗传平衡性检验 所有统计学检
8、验采用SPSS 17.0软件完 成,以P0.05代表有统计学差异 结 果 电泳结果 目的基因扩增产物 200bp Marker目的基因 实验组酶切后凝胶电泳图 100bp 200bp GG型酶切后片段长度:83bp、134bp; CC型酶切后片段长度:217bp GC型酶切后片段长度:83bp、134bp 、 217bp 对照组酶切后凝胶电泳图 100bp 200bp GG型酶切后片段长度:83bp、134bp; CC型酶切后片段长度:217bp GC型酶切后片段长度:83bp、134bp 、 217bp 等位基因频率分析 组别等位基因X2P 基因频数频率 实验组G410.67 C190.33
9、 对照组G280.620.4260.514 C 170.38 注:P0.05,即实验组与对照组之间等位基因频率差异无 显著性。 基因型分析 组别基因型频数频率X2P 实验组GG320.52 GC180.30 CC100.18 对照组GG230.511.8350.400 GC100.22 CC120.27 注:P0.05,即实验组与对照组之间的基因型分布差异无 显著性。 讨 论 n可单独引起成骨细胞的分化 n可以通过操纵一些成骨相关基因的 下游途径来影响其他信号通路而促 进成骨细胞的分化 nCowan 研究表明Nell-1蛋白只作用 于颅颌面的成骨细胞 ,特别是对 下颌骨的成骨有其特异性 Nel
10、l-1基因的特点 MPMP的致病原因与的致病原因与Nell-1Nell-1基因无关。基因无关。 由于样本量有限,其代表性有限。由于样本量有限,其代表性有限。 MPMP的致病原因与的致病原因与Nell-1Nell-1的该的该SNPSNP位点的位点的 变异无关。变异无关。 结果分析 由于实验组与对照组的病例有限,对Nell-1基 因与MP患者的内在联系需增加样本量做进一步 的研究,对其它位点及二者之间的内在联系仍 需深入探讨。 Nell-1基因的rs61150458多态性位点在中国汉族 MP人群与正常人群之间的等位基因频率及基因 型分布差异无显著性,尚不能认为MP的致病原 因与该位点的变异有关。
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