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1、专题2,细胞工程,动物细胞工程,课题2,单克隆抗体等,动物细胞工程常用的技术,动物细胞培养,动物细胞核移植,动物细胞融合,是其他动物细胞工程技术的基础。,动物细胞培养,如何进行细胞培养? 培养时又需要提供哪些必要条件呢?,动物细胞培养和核移植技术,从动物机体中取出相关组织,将它们分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。,动物细胞培养过程,胚胎或幼龄动物的组织器官,细胞悬液,10代细胞,50代细胞,剪碎,胰蛋白酶,洗涤、稀释、分离,原代培养,用胰蛋白酶分散细胞,说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的PH为7.27.4,此环境下胃蛋白酶(2.0)没有活性,而胰蛋白酶
2、(7.2-8.4)的活性较高。,比老龄动物的组织细胞增殖能力强,有丝分裂旺盛。分化程度越低,增殖能力越强,越容易培养。,动物细胞培养不能最终培养成生物体,细胞增殖缓慢,核型可能变化,动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质,将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。,贴壁生长 接触抑制,10代以内,保持正常二倍体核型,传代培养,细胞系,细胞贴壁 表面光滑、无毒,易于贴壁。,5%CO2。维持培养液的pH,多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中,根据你所学的内环境的知识,思考以下问题: 1.体外培养细胞时需要提供哪些物质? 2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件?,讨 论,葡萄糖、氨
3、基酸、无机盐、维生素、促生长因子和动物血清等。,适宜温度、PH和气体环境;无菌无毒环境,植物细胞和动物细胞培养的比较,大规模的生产有重要价值的生物制品 病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体 为基因工程技术提供受体细胞 培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植 有毒物质的检测,细胞的生理、药理、病理研究 用于筛选抗癌药物等,为治疗和预防癌症及其他疾病提供依据,动物细胞培养技术的应用,动物细胞核移植技术和克隆动物,将动物的一个细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育成为一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体(克隆动物),分 类,细胞分化程度低,恢复全能性容易,细胞分化程度高,恢复全能性不容
4、易,动物细胞核移植,体细胞核移植的过程:,思考: 1.核移植的受体细胞是什么?处在什么时期? 2.通过什么手段激活受体细胞,构建重组胚胎?,M中期卵母细胞,诱导方法:物理或化学方法激活受体细胞,完成细胞分裂和发育进程。,植物、动物细胞融合的比较,讨论,1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前,为什么必须先去掉受体卵母细胞的核?,为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自有重要利用价值的动物提供的体细胞,在供体细胞的细胞核移至受体细胞之前,必须将受体细胞的遗传物质去掉或将其破坏。,培养的动物细胞一般当传代至1050代左右时,部分细胞核型可能会发生变化,其细胞遗传物质可能会发生突变,而10代以内的
5、细胞一般能保持正常的二倍体核型。因此,在体细胞核移植中,为了保证供体细胞正常的遗传基础,通常采用传代10代以内的细胞。,2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞,想一想,这是为什么?,3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物,是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗?为什么?,绝大部分DNA来自于供体细胞核,但其核外还有少量的DNA,即线粒体DNA是来自于受体卵母细胞。,此外,即便动物的遗传基础完全相同,但动物的一些行为、习性的形成与所处环境有很大关系,核供体动物生活的环境与克隆动物所生活的环境不会完全相同,其形成的行为、习性也不可能和核供体动物完全相同,从这一角度看,克隆
6、动物不会是核供体动物100%的复制。,体细胞核移植技术的应用前景,1、在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程,2、保护濒危物种,3、医药卫生领域生产医用蛋白质及组织器官的移植,4、了解胚胎发育和衰老过程;追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病,1、成功率比较低 2、大多存在健康问题 3、克隆动物食品安全问题,体细胞核移植技术存在的问题,思考与探究,2.动物细胞培养要经过脱分化的过程吗?为什么?,动物细胞培养不需经过脱分化过程。因高度分化的动物细胞发育潜能变窄,失去了发育成完整个体的能力,所以,动物细胞也就没有类似植物组织或细胞培养时的脱分化过程了。要想使培养的动物细胞定向分化,通常采用定向诱导动物干细
7、胞,使其分化成所需要的组织或器官。,动物细胞融合,细胞融合是正常的生命活动,两个细胞正在融合,受精作用,动物细胞融合与单克隆抗体,动 物 细 胞 融 合,细胞A,细胞B,杂种细胞,灭活的病毒,物理法化学法,仙台病毒 疱疹病毒 新城鸡瘟病毒,用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程,为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活?,单克隆抗体,抗体 是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 B淋巴细胞产生抗体。,B淋巴细胞与抗体,B淋巴细胞受抗原刺激后,可以产生抗体。 动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体,每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。 每一个淋巴细胞只能产
8、生一种抗体。,单克隆抗体,由单个B淋巴细胞经过无性繁殖(克隆),形成基因型相同的细胞群,这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 特点:特异性强、灵敏度高,如何大量生产单克隆抗体?,利用淋巴细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞,单克隆抗体制备过程,注射抗原,细胞融合、筛选,足够数量的、能产生特定抗体的细胞群,单克隆抗体,思考,1、本过程利用了哪些原理?,免疫原理,细胞融合原理和动物细胞培养原理,2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合?,这样融合成
9、的杂交瘤细胞,继承了双亲细胞的遗传物质,不仅具有B细胞分泌抗体的能力,而且还有无限增殖的本领,因而可以获得大量单克隆抗体。,单克隆抗体的应用,与常规抗体相比,单克隆抗体产量高,特异性强,灵敏度高,优越性十分明显。,应用主要有,1、临床诊断,2、作为载体,运载抗癌药物,形成“生物导弹”治疗肿瘤,资料:目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、内分泌疾病和遗传病,用单克隆抗体作为诊断手段,是一个必然趋势。另外,用单克隆抗体做体内诊断,借以鉴别和定位体内“病灶”也引起人们的注意,目前,主要用于肿瘤追踪及心肌梗塞的诊断。,在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中,正确的是( ) A结果是相同的 B杂种细胞的形成过程基本相同 C操作过程中酶的作用相同 D诱导融合的手段相同,. 单克隆抗体制备过程中,骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 诱导融合后,要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞, 在这种培养基上不能存活增殖的细胞是( ) 淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞 A B C D,C,
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