动物生理实验课件Bhy (2).ppt
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1、动物生理学实验 指导教师:白华毅 授课专业: 动科、动医、水产 云南农业大学动物科学学院 动物生理学常用器械 一. 蛙类手术器械 1探针:用于破坏脑和脊髓。 2粗剪刀:用于剪骨、肌肉、皮肤等较粗硬组织 。 3眼科剪;用于剪神经、血管等细软组织。 4外科镊:用于夹捏组织和牵提切口处的皮肤。 5. 眼科镊:用于夹捏细软组织。 6玻璃分针:用于分离神经和血管等。 7蛙板:用于固定蛙类。 二. 哺乳类手术器械 8玻璃板:用于制备神经肌肉标本。 1. 注射器:用于注射药液。 2剪毛翦:用于术部剪毛。 3手术刀:用于切割皮肤、肌肉和脏器。 4止血钳:除用于止血外,有齿的用于提起皮肤,无齿的用于分离皮下组织
2、 。 5外科镊:用于夹捏较大或较厚的组织,牵拉皮肤切口。 6外科剪:用于剪皮肤、皮下组织、肌肉等。 7眼科剪:用于剪血管、神经。 8眼科镊:用于捏和分离神经、血管等。 9,骨钳:用于咬切骨质。 10.骨剪;用于剪切骨质。 11.颅骨钻:用于钻孔开颅 12.持针钳:用于夹持缝合针。 13.缝合针、线:用于缝合皮肤、肌肉脏器等。 动物生理学实验动物 常用酌麻醉药物 动物生理学实验动物 常用酌麻醉药物 动物生理学实验动物 常用酌麻醉药物 常用的给药方法 1. 经口投药法(口服、灌服) 2.注射给药法 (皮下、肌肉、腹腔、静脉 ) 常用的动物麻醉方法及注意事项 1. 全身麻醉:吸入、注射 2. 局部麻
3、醉:点眼、注射 麻醉注意事项 1、麻醉前应正确选用麻醉药品、用药剂量及给药途径。 2、密切观察动物麻醉状态及反应,以便准确判断麻醉深度。 3、如麻醉较浅,动物出现挣扎或呼吸急促等,需补充麻醉药以维持 适当的麻醉。一次补充药量不宜超过原总用药量的五分之一。 4、麻醉过程中,应随时保持呼吸道通畅,并注意保温。 5、在手术操作复杂、创伤大、实验时间较长或麻醉深度不理想等情 况下,可配合局部浸润麻醉或基础麻醉。 6、实验中注意液体的输入量及排出量,维持体液平衡,防止酸中毒 及肺水肿的发生。 实验一 血液的组成 实验目的了解血液的组成,区别血浆、血清及纤维蛋白。 实验原理 血液是由液态的血浆和悬浮于血浆
4、中的血细胞组 成。在血液中加一定量的抗凝剂柠檬酸钠或草酸钾,使血液抗 凝,由于血细胞比重略大于血浆,静置或经过离心,将出现分 层。上面无色(或淡黄色)透明的部分为血浆,下面红色部分为 红细胞,在红细胞之上有一薄层灰白 色部分为白细胞和血小板。下部压紧 的血细胞占全血的体积比称为红细胞 压积,又叫红细胞比容。若不加抗凝 剂任血液自然凝固或去纤维蛋白,就 可区别血清、血块及纤维蛋白。 材料及用具 鸡,新鲜血,抗凝血,离心管,离心机,小试管刷,烧杯, 试管架,试管,天平。 方法及步骤 制备抗凝血:常用的抗凝剂为3.8%柠檬酸钠,其用量:1ml血需5mg柠檬酸 钠10ml血50mg柠檬酸钠。(计算50
5、mg柠檬酸钠相当于多少毫升3.8% 柠檬酸钠) 100:3.8g=x:50mg 100:3800mg=x:50mg x=(10050)38001.32 柠檬酸钠抗凝机理:柠檬酸钠与血中的钙离子结合,形成可溶化物而抗 凝。其优点是毒性低。 方法及步骤 1取抗凝血(1毫升血液加柠檬酸钠5毫克;或1毫升血液加草酸 钾2毫克)10毫升(如抗凝血放置过久,还 须将其充分摇匀),置于有刻度的离心管 中。将离心管放入电动离心机中,以每分 钟3000转的速度旋转2030分钟,使血细 胞完全沉于管底,然后取出离心管观察, 其上层为血浆,底层为压紧的深红色的红 细胞,中间一白色薄层为白细胞和血小板。 2取新鲜血5
6、0毫升放在小烧杯中,用小试管刷搅动数分钟后,取出 试管刷,可见试管刷上有许多丝状物缠绕,此即为纤维蛋白。用水冲 洗后,观察其颜色及韧性。脱去纤维蛋白的血液称“去纤维蛋白血” 。 3取“去纤维蛋白血液”10毫升,依1法离心后,上层为血清,下层 为 血细胞。观察其颜色及透明度。 4取新鲜血10毫升置试管中,静置片刻。则见有凝固现象发生,浑 浊的血变为一条血凝块(凝块称血块),血块回缩,周围有清亮的液体 析出,该液体为血清。为加速此过程,可先离心几分钟或略加温。 注意事项 使用离心机时,应用天平称量使离心机旋转轴两侧相应的两个套筒及其 内容物的总重量相等。开动离心机应由慢而快,使转速逐渐达到3000
7、转 /分,停止时应由快而慢逐渐停止。 要求与思考题 1.血浆与血清有哪些区别? 2写出实验报告,该实验报告采用画图法最直观。 实验二 血红蛋白的测定 实验目的 熟悉用比色法测定血红蛋白的方法。 实验原理 血红蛋白测定的方法有多种,最常用而最简单的是比色 法。由于血红蛋白的颜色,常随结合的氧量多少而改变,因而不利于比 色,但血红蛋白与稀盐酸作用后,能使亚铁血红素变成不易变色的棕色 的高铁血红蛋白,用水稀释后可与标准比色板比色,从而测得血红蛋白 含量。通常以每100毫升血液中血红蛋白的克数来表示。 材料及用具 血红蛋白计,抗凝血,吸血管,滤纸, 1/10N盐酸,蒸馏水等。 方法及步骤 1.实验前先
8、检查血红蛋白计的测定管是否清洁。 2.将1/10N盐酸加入测定管中至刻度“2”或“10%”处。 3.用吸血管吸制备好的抗凝血至刻度20立方毫米处。 4.将吸血管内的血液完全移入稀释管内,混合均匀,放置10分钟。 5.把稀释管插入比色架中,使无刻度的两侧面位于空格的前后。 6.用滴管向稀释管内逐滴加入蒸馏水,边滴边抖动手腕摇匀边观察颜 色,直至颜色与标准比色柱相同为止。 7.从比色箱中取出测定管,读出其中液体表面(凹面)的刻度。稀释 管上液面的刻度读数即为每100ml血液中血红蛋白的克数。 注意事项 1.血液和盐酸作用的时间不可少于10分钟,否则,血红蛋白 不能充分转变成高铁血红蛋白,使结果偏低
9、。 2.加蒸馏水时,开始可以稍多加几滴,随后则不能过快,以 防稀释过头。 3.比色时最好在自然光下,而不应在黄色光下进行,以免影 响结果。 4.整个实验过程中均应注意避免起泡。 实验三 红细胞的脆性试验 实验目的 红细胞的理化特性及其变化受动物自身状况影响,在临 床上具有检验诊断价值。通过红细胞渗透脆性实验学习测定红细胞对 不同低渗溶液的渗透抵 抗力,即测定正常动 物红细胞渗透脆性的 方法,理解细胞外液 渗透张力对维持细胞 正常形态与功能的重 要性。 实验原理 正常红细悬浮于等渗的血浆中,若置于高渗溶液内,则红细 胞会因失水而皱缩;反之,置于低渗溶液内,则水进入红细胞,使红细胞 膨胀。如环境渗
10、透压继续下降,红 细胞会因继续膨胀而破裂, 释放血红蛋白,称之为溶血。 红细胞膜对低渗溶液具有一 定的抵抗力,红细胞膜对低 渗溶液的抵抗力越大,红细胞在 低渗溶液中越不容易发生溶血, 即红细胞渗透脆性越小。将血液 滴入不同的低渗溶液中,可检查红 细胞膜对于低渗溶液抵抗力的大小。 红细胞脆性试验就是测定红细胞对低于0.9%NaCl溶液的耐受能力。耐 受力高者,红细胞不易破裂,即脆性低,反之,耐受力低者,红细胞易于 破裂,即脆性高。 凡上层溶液开始微呈淡红色,而极大部分红细胞下沉,称开始溶血或最小 抗力(红细胞的最小抵抗力)。 凡液体呈均匀红色,管底无红细胞下沉,则称完全溶血或最大抗力(红细 胞的
11、最大抵抗力)。 材料及用具试管,试管架,吸管, 移液管,抗凝血,1%NaCl,蒸馏水。 方法及步骤 1.先将试管分别排列在试管架上,按下表把1%NaCl,稀释成不同浓度的 低渗溶液,每管溶液均为2ml。 试管 号 12345678910 1% NaCl 1.401.301.201.101.000.900.800.700.600.50 蒸馏 水 0.600.700.800.901.001.101.201.301.401.50 NaCl 浓度 0.700.650.600.550.500.450.400.350.300.25 2.采取血液,并在上列各管中各加入大小相等的血液1滴,然后,用拇指堵 住试
12、管口,将试管慢慢倒置一、二次,使血液与管内盐水混合均匀。 3.在室温中静置1小时,观察结果:根据各管中液体颜色和浑浊度的不同, 判断红细胞脆性。 4.依上述说明,判定出开始溶血及开始完全溶血的氯化钠浓度百分率。前者 为红细胞的最小抗力,后者为红细胞的最大抗力。 未发生溶血的试管:液体下层为大量红细胞沉淀,上层为无色透明,表明 无红细胞破裂。 部分红细胞溶血的试管:液体下层为红细胞沉淀,上层出现透明淡红(淡 红棕)色,表明部分红细胞已经破裂,称为不完全溶血。 红细胞全部溶血的试管:液体完全变成透明红色,管底无红细胞沉淀,表 明红细胞完全破裂,称为完全溶血。 注意事项 1.小试管要干燥,加血的量要
13、一致,只加一滴。 2.混匀时,轻轻倾倒12次,减少机械震动,避免人为溶血。 3.配制不同浓度的NaCl溶液时应力求准确、无误。 实验四 红细胞沉降率(血沉)的测定 实验目的 了解正常动物红细胞沉降率并掌握其测定方法。 实验原理 红细胞在循环血液中具有悬浮稳定性,但在血沉管中,会因 重力逐渐下沉。将加有抗凝剂的血液置于一特制的具有刻度的玻管内, 置于血沉架上,红细胞因重力作用而逐渐下沉,上层留下一层黄色透明 的血浆。经一定时间(通常以第1小时末 红细胞下降的距离,作为沉降率的指标, 简称为血沉)沉降的红细胞上面的血浆 柱的高度,即表示红细胞的沉降率。 血浆中的某些特性能改变红细胞的沉 降率,因此
14、血沉可作为某些疾病检测的 指标之一。 材料及用具 血沉管,血沉管架, 洗耳球,抗凝血,干棉球。 方法及步骤 1.制备抗凝血(鸡血)。 2.用清洁、干燥的血沉管,小心地吸血至最高刻度“0”处,搽去血沉管 尖端外周的血液。在吸血之前,须将血液充分摇匀(但不可过份振荡以 免红细胞破坏)。吸血时,要绝对避免产生气泡,否则须重做。将吸有 血液的血沉管垂直置于血沉管架上,分别在15分钟、30分钟、45分钟、 1小时(4只管),检查血沉管上部血浆的高度,以毫米表示之,并将所 得结果记录于下表: 时间 15mi n 30mi n 45mi n 1h 血沉 注意事项 1.采血后实验应在2小时内完毕,否则血液放置
15、过久,会影 响实验结果的准确性。 2.沉降管应垂直竖立,不能稍有倾斜,不得有气泡和漏血。 3.沉降率随温度的升高而加快,故应在室温1827时测定 为宜。 4.血沉管必须清结,如内壁不清洁可使血沉显著变慢。 实验 ABO血型的鉴定 实验原理 ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。存在A 凝集原的称为A血型,存在B凝集原的称为B血型。而血清中还 存在凝集素。当A凝集原与抗A凝集素相遇或B凝集原与抗B凝集 素相遇时,会发生红细胞凝集反应。一般A型标准血清中含有抗 B凝集素,B型标准血清中含有抗A凝集素,因此可以用标准血 清中的凝集素与被测者红细胞反应,以确定其血型。 设计要求 :已知甲某的血
16、型为A型(或B型),现在又无标准 血清,要求设计一实验来判断乙某的血型? 材料及用具 正常人,双凹玻片,采血针,竹签,75%酒精棉球 ,干棉球,玻璃蜡笔(记号笔),尖头滴管。 方法与步骤 1.在双凹玻片两端分别标上A和B,中央标记受试者的号码。 2.在A端和B端的凹面中分别滴上相应的标准血清少许。 3.75%酒精棉球消毒无名指端,用采血针刺破指端,用消毒后的 尖头滴管吸取少量血,分别与A端和B端凹面中的标准血清混合, 放置12 min后,肉眼观察有无凝血现象,肉眼不易分辨的用 显微镜观察。 4.根据凝集现象的有无判断血型。 血型鉴定血型鉴定 Type AType B Type OType AB
17、 anti-Aanti-Banti-Aanti-B anti-Aanti-Banti-Aanti-B 注意事项 1.指端、采血针和尖头滴管务必做好消毒准备。做到一人一针,不能混用。使 用过的物品(包括竹签)均应放入污物桶,不得再到采血部位采血。 2.消毒部位自然风干后再采血,血液容易聚集成滴,便于取血。取血不宜过少 ,以免影响观察。 3.采血后要迅速与标准血清混匀,以防血液凝固。 4.在进行交叉配血实验时,一定要防止将主侧配血和次侧配血搞混了。 实验五 蛙心起搏点的观察 实验目的 用结扎的方法来观察蛙的心搏的起点,以及心脏不同部位 传导系统的自动节律性高低。 实验原理 心脏的特殊传导系统具有自
18、动节律性,但各部分的自动节 律性高低不同。蛙心的起搏点是静脉窦(哺乳动物是窦房结),自动节 律性也以静脉窦(窦房结)为最高。正常心脏的每次搏动都由静脉窦 (窦房结)发出,沿心房传至房室结,再由房室结经房室束传至心室肌 肉。若阻断心脏的正常传导,则出现不同的收缩障碍。 方法及步骤 1.认识蛙心各部分的构造和名称:自心脏腹面认识心室、心房、动脉圆锥 (动脉球)和主动脉。然后用玻璃解剖针向前翻转蛙心,从心脏背面区别静 脉窦和心房。 2.观察蛙心各部分收缩的顺序:自心脏背面观察静脉窦、心房、心室三部 分。观察他们的跳动次序,并记数每分钟的收缩次数。 3.用小镊子在静脉窦与心房之间穿一丝线,并进行结扎。
19、此时心房与心室均 停止于舒张状态,而静脉窦依然搏动。 记数其频率。待心房和心室又开始收 缩后,记数单位时间内静脉窦和心房、 心室的收缩频率,两者是否一致?说 明什么问题? 4.另取一线,在心房与心室之间结扎, 观察心脏跳动有何变化? 注意事项 1.结扎前要认真识别心脏各部分的界线。 2.结扎的部位要准确地落在相邻部位的交界处,结扎时用力逐渐增加, 直至心房、心室搏动停止。 3.蛙心正常起搏点在静脉窦,潜在起搏点在心房。 回答问题: 1.正常蛙心起搏点是什么?传导顺序如何? 2.结扎后静脉窦、心房、心室的搏动次数是多少? 实验六 离体蛙心灌流 实验目的 用离体灌流的方法,观察各理化因素对心脏活动
20、的影响 重要作用,了解肾上腺素、乙酰胆碱等激素、神经递质对心脏活动的 调节意义。 实验原理 维持心脏正常收缩的节律和强度,需要有一个适当的理 化环境(离子的浓度、比例、溶液的酸碱度、环境温度等),这种环 境条件稍有改变,便可影响心脏的正常活动。 材料及设备牛蛙,蛙心套管,任氏液,2%氯化钠,1%氯化钙,1% 氯化钾,0.01%肾上腺素,0.01%乙酰胆碱,滴管,细线,铁柱,试 管夹,蛙心夹、生物信号采集系统。 斯式蛙心插管法手术过程 (一)手术关键 1. 确保斯式蛙心插管前(尖)端进入心室腔 2. 确保蛙心插管内液体与心室内液体连接畅通 3. 千万不能损伤静脉窦 4. 防止漏液。 (二)手术操
21、作步骤: 用刺蛙针找到枕骨大孔, 对蛙行脑、脊髓双刺毁 仰卧固定于蛙板上 用剪刀剪去胸壁 用眼科剪小心地剪开心包膜,暴露心脏 把主动脉左支上 端穿线 结扎 于主动脉分支下 预埋一条棉线做 一个松结备用。 剪口的位置 应视蛙心插管 前端细小部分 的长度而定。 轻提主动脉上的结扎线,用 眼科剪剪在左 主 动 脉近动 脉球结扎处下方一小“V”形 向心斜切口, 插管内事先装 好干净的任氏 液,可滴加若干 滴肝素(抗凝剂) 于其中。 将注有任氏液的斯氏套管插入动 脉干内,然后左手持左侧血管分 支上的结扎线向外拉,右手将蛙 心套管送入动脉球 将盛有少量任氏液的蛙心插管由此口插入主动脉,至动脉圆锥 时略“向
22、后向下”反复试插,当心室收缩时插入向心室后壁 方向插入容易经主动脉瓣入心室腔内(插入过深可因室壁 堵住插管下口不通,可稍退)。插管若成功进入心室,可 见下列四者之一可确定:管内液面随心缩而升舒而降 血若“喷泉”涌入插管用滴管吹之心室膨大手指压室壁 可触及有插管抵触。 此处一定 要扎紧且不 能松脱,以 防漏液。 即将已作虚结之 丝线把血管和套 管固定起来 余线则扎于 套管的玻璃 小钩上,以 免心脏滑脱 。提起套管 ,剪断 与心脏相连 的血管和组 织(注意勿损 伤静脉窦及 两心房) 小心剪断组 织后,摘出 心脏。 用任氏液洗去心内外的余血后,注入新鲜任 氏液备用。 四、实验装置与连接 (二)实验项
23、目 1.正常心脏收缩的曲线:用滴管向蛙心套管中注入13毫升任氏液(以后 的溶液量均应与第一次相同)。注意观察心跳频率和收缩强度。 2.钠离子的影响:向套管中加入1%氯化钠数滴,并与管中溶液混均,同时 做一记号。观察心脏活动有何变化?待心脏活动发生明显改变时,应迅速 吸出套管内的溶液,并添加新鲜的任氏液进行洗涤,反复数次,直至心脏 恢复正常活动后,再加入其它溶液(以下实验皆同此)。 3.依照步骤2的方法分别向套管中加入氯化钙、氯化钾、肾上腺素、乙酰胆 碱,观察心脏活动有何变化?以冰块、40热水接触静脉窦,观察心跳频 率有何变化。 4. 用生物信号采集系统记录实验全过程,并保存打印附于实验报告上。
24、 1. 成功插管:注意勿剪破心脏血管、勿结扎 静脉窦。 2. 及 时 抢 救 : 如 加 入KCl 和Ach 后 , 要 及 时 冲 洗 避 免过度抑制而死亡。 3. 前后对照:每步加药前均应设有药前“对照” 。 4. 液面相同 :末次冲洗时应调整液面相同,才具有 可比性。 【注意事项】 5. 避免污染 :吸干净液与脏液的两吸管不要混用避 免残液影响。 6. 量效关系:先加12滴,观察效应,不明显可再 补加。 7. 冲洗湿润 :冲洗3次以上,常滴液于心脏表面使 之湿润。 8. 指标标记:观察指标为心率和心收缩力; 每步骤均 应标记。 讨论 上述各种因素对心脏活动有什么影响?为什么 ? 实验七
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